人教版教學(xué)課件微生物的分離與計(jì)數(shù)

1、課題2 微生物的分離與計(jì)數(shù)專題2 :微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 課題1我們學(xué)習(xí)了培養(yǎng)基的配制以及微生物的培養(yǎng)（接種技術(shù)）。下面我們來學(xué)習(xí)如何進(jìn)行細(xì)菌的分離，獲得所需要的目的微生物，并對(duì)目的微生物進(jìn)行培養(yǎng)計(jì)數(shù)。 一、研究思路篩選菌株自然界篩選：根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。實(shí)驗(yàn)室篩選：人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件（包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。目的是從眾多微生物中分離所需要的微生物。 測(cè)定微生物數(shù)量的方法： 1、直接計(jì)數(shù)法：最常用的顯微鏡直接計(jì)數(shù)。 先將待測(cè)樣品制

2、成懸液，然后取 一定量的懸液放在顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)。根據(jù)在顯微鏡下觀察到的微生物數(shù)目來計(jì)算出單位體積內(nèi)的微生物總數(shù)。優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備簡(jiǎn)單、能觀察微生物的形態(tài)特征。缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌和活菌； 難以計(jì)數(shù)微小的細(xì)菌。 一般用于純培養(yǎng)懸浮液中各種單細(xì)胞菌體的計(jì)數(shù)。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目 2、間接計(jì)數(shù)法：最常用稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法 應(yīng)用：統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目 原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的 一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。 （注意）：一般選擇菌落數(shù)在30-300的平板 進(jìn)行記數(shù)。 稀釋度很重要，一般選擇三個(gè)稀釋度中的第二稀釋度到平板所出現(xiàn)的平

3、均菌落數(shù)在50個(gè)左右為最好。 操作：設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力和準(zhǔn)確性。將待測(cè)樣品經(jīng)過一系列的稀釋，然后選擇三個(gè)稀釋度的菌液均勻涂布在平板上，然后培養(yǎng)。 （注意）：為了結(jié)果接近真實(shí)值，可將同一稀釋度菌液涂布到3個(gè)或3個(gè)以上的平板上，經(jīng)培養(yǎng)，計(jì)算出菌落的平均數(shù)。 對(duì)照原則：判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染，將未接種的培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。 判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用，對(duì)照培養(yǎng)基接種后培養(yǎng)觀察菌落數(shù)目。 計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（C/V）*M（1）原理：尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，只有當(dāng)土壤中 的 細(xì)菌將尿素分解成氨之后，才能 被植物利用。尿素細(xì)菌能合成脲酶，在脲酶的作用下尿素被分解成氨。 CO

4、(NH2)2+H2O CO2+2NH3二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（2）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的內(nèi)容包括實(shí)驗(yàn)方案、材料用具、實(shí)施步驟和時(shí)間安排等。（3）實(shí)驗(yàn)流程： 土壤取樣 樣品系列稀釋 涂布平板與培養(yǎng) 觀察并記錄結(jié)果 菌落計(jì)數(shù) 1、土壤微生物主要分布在距地表38cm的近中性土壤中，約7080為細(xì)菌。2、分離不同的微生物采用不同的稀釋度，其原因是不同微生物在土壤中含量不同，其目的是保證獲得菌落數(shù)在30300之間、適于計(jì)數(shù)的平板。細(xì)菌稀釋度為104、105、106，放線菌稀釋度為103、104、105，真菌稀釋度為102、103、104。3、 培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。細(xì)菌一般在3037培養(yǎng)12d，放線菌一般在25

5、28培養(yǎng)57d， 霉菌一般在2528的溫度下培養(yǎng)34d。4、 在菌落計(jì)數(shù)時(shí)，每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。 點(diǎn)評(píng)：菌種中有些菌體增殖快，有些菌體增值慢，所以培養(yǎng)時(shí)間要充足，使得每個(gè)菌體都能形成肉眼可觀察到的菌落。5、菌落的特征包括 形狀、大小、隆起程度、顏色 等方面。閱讀思考三、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)（1）對(duì)分離的菌種作進(jìn)一步的鑒定，還需要借助 生物化學(xué) 的方法。 (2)在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的 脲酶 將尿素分解成了 氨 。氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性 增強(qiáng) ，PH 升高 。因此，我們可以通過檢測(cè)培養(yǎng)基 pH 變化來判斷該化

6、學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生。 (3)在以 尿素 為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入 酚紅 指示劑。培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果PH升高，指示劑將變 紅 ，說明該細(xì)菌能夠 分解尿素 。 思考10測(cè)定飲水中大腸桿菌數(shù)量的方法是將一定體積的水用細(xì)菌過濾器過濾后，將濾膜放到 伊紅美藍(lán) 培養(yǎng)基上培養(yǎng)，大腸桿菌菌落呈現(xiàn) 黑 色，通過記述得出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。你認(rèn)為在該實(shí)驗(yàn)中至少應(yīng)取 三 個(gè)水樣。四、課堂總結(jié)、點(diǎn)評(píng)實(shí)驗(yàn)方案土壤中尿素分解菌的分離與計(jì)數(shù)分離篩選微生物的原理有利于目的菌株生長(zhǎng)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)人為條件微生物計(jì)數(shù)方法與原理稀釋涂布平板法顯微鏡直接計(jì)數(shù)法對(duì)照設(shè)置與重復(fù)設(shè)置實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)操作結(jié)果與分析五、課余作業(yè) 活菌計(jì)數(shù)

7、技術(shù)廣泛應(yīng)用于土壤含菌量的測(cè)、食品衛(wèi)生和水源污染度的檢測(cè)。選做： 1、空氣中微生物總數(shù)的檢測(cè) 2、水中細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè) 3、牛奶中 細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù) 4、土壤中真菌（或放線菌）的分離與技術(shù) 練一練用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目，其結(jié)果與實(shí)際值相比（ ） A.比實(shí)際值高 B.比實(shí)際值低 C.和實(shí)際值一致 D.比實(shí)際值可能高也可能低B有些細(xì)菌含有尿素分解酶，能將尿素瓊脂培養(yǎng)基中的尿素分解生成氨，氨溶于水變成氫氧化銨，導(dǎo)致培養(yǎng)基變成堿性，使酚紅指示劑呈現(xiàn)紅色。下列能選擇出分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基是( ) A. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、葡萄糖、尿素、瓊脂、水 B. KH2PO4、NA2