公共場所內(nèi)公用毛巾細菌總數(shù)、大腸桿菌的測定

1、公共場所內(nèi)公用毛巾細菌總數(shù)的測定一.方法：涂抹法儀器1）高壓蒸汽滅菌器。2）干熱滅菌箱。3）培養(yǎng)箱:36 C 士 1,C ,4）冰箱。5）電爐。6）天平。7）滅菌平皿:直徑9 cm.8）滅菌刻度吸管：1 mL,10 raL,9）滅菌棉拭子。10）滅菌剪刀。11）放大鏡。12）PH計或精密PH試紙。2培養(yǎng)基和試劑（1） 生理鹽水成分:氯化鈉8.5 g；燕餾水10 00 m L制法:將氯化鈉（8.5 g ）溶解于蒸餾水（1 000 mL）中，分裝到試管內(nèi)，每管10 mL,121C20 min；高壓滅菌。（2）營養(yǎng)瓊脂3檢驗程序4操作步驟4-1米樣方法4.1.1隨機抽取清洗消毒后準備使用的毛巾4.1

2、.2用滅菌生理鹽水濕潤棉拭子，在毛巾、枕巾對折后兩面的中央各25 cm2（5cmX5 cm）面積范圍內(nèi)有順序地來回涂抹，用滅菌剪刀剪去棉簽手接觸的部分，將棉拭子放人10 mL生理鹽水內(nèi)，4h內(nèi)送檢。4.2檢驗方法4. 2-1將放有棉拭子的試管充分振播。此液為1:10稀釋液。4.2.2以無菌操作，吸取2mL檢樣，分別注入到兩塊滅菌平皿內(nèi)，每皿1 mL。如污染嚴重，可十倍遞增稀釋，即吸取1 mL加到9山1滅菌生理鹽水中，混勻， 此液為1： 1OO稀釋液。每個稀釋度做兩塊平皿。4.2.3將已融化冷至45C左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾人平皿，每皿約15 mL，并立 即旋搖平皿。冷凝后放36C土 1C培養(yǎng)箱培

3、養(yǎng)48h。5菌落計數(shù)方法作平皿菌落計數(shù)時，可用肉眼直接觀察，必要時用放大鏡檢查以防遺漏，在 記下各平皿的菌落數(shù)后，求出同一稀釋度各平皿生長的平均菌落數(shù)。若平皿中有 連成片狀的菌落，該平皿不宜計數(shù)；若片狀菌不到平皿中的一半，而其余一半中 菌落分布均勻，則可將此半個平皿菌落計數(shù)后乘以2,所得結(jié)果代表全皿菌落數(shù)。公用毛巾、床上臥具細菌總數(shù)按公式（1）計算：m=k*n/2m細菌總數(shù)，cfu/25 cm2k一稀釋倍數(shù)n一平均菌落數(shù)6菌落數(shù)報告方式1）9.1選擇平均菌落數(shù)在30 300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報告（見表1中 例1）.2）9.2若有兩個稀釋度，其平均菌落數(shù)均在30”300之間，則由兩菌落總

4、數(shù)之 比值來決定，若其比值小于或等于2,應報告其平均數(shù)，若大于2,則報告 其中稀釋度較低的平皿菌落數(shù)（見表1中例2、例3）,3）9.3若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應按稀釋度最高的平均菌落 數(shù)乘VA稀釋倍數(shù)報告之（見表1中例4）04）9.4若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應按稀釋度最低的平均菌落數(shù) 乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表1中例5）,5）9.5若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30-300之間，其中一個稀釋度平均 菌落數(shù)大于300，而相鄰的另一個稀釋度平均菌落數(shù)小于30，則以接近30 或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表1中例6）06）9.6若所有的稀釋度均無菌生長，報告數(shù)

5、為每毫升小于1 cfu（見表1中例7）,7）9.7菌落計數(shù)的報告，菌落數(shù)在10以內(nèi)時，按實有數(shù)值報告之，大于10。時，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，應以四舍五人法計算。為了縮短數(shù)字后面零的個數(shù)，可用10的指數(shù)來表示（見表1中報告方式欄）。在報告菌落數(shù)為“不可計”時，應注明樣品的稀釋度。例次不同稀釋度的平均菌落 數(shù)10-110-210-3兩個稀釋度菌落數(shù)之比菌落總 數(shù)（個/毫升）報告方式（個/毫升）11,365164216， 40016,000 或 1.6X10422,760462951.637,75038,000 或 3.8X10432,890602712.227,10027,1

6、00 或 2.7X1044無法計數(shù)5134,65051,3000510,000或5.1X105527115270270 或 2.7X1026無法計數(shù)1230530,50031,000 或 3.1X104公共場所內(nèi)公用毛巾大腸菌群的測定一.紙片法1.儀器1）高壓蒸汽滅菌器。2）干熱滅菌箱。3）培養(yǎng)箱：36C1C。4）冰箱。5）電爐。6）天平。7）滅菌平皿：直徑9cm。8）滅菌刻度吸管：1mL,10mL。9）滅菌棉拭子。10）滅菌剪刀。11）PH計或精密PH試紙。培養(yǎng)基和試劑1.乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)液1.1成分： TOC o 1-5 h z 蛋白胨20g豬膽鹽（或牛、羊膽鹽）5g乳糖10g0.04%漠

7、甲酚紫水溶液25ml蒸餾水1000ml1.2制法：將蛋白胨、膽鹽及乳糖溶于蒸餾水中，調(diào)pH值至7.4,加漠甲酚 紫溶液，混勻，分裝到帶有倒管的試管中，每管10ml，在115C高壓滅菌15分 鐘。（注：雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外，其他成分加倍）2伊紅美蘭瓊脂2.1成分：10g10g2g蛋白胨乳糖磷酸氫二鉀 TOC o 1-5 h z 瓊脂17g2.0%伊紅水溶液20ml0.65%美藍溶液10ml蒸餾水1000ml2.2制法：將蛋白胨、磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中，調(diào)pH值至7.1，分裝 到燒瓶內(nèi)。121C高壓滅菌15分鐘備用，臨用時加入乳糖并加熱溶化瓊脂，冷至 5055C，加入伊紅和美籃溶液，搖

8、勻，傾注平板。3革蘭氏染色液3.1結(jié)晶紫染色液：結(jié)晶紫1995 % 乙醇 20 m L10。草酸錢水溶液80 m L將結(jié)晶紫溶于乙醇中，然后與草酸錢溶液混合。3.2革蘭氏碘液：碘1g碘化鉀29蒸餾水30 0m 1將碘與碘化鉀先進行混合，加入蒸餾水少許，充分振搖，待完全溶解后，再 加蒸餾水至300m L,3.3脫色液：95 %乙 醇3.4沙黃復染液：沙黃0.2 5g95 %乙 醇 10 m L蒸餾水90 m L將沙黃溶解于乙醇中，然后用蒸餾水稀釋。4.染色法4.1將涂片在火焰上固定，滴加結(jié)晶紫染色液，染色1 min，水洗。4.2滴加革蘭氏碘液，作用1 min，水洗。4.3滴加95%乙醇脫色，約3

9、0 s，水洗。4. 4滴加復染液，復染1 min，水洗，待干，鏡檢。4.5染色結(jié)果革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。5大腸菌群快速檢驗紙片5.1門質(zhì)量要求:紙片必須符合食（飲）具用大腸菌群快速檢驗紙片質(zhì)量標準。5.2質(zhì)量標準:每張紙片5 cm X5 cm,pH值7. 0-7.4，包裝無菌，生產(chǎn)廠家經(jīng)衛(wèi) 生部門審核認可6檢驗程序草蘭氏網(wǎng)揮力芽腿#HS譴C 士】匚2站不產(chǎn)腰、不產(chǎn)氣博 C 土 1C 187 外/料札精幽登發(fā)酵管大瞻蕭辭昭性明C土?折不產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣大圈菌瑟*性產(chǎn)暇薩氣產(chǎn)童、產(chǎn)氣7操作步驟7.1米樣方法7.1.1隨機法：隨機抽取清洗消毒后準備使用的毛巾、床上臥具。7.1.2涂抹法：用測定細菌總數(shù)時米集的樣品，無需重米。7.1.3紙片法：用滅菌生理鹽水濕潤5 cmX5 cm大腸菌群快速測定紙片兩張， 分別粘貼