基質金屬蛋白酶

1、基質金屬蛋白酶【關鍵詞】腸腫瘤；基質金屬蛋白酶；腫瘤壞死因子受體EffetsfatrixetallprtEinase9ntheexpressinfturnersisfatrreeptr1inhuanlnarinaelllines【Keyrds】intestinalneplass;atrixetallprteinase;TNFR【摘要】目的：研究基質金屬蛋白酶9P9對大腸癌細胞腫瘤壞死因子受體1TNFR1表達的影響以及促進大腸癌侵襲和轉移的可能途徑.方法：通過免疫熒光法研究TNFR1在大腸癌細胞S1116中的表達；用P9干預培養(yǎng)的大腸癌S1116細胞，用流式細胞術檢測P9不同劑量和不同作用時間時

2、TNFR1表達變化.結果：S1116細胞表達TNFR1;P9對S1116細胞外表TNFR1表達有下調作用，但有劑量和時間依賴性.結論：P9下調大腸癌細胞外表TNFR1的表達，可能與大腸癌侵襲轉移親密相關.【關鍵詞】腸腫瘤；基質金屬蛋白酶；腫瘤壞死因子受體0引言腫瘤壞死因子(turnersisfatr,TNF)是一種主要由單核巨噬細胞產(chǎn)生的多肽細胞因子，因其在內毒素處理后具有殺傷腫瘤細胞的作用而被命名為腫瘤壞死因子.TNF的生物學活性是通過存在于細胞外表的膜受體,即腫瘤壞死因子受體1(turnersisfatrreeptr1,TNFR1)和腫瘤壞死因子受體2(turnersisfatrreept

3、r2,TNFR2)介導.體內外實驗已證實腫瘤壞死因子受體turnersisfatrreeptr,TNFR介導腫瘤壞死因子的腫瘤殺傷作用，體內有多種免疫活性因子干擾素、白介素等即通過激活上調TNFR以到達去除腫瘤的目的1,因此誘導并穩(wěn)定腫瘤細胞膜TNFR對機體抗腫瘤起非常重要的作用.其他研究還證實大腸癌組織中存在基質金屬蛋白酶atrixetallprteinase，Ps高表達或活性增強現(xiàn)象.某些活性基質金屬蛋白酶可能通過酶解作用促進腫瘤細胞膜TNFR的釋放形成高程度的可溶性腫瘤壞死因子受體2slubleturnersisfatrreeptr，sTNFR，是腫瘤細胞實現(xiàn)免疫逃逸的重要方式.本研究通

4、過檢測TNFR1在腫瘤細胞膜的表達及P9對腫瘤細胞膜TNFR1表達的影響，討論P9通過調節(jié)TNFR1促進大腸癌轉移的可能機制.1材料和方法1.1材料大腸癌細胞株S1116由南方醫(yī)院消化科實驗室保存；小牛血清杭州四季青生物制品研究所；RPI1640培養(yǎng)液，青、鏈雙抗，2.5g/L胰酶廣州威佳生物試劑公司；鼠抗人TNFR1單克隆抗體Santaruz公司；FIT標記的羊抗鼠二抗武漢博士德公司；熒光素異硫氰酸鹽FIT標記的鼠抗人TNFR1單克隆抗體及重組人P9購自美國RD公司；FIT標記的鼠IgG1對照抗體北京鼎國生物.1.2主要儀器倒置、相差顯微鏡lypas公司；流式細胞儀BETNDIKINSN公司

5、.1.3方法2結果2.1免疫熒光染色結果TNFR1在S1116細胞膜呈較強熒光，對照組無表達(圖1).A:S1116細胞；B:陰性對照.圖1TNFR1在S1116細胞的表達2.2不同濃度P9作用后對TNFR1表達的影響流式細胞檢測結果顯示，在不同的濃度作用3h后，與P90ng/L組(表達率90.92%)比擬，P9770ng/L組表達率69.96%，P91155ng/L組(表達率65.06%)TNFR1表達程度明顯降低P0.05；P9154ng/L組表達率85.05%，P9385ng/L組(表達率87.54%)與P90ng/L組相似P0.05；P9154ng/L組與P9385ng/L組TNFR1

6、表達程度明顯高于P9770ng/L和P91155ng/L組P0.05；P9154ng/L組與P9385ng/L組TNFR1表達程度相似P0.05；P9770ng/L組和P91155ng/L間TNFR1表達程度相似P0.05，圖2.2.2P9作用不同時間后對TNFR1表達的影響在P9770ng/L濃度，不同作用時間條件下，與0h組表達率86.36%比擬，3h表達率67.68%，6h表達率18.08%，9h表達率14.38%組TNFR1程度明顯降低P0.05；1.5h表達率83.88%組與0h組TNFR1程度相似P0.05；3h組TNFR1程度明顯高于6h和9h組P0.05；6h組與9h組TNFR

7、1程度相似P0.05，圖3.aP0.05vsA.3討論目前發(fā)現(xiàn)基質金屬蛋白酶在幾乎所有腫瘤組織中均存在高活性及高表達.它不僅能降解基底膜和細胞外基質的大部分成分，還參與釋放以前體形式結合于細胞膜上的多種細胞因子和/或生長因子及生長因子受體，成為近年來腫瘤侵襲和轉移的研究熱點.實驗結果顯示P9770ng/L組和1155ng/L組作用3h后TNFR1表達程度明顯低于對照組，而P9154ng/L組，P9385ng/L組與對照組無差異，考慮與劑量過低有關，同時也提示P9對大腸癌細胞外表TNFR1的表達的影響與劑量有一定的關系.當P9劑量固定為770ng/L時，作用3，6，9h后TNFR1表達較對照組相

8、比明顯減少，但1.5h與對照組比擬無差異，可能與酶的最正確作用時間有關.6h和9h組比擬無差異，考慮體外環(huán)境下，隨時間延長酶已失活，提示P9對TNFR1表達的影響與酶的活性親密相關.本研究說明了，P9可以按照劑量、時間依賴的方式使大腸癌S1116細胞外表的TNFR1表達減少，可能是TNFR1經(jīng)P9水解后，其胞外區(qū)自胞膜脫落后形成sTNFR1.與Lbard8等研究發(fā)現(xiàn)人工合成的PIs和TIP2能以劑量依賴的方式減少細胞外表TNF受體的脫落相符.【參考文獻】1ilsnA,BrningJL.DeathfHT29adenarinaellsinduedbyTNFfailyreeptrativatinis

9、aspasEindependentanddisplaysfeaturesfbthapptsisandnersisJ.ellDeathDiffer,2002,9(12):1321-1333.2agenaarillerRA,GrdenL,atrisianL.atrixetallprteinasesinlretalaner:Isitrthtalkingabut?J.aneretastasisRev,2022,23(12):119-135.3henG,GeddelDV.TNFR1signaling:abeautifulpathayJ.Siene,2002,296(5573):1634-1635.4董偉

10、達，徐潔潔，喬宗海，等.可溶性腫瘤壞死因子受體在頭頸腫瘤患者中的表達及意義J.中華耳鼻咽喉科雜志,2001,36(6):468-470.5YshiuraH,DharDK,NakatT,etal.PrgnstisignifianefturnersisfatrreeptrinlretaladenarinaJ.AntianerRes,2022,23(1A):85-89.6ShiJS,ZhuLS,HanY,etal.ExpressinfturnersisfatranditsreeptringallstneandgallbladderarinatissueJ.HepatbiliaryPanreatDis

11、Int,2022,3(3):448-452.7kadaY,Kat,inakaiH,etal.Reduedexpressinfflieinhibitryprtein(FLIP)andNFkappaBisassiatedithdeathreeptrinduedelldeathinhuanartiendthelialells(HAEs)J.ytkine,2001,15(2):66-74.8LbardA,allaeTL,KubiekF,etal.Synthetiatrixetallprteinaseinhibitrsandtissueinhibitrfetallprteinase(TIP)2,butntTIP1,inhibitsheddingfturnersisfatralphareeptrsinahuanlnadenarina(l205)elllineJ.anerRes,1998,58(17):4001-4007.9itsiadesN,YuH,PulakiV,etal.atrixetallprteinase7ediatedleavagefFasligandprtetsturellsfrhetherapeutidrugyttxiityJ.anerRes,2001,61(2):577-581.10趙勇，蔡方，陳罡.