流式細(xì)胞術(shù)及其科研應(yīng)用

1、流式細(xì)胞術(shù)及其科研應(yīng)用流式細(xì)胞儀的原理流式細(xì)胞術(shù)的基本概念流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry, 簡(jiǎn)稱FCM）是一種可以快速、準(zhǔn)確、客觀，并且同時(shí)檢測(cè)單個(gè)微粒（通常是細(xì)胞）的多項(xiàng)特性，并加以定量的技術(shù)，同時(shí)可以對(duì)特定群體加以分選研究對(duì)象為生物顆粒，如各種細(xì)胞、微生物及人工合成微球等研究的微粒特性包括多種物理及生物學(xué)特征，并加以定量流式細(xì)胞術(shù)的特點(diǎn)極短時(shí)間內(nèi)可分析大量細(xì)胞，只要標(biāo)本中的細(xì)胞數(shù)量足夠，流式細(xì)胞儀（Flow cytometer）可以每秒鐘數(shù)十、數(shù)百、數(shù)千個(gè)細(xì)胞的速率進(jìn)行測(cè)量，測(cè)量的細(xì)胞總數(shù)可達(dá)數(shù)千、數(shù)萬(wàn)乃至數(shù)百萬(wàn)個(gè)。 可同時(shí)分析單個(gè)細(xì)胞的多種特征，當(dāng)同時(shí)用多種分子探針，如用不同熒

2、光素標(biāo)記的不同單克隆抗體進(jìn)行多色熒光染色，通過(guò)流式細(xì)胞分析，即可獲得單細(xì)胞的多種信息，使細(xì)胞亞群的識(shí)別、計(jì)數(shù)更為準(zhǔn)確。定性或定量分析細(xì)胞：通過(guò)熒光染色對(duì)單細(xì)胞的某些成分如DNA含量、抗原或受體表達(dá)量、Ca2+濃度、酶活性以及細(xì)胞的功能等均可進(jìn)行單細(xì)胞水平的定性與定量分析 強(qiáng)大的分選功能，在分析的同時(shí)可以對(duì)特定群體加以分選流式細(xì)胞儀的檢測(cè)范圍細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞大小細(xì)胞粒度細(xì)胞表面面積核漿比例DNA含量與細(xì)胞周期RNA含量蛋白質(zhì)含量細(xì)胞功能細(xì)胞表面/胞漿/核的特異性抗原細(xì)胞活性細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子酶活性激素結(jié)合位點(diǎn)細(xì)胞受體當(dāng)前流式細(xì)胞分析發(fā)展趨勢(shì)從相對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)到絕對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù) 從相對(duì)定量到絕對(duì)定量分析從單色到多

3、色熒光分析 從細(xì)胞膜成分到細(xì)胞內(nèi)成分分析從細(xì)胞分析到可溶性成分的流式細(xì)胞分析 散射光信號(hào)Right Angle Light Detector Cell ComplexitySSCForward Light Detector Cell Surface Area FSCIncident Light Source前向角散射光（FSC, Forward Scatter）細(xì)胞相對(duì)大小及其表面積 側(cè)向角散射光（SSC, Side Scatter）細(xì)胞粒度及細(xì)胞內(nèi)相對(duì)復(fù)雜性LaserFALS Sensor外周全血細(xì)胞散射光雙參數(shù)點(diǎn)圖（紅細(xì)胞溶解后）流式細(xì)胞儀的檢測(cè)信號(hào)熒光信號(hào)使用熒光標(biāo)記的單克隆抗體染色，做

4、多色分析熒光信號(hào)的強(qiáng)弱，反映了細(xì)胞抗原的表達(dá)含量熒光信號(hào)雙色直接染色數(shù)據(jù)分析直方圖分析數(shù)據(jù)分析點(diǎn)圖分析數(shù)據(jù)分析等高圖和密度圖分析數(shù)據(jù)分析三維圖分析流式細(xì)胞儀的應(yīng)用臨床研究: 血液、腫瘤、藥理、免疫.生物學(xué)研究：遺傳、生殖、微生物、細(xì)胞生物、毒理、分子生物、.環(huán)境研究：海洋生態(tài)研究.制藥工業(yè)食品工業(yè)農(nóng)業(yè)畜牧業(yè)流式細(xì)胞儀的應(yīng)用領(lǐng)域流式細(xì)胞儀的臨床應(yīng)用(免疫)淋巴細(xì)胞免疫分型淋巴細(xì)胞亞群分析CD4絕對(duì)計(jì)數(shù)HIV的診斷與研究淋巴細(xì)胞 CD4/CD8分析CD4絕對(duì)計(jì)數(shù)T細(xì)胞活化細(xì)胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測(cè)免疫功能和免疫調(diào)控的研究淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的活化檢測(cè)細(xì)胞因子的檢測(cè)HLA-B27檢測(cè)流式細(xì)胞儀的

5、臨床應(yīng)用(血液)白血病和淋巴瘤免疫分型殘留白血病造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)PNH診斷網(wǎng)織紅細(xì)胞分析血小板分析血小板膜糖蛋白分子的表達(dá)血小板活化網(wǎng)織血小板分析流式細(xì)胞儀的臨床應(yīng)用(腫瘤)細(xì)胞周期分析DNA非整倍體的出現(xiàn)可能是癌前病變發(fā)生早期癌變的一個(gè)重要標(biāo)志在L&L病理形態(tài)學(xué)不能做出診斷前可提供確切診斷信息DNA非整倍體的交界瘤應(yīng)按惡性對(duì)待形態(tài)學(xué)表現(xiàn)良性的腫瘤出現(xiàn)非整倍體提示惡變可能DNA指數(shù)可作為判斷間葉組織腫瘤良惡性的輔助指標(biāo)多藥耐藥基因的檢測(cè)流式細(xì)胞儀的科研應(yīng)用樹(shù)突細(xì)胞研究干細(xì)胞研究細(xì)胞凋亡細(xì)胞動(dòng)力學(xué)功能研究環(huán)境微生物分析流式細(xì)胞術(shù)與分子生物學(xué)研究淋巴細(xì)胞亞群分析根據(jù)功能，淋巴細(xì)胞主要分為B淋巴細(xì)胞（

6、CD19+），與體液免疫有關(guān)T淋巴細(xì)胞（CD3+），與細(xì)胞免疫有關(guān)總T和總B可以用來(lái)判斷某些免疫缺陷和自身免疫性疾病 NK細(xì)胞（CD3-CD16+56+），行使免疫監(jiān)控功能， 能夠介導(dǎo)對(duì)某些腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。淋巴細(xì)胞亞群分析根據(jù)CD4、CD8表達(dá)，T淋巴細(xì)胞又分為T(mén)輔助/誘導(dǎo)細(xì)胞（CD3+CD4+）T抑制/細(xì)胞毒性細(xì)胞（CD3+CD8+）Th/Ts 評(píng)價(jià)那些自身免疫失調(diào)或被懷疑是免疫失調(diào)或已知患有免疫缺陷的病人的免疫狀態(tài)，此外，這一比值還可用來(lái)監(jiān)測(cè)骨髓移植病人以免受到急性GVHD的攻擊 Th/Ts升高：自身免疫性疾病（類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、SLE） Th/Ts降低：病毒感染、惡性

7、腫瘤、再生障礙性貧血常見(jiàn)疾病的T 淋巴細(xì)胞的變化：疾病 CD4+ CD8+ CD4+/CD8+ 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 （活動(dòng)期） 系統(tǒng)性紅斑狼瘡 - 或 （活動(dòng)期） 多發(fā)性硬化癥 重癥肌無(wú)力 膜型腎小球腎炎 胰島素依賴性糖尿病 乙型肝炎 自身溶血性貧血 上呼吸道感染 常見(jiàn)疾病的T 淋巴細(xì)胞的變化 CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+ 腫瘤 再障及粒細(xì)胞減少癥 巨細(xì)胞病毒感染 血小板減少 活動(dòng)性特應(yīng)性皮炎 過(guò)敏性皮炎 淋巴細(xì)胞亞群雙色分析12%76%49%26%11%AIDS 病人T亞群分析27-51%15-44%50-84%先天性無(wú) r 球蛋白血癥5-18%淋巴細(xì)胞活化功能研究T淋巴細(xì)胞

8、活化細(xì)胞數(shù)目增殖細(xì)胞表面表達(dá)活化標(biāo)記分泌細(xì)胞因子T細(xì)胞激活抗原表達(dá)的動(dòng)力學(xué)曲線活化的淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子FastImmune Assay System快速全面檢測(cè)淋巴細(xì)胞功能 BD FastImmune Activation System快速免疫活化檢測(cè)系統(tǒng)lymphocyte Activation 4hStain15minLyse/Fix15minAcqusitionerythrocytestimulus優(yōu)點(diǎn)快速全程5h簡(jiǎn)便全血分析（肝素鈉抗凝血）無(wú)需分離PBMCs無(wú)需組織培養(yǎng)免洗試劑，無(wú)需洗滌離心高效多參數(shù)分析加速研究進(jìn)程功能活性檢測(cè)同時(shí)報(bào)告單個(gè)細(xì)胞亞型可外延T細(xì)胞分析可進(jìn)行亞群分析可外延

9、于B、NK、單核細(xì)胞接近生物體自身分析條件應(yīng)用全血保留了細(xì)胞與生化微環(huán)境更能代表體內(nèi)狀態(tài)BD FastImmune Activation System快速免疫活化檢測(cè)系統(tǒng)應(yīng)用實(shí)例：HIV病例T細(xì)胞活化檢測(cè)BD FastImmune Cytokine System快速免疫細(xì)胞因子檢測(cè)系統(tǒng) AntiIFNgCD69 Activation 37 IncubationIntracellular StainLyse/FixAcqusitionPermeabilizelymphocyteerythrocytestimulusSurface StainWashcytokineWashWashprotein

10、blocking基于細(xì)胞水平的研究胞內(nèi)因子胞外因子優(yōu)點(diǎn)快速一天內(nèi)完成，實(shí)驗(yàn)流程需6-8小時(shí)簡(jiǎn)便全血分析（肝素鈉抗凝血）無(wú)需分離PBMCs無(wú)需組織培養(yǎng)高效可在同一個(gè)細(xì)胞內(nèi)同時(shí)檢測(cè)兩種或更多種細(xì)胞因子也可根據(jù)細(xì)胞免疫表型區(qū)分分泌細(xì)胞因子的細(xì)胞亞型，進(jìn)行多參數(shù)相關(guān)分析接近生物體自身分析條件應(yīng)用全血保留了細(xì)胞與生化微環(huán)境更能代表體內(nèi)狀態(tài)注意 質(zhì)控：用CD69做刺激和破膜效果的判定BD FastImmune Cytokine System快速免疫細(xì)胞因子檢測(cè)系統(tǒng)應(yīng)用實(shí)例：分析1型與2型免疫反應(yīng)Cytometric Beads Array (CBA)流式液相多重蛋白定量技術(shù)導(dǎo)言常規(guī)的蛋白分析方法：ELIS

11、A：一次反應(yīng)只能檢測(cè)一個(gè)指標(biāo)Western blot：不能對(duì)蛋白精確定量不足之處：檢測(cè)多個(gè)指標(biāo)需耗費(fèi)大量樣本分批操作導(dǎo)致組間差異大操作繁瑣，耗時(shí)耗力如何能夠從單個(gè)微量樣本中一次檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)蛋白，并加以定量，獲得高精確度的數(shù)據(jù)呢？針對(duì)于此，BD-Pharmingen成功研發(fā)了基于流式細(xì)胞儀檢測(cè)平臺(tái)的液相多重蛋白定量技術(shù)BD Cytometric Bead Array，簡(jiǎn)稱CBA CBA技術(shù)簡(jiǎn)介CBA是一系列帶有不同強(qiáng)度紅色熒光、包被有捕獲抗體的微球，類似ELISA的捕獲孔板，可以捕獲液相樣本（血清、血漿或者細(xì)胞培養(yǎng)上清液等）中相應(yīng)的抗原，再結(jié)合PE標(biāo)記檢測(cè)抗體，形成雙抗體夾心結(jié)構(gòu)，通過(guò)流式細(xì)胞儀

12、進(jìn)行熒光檢測(cè)，便可同時(shí)對(duì)樣本中的多種可溶性蛋白成分進(jìn)行定量+Analyte of interestFluorescent detection Ab capture Bead capture AbBeadBD Cytometric Bead Array123不同強(qiáng)度紅色熒光的捕獲微球，在FCM FL3檢測(cè)不同的目標(biāo)蛋白PE 標(biāo)記的檢測(cè)抗體，在FCM FL2檢測(cè)。 PE的熒光強(qiáng)度即反映靶蛋白的含量456Human Th1/Th2 Lymphokine CBAHuman Th1/Th2 Lymphokine CBATh1/Th2 panel: IL2, IL4, IL5, IL10, TNF, IF

13、N用 FL3熒光的強(qiáng)度不同區(qū)別 種不同的微球（beads）Direct sandwich immunoassayFL2 (PE) detector reagent樣本處理6 cytokines from a 50 L sampleThree pipetting steps3 hour total incubationQuantitative results and complete report generationSoftware assisted quantitative analysis, with curve fitting algorithmResult reporting incl

14、uded in softwareHuman Th1/Th2 Lymphokine CBAHuman Th1/Th2 Cytokine CBA KitNo sample added inDetector antibodies only Chemokine-I CBA Assay Standard0 pg/mlCBA Assay Standard 10 pg/mlCBA Assay Standard cont.Chemokine-I CBA Assay Standard20 pg/mlCBA Assay Standard cont.Chemokine-I CBA Assay Standard40

15、pg/mlCBA Assay Standard cont.Chemokine-I CBA Assay Standard80 pg/mlCBA Assay Standard cont.Chemokine-I CBA Assay Standard156 pg/mlCBA Assay Standard cont.Chemokine-I CBA Assay Standard312 pg/mlCBA Assay Standard cont.Chemokine-I CBA Assay Standard625 pg/mlCBA Assay Standard cont.Chemokine-I CBA Assa

16、y Standard1250 pg/mlCBA Assay Standard cont.Chemokine-I CBA Assay Standard2500 pg/mlCBA Assay Standard cont.Chemokine-I CBA Assay StandardHuman Th1/Th2 Lymphokine CBA 標(biāo)準(zhǔn)曲線5000 pg/ml2500 pg/ml1250 pg/ml625 pg/ml312 pg/ml80 pg/ml20 pg/mlIL-2IL-4IL-5IL-10TNF-IFN-IL-2IL-4IL-5IL-10TNF-IFN-操作步驟檢測(cè)物與捕獲微球共孵育

17、。洗滌。標(biāo)記熒光探測(cè)試劑（FITC或PE標(biāo)記）。洗滌。流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)。CBA分析軟件批量數(shù)據(jù)分析。CBA 分析軟件Home ScreenToolbarCalibration entry screen與傳統(tǒng)的ELISAs檢測(cè)相比能夠同時(shí)對(duì)單一樣本進(jìn)行多種目的蛋白檢測(cè)較傳統(tǒng)檢測(cè)節(jié)省樣本量（50l）與ELISAs相比靈敏度高（2.8pg/ml）、重復(fù)性好檢測(cè)的線性范圍寬（0-5000pg/ml）所有分析只需一組標(biāo)準(zhǔn)曲線避免酶聯(lián)反應(yīng)所致人工假象強(qiáng)大的CBA分析軟件節(jié)省操作時(shí)間、檢測(cè)時(shí)間和分析時(shí)間Human Allergy Mediator Kit使用Prostate-specific antige

18、n（PSA-3）及其突變體PSA-3A對(duì)前列腺癌患者T細(xì)胞免疫，通過(guò)Human Th1/Th2 Cytokine CBA Kit檢測(cè)免疫T細(xì)胞的細(xì)胞因子分泌水平A，B，C為稀釋標(biāo)準(zhǔn)，D為無(wú)處理對(duì)照組，E為PSA-3A處理組，F(xiàn)為PSA-3處理組摘自Terasawa H, et al. Clinical Cancer Research.Vol.8,41-53, January 2002上述研究發(fā)現(xiàn)PSA-3A比PSA-3能更有效的殺傷前列腺腫瘤，與PSA-3A能刺激T細(xì)胞分泌更高水平的IL-2、IL-4、IL-5和IFN-有關(guān)，為后續(xù)藥物開(kāi)發(fā)打下基礎(chǔ)CBA新產(chǎn)品系列CBA Flex Set基本原

19、理與CBA Kit相似，略有不同檢測(cè)原理：Flex Set微球帶有近紅外和紅色兩種熒光，分別在流式細(xì)胞儀的FL3（近紅外熒光）和FL4（紅色熒光）通道檢測(cè)，通過(guò)這個(gè)二維矩陣（對(duì)應(yīng)于微球上的特定序號(hào)）識(shí)別捕獲微球，從而鑒定目的蛋白，PE標(biāo)記的檢測(cè)抗體在FL2通道來(lái)對(duì)目的蛋白定量newCBA Flex Set的分析軟件 FCAP Array SoftwareCBA Kit與CBA Flex SetCBA Kit同時(shí)檢測(cè)5、6或者7個(gè)全部試劑CBA Analysis Software檢測(cè)指標(biāo)組合固定CBA Flex Set最多達(dá)75個(gè)需另購(gòu)Buffer kitFCAP Array Software檢

20、測(cè)指標(biāo)可自由組合CBA/CBA Flex set的應(yīng)用領(lǐng)域血清、血漿、眼淚、房水、唾液、體腔灌洗液、細(xì)胞培養(yǎng)液上清、細(xì)胞裂解物等各種液相樣本中可溶性細(xì)胞因子、炎癥因子、趨化因子、酶等的濃度檢測(cè)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中磷酸化蛋白、凋亡相關(guān)蛋白定量分析 免疫疾病或傳染疾病（如眼部疾病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、新生兒溶血癥及膿血癥、病毒性感染等）的輔助診斷和監(jiān)控腫瘤研究藥效評(píng)價(jià)，藥物研發(fā)、疫苗研究總體免疫功能分析現(xiàn)有CBA Kit產(chǎn)品Human Allergy Mediator KitIL-3, IL-4, IL-5, IL-7, IL-10, GM-CSFHuman Allergy Mediator

21、 Kit IIIL-3, IL-4, GM-CSF, G-CSF, EotaxinHuman Anaphylatoxin KitC4a, C3a, C5aHuman Angiogenesis KitIL-8, bFGF, Angiogenin, VEGF, TNFHuman Chemokine KitIL-8, RANTES, MIG, MCP-1, IP-10Human Chemokine Kit IIIL-8, RANTES, MIP-1a, MIP-1b, MCP-1Human Inflammation KitIL-8, IL-1b, IL-6, IL-10, TNF, IL-12p70

22、Human Th1/Th2 Cytokine KitIL-2, IL-4, IL-5, IL-10, TNF, IFN-gHuman Th1/Th2 Cytokine II Kit IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-gMouse Inflammation KitIL-6, IL-10, MCP-1, IFN-g, TNF, IL-12p70Mouse Th1/Th2 Cytokine KitIL-2, IL-4, IL-5, IFN-g, TNFNon-human Primate Th1/Th2 Cytokine KitIL-2, IL-4, IL-5, IL

23、-6,TNF, IFN-gHuman Apoptosis KitCleaved PARP, Bcl-2, Active Caspase-3Mouse Immunoglobulin Isotyping KitHeavy and light chain isotypes of mouse IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA, IgM, IgEHuman Inflammation Lyophilized StandardsIL-8, IL-1b, IL-6, IL-10, TNF, IL-12p70Human Th1/Th2 Cytokine Lyophilized Stan

24、dardsIL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, TNF, IFN-gMouse Inflammation Lyophilized StandardsIL-6, IL-10, MCP-1, TNF, IFN-g, IL-12p70Mouse Th1/Th2 Cytokine Lyophilized StandardsIL-2, IL-4, IL-5, IFN-g, TNF信號(hào)傳導(dǎo)類細(xì)胞因子類磷酸化蛋白人 小鼠 大鼠ERK (T202/Y204) JNK (T183/Y185)p38/MAPK (T180/Y182)PLC-gamma (Y783)ZAP70 (Y319)S

25、yk (Y352)Stat1 (Y701)Btk (Y551)RSK (T573)Itk (Y511)eNos (S1177)ZAP70（Y319）Total SykTotal Stat1IFN-IL-2IL-4IL-5IL-6IL-8IL-10IL-1IP-10IL-12p70LT-MIGMCP-1MIP-1 TNFIFN- IL-2IL-4TNFIL-10IL-6IL-5IL-12p70 IFN- IL-4TNFIL-10IL-6 現(xiàn)有CBA Flex Set產(chǎn)品樹(shù)突狀細(xì)胞（Dendritic Cell，DC）DC的分化和成熟DC可分為前體DC，未成熟DC，成熟DCDC起源于骨髓CD34+

26、多能細(xì)胞，在GM-CSF作用下，進(jìn)一步分化為DC前體細(xì)胞，包括髓系前體和淋巴系前體，并離開(kāi)骨髓進(jìn)入外周血。在外周血中至少有兩種DC前體被鑒定出來(lái)： Plasmacytoid DCPDC漿細(xì)胞樣的樹(shù)突細(xì)胞 Myeloid DCMDC髓樣的樹(shù)突細(xì)胞血液中的前體DC隨血液遷移到皮膚、胃腸道、心、肝、肺等非淋巴器官發(fā)育為未成熟DC未成熟DC攝取外來(lái)抗原后，可自發(fā)成熟，由外周向次級(jí)淋巴器官歸巢在成熟過(guò)程中，DC攝取和加工處理外來(lái)抗原的能力逐漸減弱，而遞呈抗原的功能逐漸增強(qiáng)A review of Jacques Banchereau樹(shù)突狀細(xì)胞的可塑性DC在不同細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子的作用下可以向著不同的方向分

27、化 DC分化過(guò)程中的不同刺激引導(dǎo)它們向多種組織和器官移動(dòng)，在這些組織中擔(dān)當(dāng)起對(duì)抗入侵感染因素的哨兵DC的表面標(biāo)志人DC的主要特征性表面標(biāo)志為CD1a和CD83，CD83還是DC充分成熟的標(biāo)志。成熟DC高表達(dá)CD80（B7-1），CD86，CD40和CD54等共刺激分子，而未成熟DC不表達(dá)或低表達(dá)這些分子未成熟DC具有強(qiáng)大的內(nèi)吞作用，并高表達(dá)大多數(shù)趨化因子受體所有DC共同的突出特點(diǎn)是能高水平表達(dá)MHC-II類分子如HLA-DR，DC成熟過(guò)程突出的標(biāo)志是MHC-II類分子的重分布，從主要在細(xì)胞漿內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)橹饕诩?xì)胞膜表面。 人外周血DC亞群的鑒定PDC：linnegCD11cnegCD123high

28、；MDC：linnegCD11chighCD123low 二者還都高表達(dá)MHC-（HLA-DR），但都不表達(dá)lin（CD3，CD14，CD16，CD19，CD20，CD56）注：CD11c：整合素x鏈 CD123：IL-3受體鏈DC體外誘導(dǎo)分化監(jiān)控DC成熟度BD Multicolor MDDC phenotyping reagentCD209 (DC-SIGN)：DC獨(dú)有標(biāo)志CD83：充分成熟標(biāo)志CD86：DC成熟過(guò)程中表達(dá)增加小鼠DC小鼠DC的標(biāo)志是CD11c，成熟DC也有MHC-和CD80，CD86的表達(dá)小鼠DC前體主要分為兩類：功能上等同于人MDC和PDC小鼠DC制備：小鼠骨髓BD IM

29、ag Mouse Dendritic Cell Enrichment Set大鼠DC：常用標(biāo)志OX62，OX6（MHC-），CD80，CD86等細(xì)胞凋亡檢測(cè)細(xì)胞凋亡的分析細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死是兩個(gè)不同的過(guò)程細(xì)胞凋亡的主要檢查手段形態(tài)學(xué)檢查DNA Ladders實(shí)驗(yàn)流式細(xì)胞儀檢查與凋亡相關(guān)的病理過(guò)程HIV自身免疫性疾病腫瘤細(xì)胞凋亡的分析細(xì)胞凋亡的主要表現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)水解酶改變：如Caspase-3活化細(xì)胞膜不對(duì)稱性改變，磷脂酰絲氨酸外翻，但仍然保持膜的完整性：Annexin V/PI細(xì)胞核DNA的斷裂改變：TUNNEL實(shí)驗(yàn)（APO-BRDU，APO-DIRECT）凋亡相關(guān)蛋白：FasBcl-2細(xì)胞凋亡PI分析PI - Fluorescence# Events凋亡細(xì)胞正常G0/G1期細(xì)胞細(xì)胞凋亡Active Caspases-3細(xì)胞凋亡Caspases-3細(xì)胞凋亡Annexin 細(xì)胞凋亡Annexin 凋亡檢測(cè)（Annexin V/PI法） PIAnnexin V-FITC凋亡檢測(cè)（BrdU法） 細(xì)胞凋亡BrdU 流式分選 與分子生物學(xué)研究流式分選與分子生物學(xué)研究除了