花粉生活力測定

1、湖北生物科技職業(yè)學院課 時 教 案講授人張薇課 時學時序 號課題內容實訓一花粉生活力的測定教學時間設計思路先講后做，了解花粉生活力貯藏及生活力的測定方法和原理。教學目標知識目標：掌握花粉生活力測定的意義和測定方法能力目標：會進行花粉生活力的測定素質目標：培養(yǎng)學生的團隊精神和動手能力教學重、難點 及解決辦法教學重點：花粉生活力測定的原理和意義。解決辦法：通過多媒體結合案例講解后學生動手操作，教師指導。教學方法及手段演示、學做教學準備多媒體課件、植物花粉、載玻片、蓋玻片、解剖針、毛筆、干燥器、TTC教學過程及內容講解花粉生活力測定的原理和方法實際操作蔗糖瓊脂培養(yǎng)法和染色法教學過程教師活動學生活動教

2、案設計說明時間分配教學內容講解實訓原理演示實訓過程， 布置實訓任務觀看多媒體結合實訓過程講 解20min教學內容指導實訓蔗糖瓊脂培養(yǎng)法學生練習思考90min教學內容指導實訓染色法學生練習思考45min教學內容檢查實訓內容的掌握記錄實訓結果完成 實訓報告25min教學反思湖北生物科技職業(yè)學院教案附頁一、花粉生活力測定的意義在園藝植物有性雜交工作中，常因雜交親本間花期不遇，或父本植株栽在異處（地）而必須預先收集花粉?；ǚ圪A藏在低溫（04C）、干燥（相對濕度040%）、黑暗的環(huán)境下，代謝降低，可以較長時間地保持花粉生活力，但其貯藏期長短對花粉生活力的影響因品種而不同。在授粉之前，對貯藏的或外地采來的

3、花粉必須預先測定花粉的生活力，以確定哪些花粉不能用于雜交，這對取得雜交效果有直接影響。二、實訓材料及儀器藥品園藝植物的雄花、載玻片、蓋玻片、解剖針、毛筆、干燥器、 TTC三、花粉生活力的測定方法.是將待測花粉直接授粉，然后統(tǒng)計結實率和結子數(shù)。此法的缺點是需時間較長，且實 驗結果易受氣候條件的影響；.是將待測粉受到柱頭上，隔一定時間切下柱頭， 在顯微鏡下檢查花粉的萌發(fā)情況，根據(jù)萌發(fā)率的高低來鑒定花粉的生命力；.是在培養(yǎng)基上進行花粉的人工萌發(fā)，檢查待測花粉萌發(fā)率的高低。將花粉播種在特定的培養(yǎng)基上，并在一定的環(huán)境條件下來測定其發(fā)芽能力的方法。培養(yǎng)基常用蔗糖、瓊脂（1%）和蒸儲水配制而成。不同植物的花

4、粉，對蔗糖濃度要求不同，一般柑桔花粉要求25%左右，蘋果和梨1015%,桃10%左右為宜。蔗糖濃度高低可調節(jié)培養(yǎng)基的滲透壓，以防止花粉 在培養(yǎng)基上破裂。 培養(yǎng)基以微酸性為宜，一般在pH5.26之間。發(fā)芽溫度在2025 c左右，并需要空氣和濕度，為了促進花粉發(fā)芽，在培養(yǎng)基中還可加入少量的硼酸和維生素B1。利用花粉發(fā)芽試驗測定花粉生活力是一種直接的測定方法，其結果也最可靠，但操作較麻煩，要有一定設備和一定時間。.是用染色方法來鑒定花粉的生命力。其原理是在活的花粉內有過氧化氫酶存在。它可以促進過氧化物（如HO放氧分解。這些剛被放出的活性氧很容易使還原劑氧化。在本實驗 中所用的無色聯(lián)苯胺:-蔡酚都是還

5、原劑，但他們被氧化后卻都表現(xiàn)紅色或玫瑰紅色。如果花粉是活的，那么這個反應很快，則花粉被染成紅色或玫瑰紅色；如果花粉是死的，則這一反映遲遲不能進行，花粉也就保持原色。此色優(yōu)點是比較快捷，但比較間接。利用化學藥劑染色的方法測定花粉生活力，這是一種間接的測定方法，簡便而快速，但比較粗略，有時不能真實反映出有發(fā)芽力花粉的數(shù)量。四、實訓步驟1.蔗糖瓊脂培養(yǎng)法（1）培養(yǎng)基的配制：在100ml的蒸儲水中，加入瓊脂 1g、蔗糖1025g（因植物花粉種 類而異），置于燒杯中加熱煮沸，然后將該燒杯置水浴鍋或盛熱水的杯中備用，以防培養(yǎng)基冷卻凝固，適于羽衣甘藍花粉萌發(fā)的蔗糖濃度為150g/L,硼對促進羽衣甘藍花粉萌發(fā)

6、的作用最大，適宜的濃度為 20mg/L。(2)發(fā)芽床的設置和播撒花粉：在蓋玻片上滴一滴培養(yǎng)基，用棉耳棒蘸上花粉少許，均勻撒于培養(yǎng)基表面， 但應防止花粉埋入培養(yǎng)基中而影響花粉發(fā)芽。播撒花粉后，要在顯微鐐下檢查花粉是否分布均勻，再將載玻片置入用濕紗布或濕濾紙墊底以保濕的大培養(yǎng)皿中，蓋上皿蓋。在各載玻片上貼上標簽，注明花粉種類、采集時間、蔗糖濃度、播粉時間和操作者，然后置于2528c的溫箱中。(3)播花粉后的檢查：在播花粉后，根據(jù)不同植物，經不同時間，在顯微鐐下檢查花粉發(fā)芽情況。34h后檢查，每次檢查 3-5個視野，統(tǒng)計花粉總粒數(shù)和發(fā)芽粒數(shù)填寫下表。(花粉發(fā)芽以其花粉管伸長超過花粉直徑為標準)本實驗

7、6人一小組，每人每個濃度制作一個玻片，每片觀察5個視野，每視野約有100?；ǚ?，統(tǒng)計每種測定方法中具有生活力花粉的百分率，將觀察結果記入下表。蔗糖濃度視野1視野2視里? 3視里? 4視野5花粉?；ǚ哿；ǚ哿；ǚ哿；ǚ哿Ｃ劝l(fā)數(shù)萌發(fā)數(shù)萌發(fā)數(shù)萌發(fā)數(shù)萌發(fā)數(shù)萌發(fā)率萌發(fā)率萌發(fā)率萌發(fā)率萌發(fā)率花粉?；ǚ哿；ǚ哿；ǚ哿；ǚ哿Ｃ劝l(fā)數(shù)萌發(fā)數(shù)萌發(fā)數(shù)萌發(fā)數(shù)萌發(fā)數(shù)萌發(fā)率萌發(fā)率萌發(fā)率萌發(fā)率萌發(fā)率發(fā)芽數(shù)發(fā)芽數(shù)發(fā)芽數(shù)發(fā)芽數(shù)發(fā)芽數(shù)萌發(fā)數(shù)萌發(fā)數(shù)萌發(fā)數(shù)萌發(fā)數(shù)萌發(fā)數(shù)萌發(fā)率萌發(fā)率萌發(fā)率萌發(fā)率萌發(fā)率發(fā)芽數(shù)發(fā)芽數(shù)發(fā)芽數(shù)發(fā)芽數(shù)發(fā)芽數(shù)萌發(fā)數(shù)萌發(fā)數(shù)萌發(fā)數(shù)萌發(fā)數(shù)萌發(fā)數(shù)萌發(fā)率萌發(fā)率萌發(fā)率萌發(fā)率萌發(fā)率2.染色法TTC法原理：凡具有生活力的花粉，在其呼吸

8、作用過程中都有氧化還原反應， 而尢生活力的花粉則尢此反也。因此，當 TTC滲入有生活力的花粉時，花粉中 的脫氫酶在催化去氫過程中與 TTC結合，便無色的TTC變成三苯基甲(TTF)而 呈紅色。試液的配制I .磷酸鹽緩沖液。在100ml的蒸儲水中，溶解0.832g的Na2HP04 2H2O和 0.273g 的 KH 2PO4,調整 pH 值為 7.17。II .TTC溶液。稱取0.020.05g的TTC ,溶解在10ml的磷酸鹽緩沖溶液中， 放入棕色滴瓶內，置于暗處。TTC為有毒性物質，操作時應注意安全。出.步驟和方法。取少量花粉放在載玻片上，在花粉上滴 12滴的配制液， 用銀子使其混合后，蓋上

9、蓋玻片。將此載玻片置于人工氣候箱中（3540 C ）約1520min。在顯微鏡（100倍）下觀察，凡具有生活力的花粉粒呈紅色，其次呈淡 紅色，失去生活力的和小育的花粉粒表現(xiàn)無色。過氧化物酶測定法原理：具有生活力的花粉含有活躍的過氧化物酶，它能使過氧化物放出 活性氧，氧是在花粉萌發(fā)，進行許多綜合反應時必需的，使各種多酚及芳香族胺 發(fā)生氧化而產生特定顏色。因此，通過對過氧化物酶測定后的呈色反應來間接判 斷化粉后無生活力。試液的配制I . 0.20g聯(lián)苯胺溶于100ml的50%酒精溶液中。n. 0.15g -接酚?于100ml的50%酒精溶液中。m. 0.25g碳酸納溶于100ml的蒸儲水中。以上三

10、種溶液分別放入棕色瓶中備用，使用時將這三種溶液等量配成試劑 A,放入棕色滴瓶中備用。使用前配制0.3% H2O2液為試劑B,裝入棕色滴瓶中備用。步驟和方法：取花粉少量撒于載玻片上，加上試劑A和試劑B各一滴，用銀子使花粉散開，蓋上蓋玻片，3-5min后置于顯微值T觀察。 被染色后呈紅 色的花粉粒，則表示有過氧化物酶存在，花粉有生活力；能發(fā)芽，如呈黃色或 無色，則表示無生活力。本實驗6人一小組，每人制片 3片，每片觀察5個視野，每視野約有 100?；ǚ?，統(tǒng) 計每種測定方法中具有生活力花粉的百分率，將觀察結果記入下表。玻片視野1視野2視里? 3視里? 4視野5花粉?；ǚ哿；ǚ哿；ǚ哿；ǚ哿０l(fā)芽數(shù)發(fā)芽數(shù)發(fā)芽數(shù)發(fā)芽數(shù)發(fā)芽數(shù)發(fā)芽率發(fā)芽率發(fā)芽率發(fā)芽率發(fā)芽率花