二維高效液相色譜法分析小兒清熱止咳口服液中麻黃類生物堿的含量

1、二維高效液相色譜法分析小兒清熱止咳口服液中麻黃類生物堿的含量【關(guān)鍵詞】多維高效液相色譜；,離線；,麻黃堿；,偽麻黃堿；,甲基麻黃堿摘要：目的討論小兒清熱止咳口服液中麻黃類生物堿的含量分析方法。方法根據(jù)中藥成分的復(fù)雜性和多樣性，通過(guò)研制離線的二維高效液相色譜系統(tǒng)，解決成分復(fù)雜的中藥樣品的別離和痕量組分的定量問(wèn)題。一維柱為Agilent公司的AsahipakDP50(4.0125)，5粒徑，二維柱為八方公司的AihrBndAQ18(4.6250)，5粒徑；緩沖溶液為20l的KH2P4，用H3P4和三乙胺調(diào)pH值為2.7；一維及二維的流動(dòng)相均為緩沖溶液/乙腈97/3，V/V，流速為0.8l/in；柱

2、溫為30；DAD檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)為210n。結(jié)果麻黃堿、偽麻黃堿和甲基麻黃堿在進(jìn)樣量分別為0.363.6g，0.343.5g，0.323.3g范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好，平均回收率分別為97.4%，98.6%及100.2%。結(jié)論中藥樣品的別離明顯改善，并且這個(gè)系統(tǒng)可用于中藥的直接進(jìn)樣分析。關(guān)鍵詞：多維高效液相色譜；離線；麻黃堿；偽麻黃堿；甲基麻黃堿Abstrat:bjetiveTestabishaethadfrdeterinatinfephedrinealkalidsinxiaerqingrezhikeralLiquid.ethds2D-HPLsysteasused.lunsftdien

3、sinsereAsahipakDP-50lun(4.0125,5)andAihrBnd-AQ18lun(4.6250，5)respetively.SeparatinfbthdiensinsereperfrediththebilephasefAetnitrile-002lL-1KH2P4(pHasadjustedt2.7ithphsphriaidandtriethylaine)(3：97,vluerati).Flrateassetat0.8l/in,lunteperatureassetat30anddetetinavelengthas210nResultsThelinearrangefrephe

4、drine、pseudephedrineandethylephedrineere0.363.6g,0.343.5g,0.323.3grespetively.Theaveragereveriesfephedrine,pseudephedrineandethylephedrineere97.4%，98.6%and100.2%respetively.nlusinTheseparatinfpharaeutialhasbeensubstantiallyiprved,andthetehnlgyissuitabletanalystraditinalhineseediineithdiretinjetin.Ke

5、yrds：D-HPL;ff-line;Ephedrinealkalids;Pseudephedrine;ethylephedrine多維高效液相色譜法ultidiensinalHPL，D-HPL利用兩個(gè)或更多的色譜柱對(duì)復(fù)雜樣品中的待分析組分進(jìn)展別離，在柱之間利用切換閥將經(jīng)過(guò)初次別離的全部或局部組分選擇性地轉(zhuǎn)入另一根或多根不同類型的色譜柱中進(jìn)一步別離16。與常規(guī)的單柱別離相比，該技術(shù)具有更高的選擇性、更大的峰容量和更好的分辨率。該技術(shù)操作簡(jiǎn)單，彌補(bǔ)了常規(guī)單柱色譜的缺乏，是一種具有開(kāi)展?jié)摿Φ膭e離分析方法。麻黃堿類藥物，麻黃堿、偽麻黃堿和甲基麻黃堿具有相似的構(gòu)造，其中麻黃堿和偽麻黃堿屬于同分異構(gòu)體，

6、是中藥麻黃的主要有效成分。麻黃類藥物在臨床上廣泛用于治療傷風(fēng)、哮喘和過(guò)敏等癥。許多含麻黃的中成藥、中西復(fù)方制劑中都含有麻黃堿類藥物710。目前有關(guān)麻黃堿類生物堿的報(bào)道已有很多，但由于中藥樣品中所含物質(zhì)成分復(fù)雜，藥物含量極低，直接進(jìn)樣分析困難。采用二維色譜技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)中藥樣品直接進(jìn)樣分析，過(guò)程簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確。1器材Agilent1100系列高效液相色譜儀由脫氣機(jī)，雙元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱及二極管陣列檢測(cè)器和化學(xué)工作站組成。其中柱溫箱具有六通切換閥、可進(jìn)展柱切換。對(duì)照品：麻黃堿、偽麻黃堿和甲基麻黃堿均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；樣品為鄭州市協(xié)和制藥廠消費(fèi)的小兒清熱止咳口服液；實(shí)驗(yàn)用水為娃哈哈純潔

7、水，用0.45的微孔過(guò)濾膜過(guò)濾；KH2P4，H3P4，三乙胺為分析純；甲醇和乙腈為色譜純。2方法與結(jié)果2.1對(duì)照品與樣品制備準(zhǔn)確稱取適量麻黃堿、偽麻黃堿、甲基麻黃堿對(duì)照品，置50l容量瓶中加純水至刻度，搖勻，配制成濃度分別為450，436，412g/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。取10l小兒清熱止咳口服液，置50l容量瓶中加純水至刻度，搖勻，經(jīng)0.45的微孔過(guò)濾膜過(guò)濾。所有樣品保存于4冰箱中備用。2.2色譜條件色譜柱為一維柱為Agilent公司的AsahipakDP50(4.0125)，5粒徑，二維柱為八方公司的AihrBndAQ18(4.6250)，5粒徑；緩沖溶液為20l的KH2P4，用H3P4和三乙胺調(diào)

8、pH值為2.7；一維及二維的流動(dòng)相均為緩沖溶液/乙腈97/3，V/V，流速為0.8l/in；柱溫為30；DAD檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)為210n。先將樣品在第一維色譜柱中進(jìn)展預(yù)別離，然后利用六通閥進(jìn)展柱切換，將第1維別離后感興趣的組分切換至第二根色譜柱，第1維柱中不感興趣的組分被洗脫走，然后在第二維色譜柱中將感興趣的組分進(jìn)展進(jìn)一步別離。2.3樣品測(cè)定及色譜圖按上述色譜條件對(duì)小兒清熱止咳口服液樣品及標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)展2DHPL分析，其二維的色譜圖見(jiàn)圖1。與標(biāo)樣混合物的色譜圖比擬，可知峰13分別對(duì)應(yīng)麻黃堿、偽麻黃堿及甲基麻黃堿。同時(shí)用二極管陣列檢測(cè)器在線掃描各個(gè)峰的紫外光譜，發(fā)現(xiàn)各個(gè)峰對(duì)應(yīng)的紫外吸收峰符合麻黃類生

9、物堿的紫外吸收特征。a標(biāo)樣的二維色譜圖b小兒清熱止咳口服液的二維色譜圖1.麻黃堿2.偽麻黃堿3.甲基麻黃堿圖1標(biāo)樣及小兒清熱止咳口服液的二維色譜圖略2.4麻黃類生物堿的工作曲線分別取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5，1，3，4，5l配制成一系列質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，用峰面積Y對(duì)質(zhì)量濃度X，g/L作回歸分析得到3種麻黃類生物堿的回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍及最低檢出限S/N=3列于表1中。從表1可知，麻黃類生物堿的線性相關(guān)性較好。2.5小兒清熱止咳口服液中麻黃類生物堿的測(cè)定按上述色譜條件對(duì)將所配制的小兒清熱止咳口服液樣品作HPL分析，測(cè)得麻黃堿、偽麻黃堿、甲基麻黃堿的含量分別為：470.01，145.33，

10、41.46g/L。2.6精細(xì)度實(shí)驗(yàn)在上述色譜條件下，用同一麻黃類生物堿的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣分析，共進(jìn)樣5次，進(jìn)樣40l/次，測(cè)定它們的峰面積，并求得峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏向RSD如表2所示。表1麻黃類生物堿標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線略表2樣品5次測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)偏向略2.7回收率實(shí)驗(yàn)采用加樣回收實(shí)驗(yàn)。在含量的樣品中，分別準(zhǔn)確參加3種不同質(zhì)量濃度的麻黃堿標(biāo)準(zhǔn)溶液，同樣按樣品分析方法進(jìn)展測(cè)定，測(cè)得樣品回收率見(jiàn)表3。從表3看出，樣品回收率較高。表3回收率測(cè)定結(jié)果略3小結(jié)本實(shí)驗(yàn)采用2DHPL法測(cè)定了小兒清熱止咳口服液中麻黃類生物堿的含量。由于中藥樣品中所含物質(zhì)成分復(fù)雜，藥物含量極低,直接進(jìn)樣分析困難。采用我們自己研制的離線

11、的多維高效液相色譜技術(shù)，可以實(shí)現(xiàn)中藥樣品的直接進(jìn)樣分析,過(guò)程簡(jiǎn)單,結(jié)果準(zhǔn)確。參考文獻(xiàn)：1汪正范，楊樹(shù)民，吳侔天，等.色譜聯(lián)用技術(shù).北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2001：243.2劉照勝，李永民，蔣生祥，等.多維高效液相色譜別離形式組合色譜.1997，15(6):490.3王建玲，呂全建.多維色譜在分析測(cè)試方面的應(yīng)用J.鄭州牧業(yè)工程高等專科學(xué)校學(xué)報(bào)，1999，(2):53.4劉照勝，侯經(jīng)國(guó)，蔣生祥，等.擬多維高效液相色譜及其應(yīng)用于苯甲酸衍生物的別離J.分析化學(xué)，1996，24(10):1138.5周志航，胡志昂.多維色譜法及其應(yīng)用J.現(xiàn)代化工，1991，(3):47.6張文珠，張虹，蔣生祥，等.HPL柱切換技術(shù)在臨床藥物分析中的應(yīng)用J.分析測(cè)試技術(shù)與儀器，2002，8(1).7李紅霞，丁明玉，呂琨，等.高效液相色譜法測(cè)定麻黃及其制劑中的麻黃堿類生物堿和川芎嗪J.色譜，2001，192：