APC基因異常甲基化在上皮性卵巢癌中的檢測(cè)及臨床意義

1、APC基因異常甲基化在上皮性卵巢癌中的檢測(cè)及臨床意義孫健盧健鄒冬芳吳國(guó)平【摘要】目的觀察結(jié)腸腺瘤性息肉病(AP)基因異常甲基化在上皮性卵巢癌中的作用及臨床意義。方法59例上皮性卵巢癌組織原發(fā)灶，32例相應(yīng)的盆、腹腔轉(zhuǎn)移灶，12例癌旁卵巢組織及30例正常卵巢組織，采用甲基化特異性聚合酶鏈?zhǔn)椒错?SP)法檢測(cè)AP基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)。結(jié)果上皮性卵巢癌組織原發(fā)灶及相應(yīng)的盆、腹腔轉(zhuǎn)移灶中存在AP基因啟動(dòng)子區(qū)異常甲基化，發(fā)生率分別為32.2%、40.6%，顯著高于正常卵巢組織(P0.01)。12例癌旁卵巢組織中1例檢測(cè)到AP基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化，30例正常卵巢組織未檢測(cè)到。AP基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化的發(fā)生率

2、在臨床、期低于、期(P0.05)，在高分化癌中低于低分化癌(P0.05)。結(jié)論AP基因啟動(dòng)子區(qū)異常甲基化與上皮性卵巢癌發(fā)生親密相關(guān)，并可能與上皮性卵巢癌臨床分期及分化程度有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】卵巢癌；AP基因；DNA甲基化【Keyrds】varianarina；APgene；DNAhyperethylatin1資料與方法1.1臨床資料59例原發(fā)上皮性卵巢癌組織、32例相應(yīng)的盆、腹腔轉(zhuǎn)移灶、12例癌旁卵巢組織及30例正常卵巢組織取自20012022年本院婦科及上海市第一婦幼保健院手術(shù)治療的患者，術(shù)前均未經(jīng)放療和化療，術(shù)后經(jīng)病理學(xué)診斷及組織學(xué)分級(jí)皆明確?；颊呤中g(shù)后立即取材，置于液氮中速凍后轉(zhuǎn)入-70冰箱

3、凍存。59例上皮性卵巢癌患者平均48.2歲(3968歲)，其中漿液性囊腺癌30例，粘液性囊腺癌l8例，子宮內(nèi)膜樣癌9例，透明細(xì)胞癌2例。根據(jù)細(xì)胞分化程度分為：高分化17例，中分化19例，低分化23例。32例相應(yīng)的盆、腹腔轉(zhuǎn)移灶取自大網(wǎng)膜20例，子宮直腸窩轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)9例，腸管漿膜面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)2例，側(cè)腹壁漿膜面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)l例。非癌卵巢組織12例取自上述、期患者癌旁“正常卵巢組織。30例正常卵巢組織取自因子宮疾病或卵巢良性病變切除的卵巢組織，患者平均49.5歲(3959歲)。1.2甲基化特異性PR1.2.2DNA修飾及純化取2gDNA，在50l反響體系中參加3lLNaH5l，混勻后7515in。參加新穎配

4、置的20l/L氫醌12.6l和4.8lL亞硫酸氫鈉320l(Siga公司)，混勻后參加10l礦物油，55水浴過夜。每個(gè)DNA樣本中參加1lDNA純化樹脂(Prega公司)，混勻后通過純化柱，再參加2l80異丙醇溶解樹脂。3l/LNaH脫硫，5l/L醋酸鈉、100%冰乙醇沉淀，75%乙醇吹洗DNA。離心后棄上清液，溶于30lTE溶液備用。1.2.4電泳取PR產(chǎn)物5l，應(yīng)用2瓊脂糖凝膠電泳，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用2檢驗(yàn)及Fisher檢驗(yàn)法對(duì)甲基化頻率進(jìn)展比擬。2結(jié)果2.1上皮性卵巢癌組織中AP基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)59例上皮性卵巢癌組織原發(fā)灶中19例(32.2%)檢測(cè)到AP基因啟動(dòng)子區(qū)

5、甲基化，32例盆、腹腔轉(zhuǎn)移灶中13例(40.6%)檢測(cè)到AP基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化。12例癌旁卵巢組織1例(8.3%)檢測(cè)到AP基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化。30例正常卵巢組織未檢測(cè)到AP基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化。上皮性卵巢癌組織原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶與正常卵巢組織中AP基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化率相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。盆、腹腔轉(zhuǎn)移灶中AP基因啟動(dòng)子區(qū)異常甲基化率高于卵巢癌組織原發(fā)灶，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)，見圖1(封2)。3討論近年來，隨著對(duì)卵巢癌發(fā)病機(jī)制的深化研究，基因甲基化在卵巢癌中的作用己受到廣泛的關(guān)注，DNA甲基化是腫瘤抑制基因突變失活及缺失失活之外基因失活的第三種機(jī)制。抑癌基因甲基化是一種可遺

6、傳的、酶誘導(dǎo)的、對(duì)抑癌基因構(gòu)造的特殊堿基序列有特異性的穩(wěn)定作用，即在甲基轉(zhuǎn)移酶作用下將一個(gè)甲基集團(tuán)加到抑癌基因DNA分子核苷酸堿基上，以胞嘧啶的5羧基端被甲基化最為常見。本研究檢測(cè)上皮性卵巢癌組織原發(fā)灶中AP基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化發(fā)生率為32.2%，高于正常卵巢組織(P0.01)，說明AP基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化與上皮性卵巢癌發(fā)生親密相關(guān)。同時(shí)，卵巢癌盆、腹腔轉(zhuǎn)移灶中AP基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化發(fā)生率40.6%，高于上皮性卵巢癌原發(fā)灶和正常卵巢組織，說明AP基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化可能與上皮性卵巢癌臨床浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移相關(guān)。另外，AP基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化在臨床、期低于、期，在高分化癌中AP基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化所占比率明顯低于低分化癌，說明AP基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化與上皮性卵巢癌臨床分期和細(xì)胞分化程度相關(guān),多發(fā)生在臨床、期和低分化者，可能與卵巢癌臨床進(jìn)展相關(guān)。由此可以推測(cè)AP基因可能是與上皮性卵巢癌發(fā)生開展相關(guān)的重要的抑癌基因，由于啟動(dòng)子區(qū)異常甲基化而導(dǎo)致表達(dá)失活。本研究發(fā)如今正常卵巢組織中AP基因呈非甲基化狀態(tài)，說明DNA甲基化是腫瘤發(fā)生開展的特有事件，而癌旁非癌卵巢組織1例檢測(cè)到AP基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化，這可能反映了這些組織雖然病理形態(tài)是正常的，但是卵巢上皮細(xì)胞在分子程度可能己經(jīng)發(fā)生改變，同時(shí)也說明甲基化可能作為癌變?cè)?/p>