齊魯醫(yī)學(xué)外來化合物對細(xì)胞生理代謝的影響急性ZnCl2染毒對小麥幼苗SOD活力影響

1、精品醫(yī)學(xué)文檔 精品醫(yī)學(xué)文檔 PAGE 精品醫(yī)學(xué)文檔 山 西 大 學(xué)本科實(shí)驗(yàn)報(bào)告學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院學(xué)生姓名 鐘日龍 專業(yè) 生物工程 學(xué)號(hào) 2009316044 年級(jí) 2009級(jí) 指導(dǎo)教師 李翠蘭 教務(wù)處制表二一一 年 十二 月 二十 日 外來化合物對細(xì)胞生理代謝的影響急性ZnCl2染毒對小麥幼苗SOD活力影響鐘日龍 （山西大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院 山西 太原 030006）摘要：本實(shí)驗(yàn)以急性ZnCl2和小麥幼苗為實(shí)驗(yàn)材料，研究了不同濃度(ZnCl2的濃度分別是100mg/mL、200mg/mL、400mg/mL、800mg/mL、1600mg/mL)對小麥幼苗生理活性的影響，初步闡明了Zn+2對小麥幼苗

2、的毒害機(jī)理。結(jié)果表明，結(jié)果以濃度400 mg/mL處理最佳,能夠顯著促進(jìn)小麥根系的生長,根長、根重和根系活力分別比對照顯著提高。在Zn+2脅迫下，隨處理濃度的升高，小麥幼苗葉片中超氧化物歧化酶(SOD)活性呈上下波動(dòng)的趨勢。通過對各組SOD值的分析可知，濃度小于100mg/L的Zn+2促進(jìn)SOD同工酶的表達(dá)，濃度大于800mg/L的Zn+2抑制SOD同工酶的表達(dá)，中間濃度呈波動(dòng)性影響， 低濃度的ZnCl2可誘導(dǎo)小麥幼苗SOD的表達(dá)，而高濃度的ZnCl2會(huì)抑制SOD的活性。關(guān)鍵詞：外來化合物； ZnCl2； 小麥幼苗組織； SOD酶活性 1.材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1.1材料：小麥幼苗:實(shí)驗(yàn)

3、室固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)1.1.2試劑：0.05mol/l PBS緩沖液（PH7.0） SOD試劑盒 冰醋酸 5個(gè)不同濃度ZnCl2溶液（100mg/l 200mg/l 400mg/l 800mg/l 1600mg/l）1.1.3器材：離心機(jī) 分光光度計(jì) 天平 恒溫水浴鍋 冰浴 微量移液器（100ul 50ul） 研缽 離心管 一次性塑料管1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1 ZnCl2染毒處理實(shí)驗(yàn)及粗酶提取液的制備浸種5-6 h，萌發(fā)24-36h后將露白的種子隨機(jī)擺放于培養(yǎng)皿中，30-40粒/皿左右，生長7天后，分別用不同濃度的ZnCl2溶液處理9天后，取莖葉0.2-0.3g，按1:20加入遇冷的PBS液（1

4、/3用于研磨，2/3用于清洗，小范圍研磨，便于沖洗），冰浴研磨，倒入離心管，并用剩余的PBS液沖洗入離心管。8000rpm離心15min，上清液即為5%的粗酶提取液，用于SOD酶活性的測定。1.2.2總SOD酶活力測定（按下表進(jìn)行）試劑測定管（4個(gè)）對照管（1個(gè)）SOD試劑11ml1ml粗酶提取液40ul-蒸餾水-40ulSOD試劑20.1ml0.1mlSOD試劑30.1ml0.1mlSOD試劑40.1ml0.1ml充分搖勻，置37水浴40min顯色劑2ml2ml 混勻，室溫放置10min，于波長550nm處，1cm光徑比色杯，蒸餾水調(diào)零，比色，測定各管OD值。2.結(jié)果與分析2.1小麥莖葉SO

5、D酶活力測定結(jié)果注：1%的粗酶提取液稀釋倍數(shù)為100倍/g第一組小麥莖葉SOD酶活力測定結(jié)果（0mg/l ZnCl2處理9天）（表1）測定管（4個(gè)）對照管1個(gè)1234OD值1.1521.1501.1671.1401.167總SOD酶活力（u/g）0.9671021.0961021.0961021.741102SOD平均值標(biāo)準(zhǔn)差(1.2250.349) 102第二組小麥莖葉SOD酶活力測定結(jié)果（100mg/l ZnCl2處理9天）（表2）測定管（4個(gè)）對照管1個(gè)1234OD值1.0891.0161.0301.0521.163總SOD酶活力（u/g）4.7881029.5111028.606102

6、7.182102SOD平均值標(biāo)準(zhǔn)差(7.5222.059) 102第三組小麥莖葉SOD酶活力測定結(jié)果（200mg/l ZnCl2處理9天）（表3）測定管（4個(gè)）對照管1個(gè)1234OD值1.1461.1461.1441.1351.165總SOD酶活力（u/g）1.2271021.2271021.3561021.938102SOD平均值標(biāo)準(zhǔn)差(1.4370.339) 102第四組小麥莖葉SOD酶活力測定結(jié)果（400mg/l ZnCl2處理9天）（表4）測定管（4個(gè)）對照管1個(gè)1234OD值0.9540.9390.9940.9841.241總SOD酶活力（u/g）17.40310218.312102

7、14.97710215.584102SOD平均值標(biāo)準(zhǔn)差(16.5691.553) 102第五組小麥莖葉SOD酶活力測定結(jié)果（800mg/l ZnCl2處理9天）（表5）測定管（4個(gè)）對照管1個(gè)1234OD值1.0060.9960.9930.9721.160總SOD酶活力（u/g）4.9951025.3191025.4171026.098102SOD平均值標(biāo)準(zhǔn)差(5.4570.464) 102第六組小麥莖葉SOD酶活力測定結(jié)果（1600mg/l ZnCl2處理9天）（表6）測定管（4個(gè)）對照管1個(gè)1234OD值1.0551.0611.0611.0731.284總SOD酶活力（u/g）6.7101

8、026.5351025.7141026.183102SOD平均值標(biāo)準(zhǔn)差(6.2860.440) 102不同濃度ZnCl2處理后小麥莖葉總SOD酶活性（表7）ZnCl2濃度（mg/L）各重復(fù)的SOD總活力（U）總SOD平均值標(biāo)準(zhǔn)差12340（對照組）96.72109.62109.62174.10(1.2250.349) 102100478.80951.14860.55718.21(7.5222.059) 102200122.73122.73135.64193.78(1.4370.339) 1024001740.31831.21497.71558.4(16.5691.553) 102800499.

9、50531.94541.67609.78(5.4570.464) 1021600671.04653.46571.41618.29(6.2860.440) 102 不同ZnCl2處理組之間SOD酶活力的t檢驗(yàn)P值（或X2檢驗(yàn)P值）（表8）P0mg/l100mg/l200mg/l400mg/l800mg/l1600mg/l100mg/l0.000-200mg/l0.7890.000-400mg/l0.0000.0000.000-800mg/l0.0000.0160.0000.000-1600mg/l0.0000.1300.0000.0000.302-（P0.05，差異不顯著；P0.05，差異顯著，

10、記作* ；P0.01，差異極顯著，記作* ）3. 討論通過分析圖表可知，ZnCl2濃度在0.00100.00mg/l時(shí)，SOD酶的活性隨著ZnCl2的濃度的升高而增強(qiáng)，并在100.00mg/l時(shí)達(dá)到最大；在100.00200.00mg/l時(shí)，SOD酶的活性隨著ZnCl2的濃度的升高而減小，并在200.00mg/l時(shí)達(dá)到最小；在200.00400.00mg/l時(shí)，SOD酶的活性隨著ZnCl2的濃度的升高而增強(qiáng)，并在400.00mg/l時(shí)達(dá)到最大；在400.00800.00mg/l時(shí)，SOD酶的活性隨著ZnCl2的濃度的升高而減小，并在800.00mg/l時(shí)達(dá)到最?。辉谶@之后又隨著ZnCl2濃度的

11、增高SOD的活性增加。Zn屬重金屬，有毒性，對小麥進(jìn)行毒染ZnCl2處理后，會(huì)使其莖葉組織蛋白受損，尤其是SOD酶的活性變化，采用不同濃度的ZnCl2感染處理小麥幼苗，可使SOD的活性受影響程度也不同：當(dāng)用低濃度ZnCl2的處理后，會(huì)使其SOD的活性顯著增強(qiáng)，當(dāng)再增加ZnCl2的濃度時(shí)，幼苗體內(nèi)的SOD已不能清除重金屬Zn的影響，反而是其活力大大減小。本實(shí)驗(yàn)以小麥幼苗為實(shí)驗(yàn)對象，采用SOD試劑盒檢測SOD活力，利用吸光度值來確定SOD活力，重復(fù)和隨機(jī)性都好，而且有對照，使實(shí)驗(yàn)比較真實(shí)可信。從Zn毒性的氧化損傷出發(fā)，測定染ZnCl2后小麥幼苗莖葉組織中SOD活性的變化，從此討論ZnCl2對小麥幼

12、苗莖葉組織SOD酶活性的影響，為研究細(xì)胞分子水平上的毒性機(jī)理提供了科學(xué)依據(jù)。由圖和表8可以看出ZnCl2濃度在400mg/L左右時(shí)，小麥幼苗莖葉組織SOD酶活性值達(dá)最大，隨著ZnCl2濃度的升高或降低，其活性值將降低。即當(dāng)ZnCl2濃度大于400mg/L時(shí)，其對小麥幼苗所產(chǎn)生的毒性將無法被SOD酶所解除。ZnCl2濃度為200mg/l時(shí)的SOD活性與正常的SOD活性差異不顯著，即此時(shí)Zn的毒性對小麥幼苗的影響不大；濃度為400mg/l與對照組的SOD活性差異顯著，說明SOD酶開始大量的起作用；濃度大于400mg/l是與對照組的SOD活性差異顯著，說明SOD酶已不起作用來解除Zn的毒性。參考文獻(xiàn)

13、1王海鷗,鐘廣蓉,劉曉峰,弓愛君,李曉晶. 小麥在銅、鎘脅迫下體內(nèi)含巰基物質(zhì)對解毒機(jī)制的研究J. 華北農(nóng)學(xué)報(bào), 2008,(03) . 2 楊漢民 細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（第二版） 北京：高等教育出版社 2011年7月 3 王秋英 王寧 大鼠急性羰基鎳中毒肝臟SOD酶活力及其基因表達(dá)的觀察 工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病 2011年04期 4 Sun Ping; Zhao JuMei Diluted povidone-iodine inhibits tumor growth through apoptosis-induction and suppression of SOD activity Oncology re

14、ports Epub 2011 Nov 08 5 HadjiSfaxiI,Ezzine A Combined Proteomic and Molecular Approaches for Cloning and Characterization of Copper-Zinc Superoxide dismutase (Cu, Zn-SOD2) from Garlic (Allium sativum) Mol Biotechnol 2011 Dec 8 Foreign compounds to the influence of the cell physiological metabolismA

15、cute ZnCl2 poisonous to wheat-seedling SOD vitality effectZhong rilong(shanxi university life science college of taiyuan shanxi 030006)Abstract: In this experiment, acute ZnCl2 and wheat seedlings as experimental material, different concentrations (ZnCl2 concentrations were 100mg/mL, 200mg/mL, 400mg

16、/mL, 800mg/mL, 1600mg/mL) on the physiological activities of wheat seedlings the impact of the initial Zn 2 illustrates the toxic mechanism of wheat seedlings. The results show that the results of the concentration of 400 mg / mL the best treatment can significantly promote the growth of wheat roots

17、, root length, root weight and root activity were significantly increased compared with the control. In the Zn 2 stress, dealing with the increased concentration of wheat seedlings superoxide dismutase (SOD) activity goes to the next wave of trends. SOD values for each group by the analysis, the concentration is less than 100mg / L of Zn 2 SOD isozyme expression for the concentration is greater than 800mg / L of Zn 2 SOD isozyme inhibiti