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文檔簡介
1、玉竹多糖的提取與測定實訓目的與要求(1)掌握玉竹多糖的提取與測定。(2)掌握從藥典資料得到某一天然藥物的含量測定方法。實訓原理 利用多糖在硫酸的作用下先水解成單糖,并迅速脫水生成糖醛或羥甲基糖醛,然后與苯酚生成橙黃色化合物。再以比色法測定。其顏色深度與粗多糖中葡聚糖的含量成正比,用分光光度法測定其含量,計算試樣中粗多糖含量。儀器與材料儀器:紫外分光光度計試樣與試劑:玉竹、5苯酚溶液、硫酸實驗步驟對照品溶液的制備: 精密稱取105干燥至恒重的無水葡萄糖對照品25mg,置250ml量瓶中,加適量水溶解,稀釋至刻度,搖勻,即得(每1ml中含無水葡萄糖0.1mg)。標準曲線的制備: 精密量取對照品溶液
2、0.2ml,0.4ml,0.6ml,0.8ml,1.0ml,分別置具塞試管中,分別加水至2.0ml。 各精密加入5苯酚溶液1ml,搖勻,迅速精密加入硫酸5ml,搖勻,放置10分鐘,置40水浴中保濕15分鐘,取出后迅速冷卻至室溫,以相應的試劑為空白。 照紫外-可見分光光度法(附錄V-A),在490nm的波長處測定吸光度,以吸光度為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標準曲線。樣品測定: 取本品粗粉1g,精密稱定。 置圓底燒瓶中,加水100ml,加熱回流1 小時,用脫脂棉濾過,如上重復提取1次,兩次濾液合并,濃縮,移至100ml 量瓶中,加水至刻度,搖勻。 精密量取2ml,加乙醇10ml,攪拌,離心,取沉淀
3、加水溶解,置50ml量瓶中,并稀釋至刻度,精密量取2ml,加入5苯酚溶液1ml,搖勻,迅速精密加入硫酸5ml,搖勻,放置10分鐘,置40水浴中保濕15分鐘,取出后迅速冷卻至室溫,以相應的試劑為空白。 照紫外-可見分光光度法(附錄V-A),在490nm的波長處測定吸光度,以吸光度為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標準曲線。紫外-可見分光光度計 它是利用物質的分子或離子對某一波長范圍的光的吸收作用,對物質進行定性分析、定量分析、及結構分析,所依據(jù)的光譜是分子或離子吸收入射光中特定波長的光而產(chǎn)生的吸收光譜。 按所吸收光的波長區(qū)域不同,分為紫外分光光度計和可見分光光度法,合稱為紫外-可見分光光度法。紫外-可
4、見分光光度計使用開機(預熱30min)開始測量時要先調(diào)節(jié)儀器的零點使用時手拿比色皿的毛玻璃面,將比色皿用蒸餾水沖洗幾遍,然后用待測溶液沖洗兩次,然后將待測溶液加入比色皿中,加入溶液體積約為比色皿的2/3或3/4,比色皿外壁用擦鏡紙擦干。選擇波長。測定物質吸光度,記錄吸光度值。測定結束,清理。紫外可見分光光度計注意事項開機前將樣品室內(nèi)的干燥劑取出,儀器自檢過程中禁止打開樣品室蓋。比色皿內(nèi)溶液以皿高的2/34/5為宜,不可過滿以防液體溢出腐蝕儀器。測定時應保持比色皿清潔,池壁上液滴應用擦鏡紙擦干,切勿用手捏透光面。測定紫外波長時,需選用石英比色皿。測定時,禁止將試劑或液體物質放在儀器的表面上,如有溶液溢出或其
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