正交法提取木耳多糖及對大鼠血清超氧化物歧化酶和體外肝臟脂質(zhì)過

1、正交法提取木耳多糖及對大鼠血清超氧化物歧化酶和體外肝臟脂質(zhì)過【摘要】目的用正交法優(yōu)選木耳粗多糖的提取工藝及其對血清超氧化物歧化酶SD及肝臟體外脂質(zhì)過氧化的影響。方法選取料水比、溫度、提取次數(shù)以及提取時間為考察因素，采用正交法L934為方案，確定木耳粗多糖提取的最正確工藝。按15gkg-1d-1(為人類攝取木耳中木耳多糖的10倍)給istar大鼠灌胃，血清中SD活性和肝臟中的丙二醛DA含量分別采用鄰苯三酚自氧化和TBA法測定。結(jié)果木耳多糖的最正確提取條件是：料水比為145，提取溫度為80，水提時間1h，提取次數(shù)3次，得率4.37%；灌胃大鼠較空白組肝臟的DA含量明顯下降P0.05；血清SD活性對

2、鄰苯三酚自氧化抑制率明顯進步(P0.05)。結(jié)論優(yōu)化條件可進步木耳粗多糖產(chǎn)率,并保證較高多糖的含量和平安性；木耳多糖應(yīng)用于抗衰老和保肝作用前景良好?！娟P(guān)鍵詞】木耳多糖；正交法；超氧化物歧化酶；丙二醛木耳AuriulariaauriulaL.Under，別名黑木耳、光木耳。真菌學(xué)分類屬擔(dān)子菌綱，木耳目，木耳科，是藥食兩用的物品。分布廣泛，人工培育產(chǎn)量高，具有良好的深加工前景。木耳子實體富含多糖膠體，有良好的清滑作用，是礦山工人、紡織工人的重要保健食品。木耳多糖具有多種生物活性，對細胞免疫和體液免疫功能具有良好的促進作用；具有降低血脂、膽固醇、血液黏度，抗血栓形成作用；具有降低血糖、抗糖尿病的功能

3、；同時還能促進核酸、蛋白質(zhì)的生物合成和防治多種老年性疾病1。為了進步木耳多糖提取的科學(xué)性和產(chǎn)率，采用正交實驗優(yōu)選其提取工藝的最正確條件，并研究其對血清SD及肝臟脂質(zhì)過氧化的影響。2方法與結(jié)果2.1因素及程度考察根據(jù)前期探索實驗得知木耳的粒度決定料水比例，粒度越小，黏度越低。將木耳磨成粉狀，在粒度固定的情況下，采取一樣的浸泡時間，影響提取的主要因素有料水比、溫度、提取次數(shù)以及提取時間。每個因素選擇3程度，進展正交實驗設(shè)計L9342，考察上述4個因素對木耳多糖提取效率的影響，實驗因素程度如表1所示。表1變量因素及相應(yīng)程度略2.2提取方法取木耳子實體10g，按L934正交表設(shè)計方案進展實驗，蒸餾水煎

4、煮，合并煎液，過濾，濾液濃縮至50l，sevag法脫蛋白3次，根據(jù)木耳粗多糖的分子量選擇1000012000的透析袋，蒸餾水透析3d，濃縮后，用2倍于濃縮液的無水乙醇進展醇沉，根據(jù)乙醇的揮發(fā)溫度在80水浴下?lián)]干，得灰白色片狀物。蒽酮法測定多糖含量。正交結(jié)果見表2。結(jié)合對正交實驗數(shù)據(jù)的分析可得出提取工藝為A2B21D3，即料水比為145，水提溫度為80，水提時間為1h，水提次數(shù)為3次。根據(jù)極差值可知，各因素對提取率影響的大小依次為水提次數(shù)、水提時間、料水比和水提溫度。表2正交實驗產(chǎn)率及SPSS13.0得到的預(yù)測產(chǎn)率略轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.3木耳粗多糖中糖含量的測定2.3.1對照品溶液的制備稱

5、取105枯燥至恒重的葡萄糖0.1020g，置于100l容量瓶中，分別汲取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6l定容至10l，即得不同濃度的標準液。2.3.2樣品溶液的制備分別精細稱取不同條件下提取的木耳粗多糖10g，置于100l的容量瓶中，80恒溫水浴溶解，定容，即得樣品。2.3.3繪制標準曲線分別取不同濃度標準液2l，參加2%的蒽酮-硫酸試劑內(nèi)含1%硫脲，下同5l，沸水浴中加熱10in，取出后流水冷卻，在620n波長下比色，得回歸方程：Y=6.8804X+0.001，R2=0.9914，濃度與A值所做標準曲線如圖1。2.3.4樣品中糖的含量的測定準確稱取不同條件下木

6、耳粗多糖1l+1lH2，參加2%的蒽酮-硫酸試劑5l，沸水浴中加熱10in，取出后流水冷卻，在620n波長下比色見表3。木耳粗多糖中平均總含糖量為50.1%。表3木耳多糖含量略2.4木耳多糖對血清SD及肝臟體外脂質(zhì)過氧化的影響istar大鼠10只，購回后在紫外消毒、溫度23的室內(nèi)自由喂清潔級大鼠專用飼料和水進展1周的適應(yīng)性飼養(yǎng)后，隨機分空白組和藥物組，藥物組每天給予1.5l濃度為1%的木耳多糖溶液按15g/kg體重,為人類攝取木耳中木耳多糖的10倍，5d后烏拉坦麻醉，腹主動脈取血并取肝臟。2.4.1對血清SD的影響血清SD的制備及SD測定液的配制3，取0.4l血清，參加0.4l乙醇-氯仿混合液

7、兩者體積比為53，振蕩2in，4000r/in離心5in以除去蛋白質(zhì)，上清液為SD抽提液。試劑及反響條件：取3支試管，分別為對照管、樣品管1和2正常和藥物實驗動物血清。反響條件如下：樣品管分別取SD抽取液100l，參加4.8l的pH8.2Tris-Hl緩沖液含0.1l/EDTA，對照管參加4.9l的pH8.2Tris-Hl緩沖液含0.1l/EDTA，混勻，在25恒溫水浴中保存10in后各參加6l/L鄰苯三酚100l，鄰苯三酚參加后，搖勻，5in內(nèi)測定對照管和樣品管的吸光率A對照和A樣品，測定波長為320n，利用鄰苯三酚法測定SD抽取液的A值并計算抑制率。抑制率越高，SD活性越高，否那么相反。實

8、驗結(jié)果的值進展t檢驗。結(jié)果見表4。抑制率I%=A對照-A樣品/A對照100%實驗結(jié)果的值進展t-檢驗。結(jié)果見表4。表4木耳多糖對鄰苯三酚自氧化的影響略藥物空白組與正常組比擬,P=0.0130.05；n=52.4.2對肝臟體外脂質(zhì)過氧化的影響4試劑及反響條件：分別為對照、樣品管1和2正常和藥物實驗動物血清。樣品管分別取測定DA的肝勻漿1.0l于試管中，再參加蒸餾水1l，對照組取蒸餾水2l代替，混勻后于37空氣恒溫浴震蕩器中振蕩1.5h，取出后參加10%的三氯醋酸2.0l，0.67%TBA1.0l，混勻后在沸水浴中反響15in，取出后流水冷卻，以3000r/in離心15in，其上清液在532n波長

9、處比色，測定A值，計算對DA的抑制率，此間接反響實驗條件對肝臟DA的影響。實驗結(jié)果的值進展t-檢驗。結(jié)果見表5。表5木耳多糖對體外肝臟脂質(zhì)過氧化的作用略抑制率I%=A對照-A樣品/A對照100%3討論本實驗的提取劑采用蒸餾水，盡管木耳粗多糖得率低于酸堿及各種酶參與的提取，但環(huán)保且提取的木耳多糖沒有有害物質(zhì)的殘留，而且含糖量比擬高，合適應(yīng)用于保健及治療過程。通過正交實驗對木耳多糖的提取工藝條件進展優(yōu)化，在料水比為145、水提溫度為80，水提時間為1h，水提次數(shù)為3次的條件下比批量消費木耳多糖的產(chǎn)率高出35倍。根據(jù)極差值看出，提取溫度對得率影響最小，可以降低溫度，節(jié)省資源。對istar大鼠灌胃結(jié)果說明：木耳多糖不僅可以顯著進步血清SD的活性P0.05，通過血液循環(huán)去除全身各處的超氧陰離子，到達抗衰老的目的，也可以明顯降低肝臟DA的含量P0.05，保護肝臟?！緟⒖嘉墨I】1季宇彬.中藥多糖的化學(xué)與藥理.北京：人民衛(wèi)生出版社，2022：382.2余松林.醫(yī)學(xué)統(tǒng)計學(xué).北京：人民衛(wèi)生出版社，2002.3Zhajingang,DianhuiLu,aiEna，etal.ptiizatinfplysaharidesextratinfrGynstea