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文檔簡(jiǎn)介
1、總糖和還原糖測(cè)定方法較多,如3,5二硝基水楊酸法、堿性銅試劑法、蒽酮比色法、斐林氏法等。這里只介紹斐林氏法。一、目的學(xué)習(xí)掌握生產(chǎn)實(shí)踐中常用的快速定糖方法。二、原理還原糖在堿性溶液中能將Ag+,Hg+,Cu2+,Fe(CN)3-等金屬離子還原,而糖本身則氧化成各種羥酸,利用這一特性可以對(duì)還原糖進(jìn)行定量測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)采用斐林試劑熱滴定法,氧化劑是斐林試劑,它是由甲乙兩種溶液組成,甲液中含有硫酸銅、次甲基藍(lán);乙液中含有氫氧化鈉、酒石酸鉀鈉和亞鐵氰化鉀(黃血鹽)。當(dāng)甲乙兩液混合時(shí),硫酸銅和氫氧化鈉作用形成氫氧化銅沉淀,由于溶液中存在酒石酸鉀鈉,它和氫氧化銅形成了可溶性絡(luò)合物。酒石酸絡(luò)銅(II)鉀鈉鹽在與
2、還原糖共熱時(shí),二價(jià)銅離子即被還原成一價(jià)的氧化亞銅紅色沉淀。COONaCu-CH2OH(CHOH)4CHO葡萄稱COOKCH.OH(CHOH)4C0OH-Cu2oI葡萄糖酸氧花亞詞此氧化亞銅與試劑中亞鐵氰化鉀反應(yīng)生成可溶性的亞鐵氰酸絡(luò)銅(I)鉀鹽。化0+K4Fe(CN)6+3H2O-K2CU2Fe(CN)6+2KOH+2氣0亞鐵氰化鉀亞鐵氰酸絡(luò)銅(I)鉀鹽次甲基瑩(還原盤加.titiicici.ccinn試字基就老化理垂邑)斐林試劑中二價(jià)銅的還原力比次甲基藍(lán)強(qiáng),因此所滴入的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液首先使二價(jià)銅還原,只有當(dāng)二價(jià)銅被還原完畢后,才能使次甲基藍(lán)(甲烯藍(lán))還原為無色,測(cè)定中以此作為滴定終點(diǎn)。在測(cè)定
3、時(shí)先做一對(duì)照管(不加樣品),用標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖滴定求知一定體積斐林試劑中二價(jià)銅和次甲基藍(lán)的量,即測(cè)定對(duì)照管消耗的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖量(A)。再做樣品管,樣品中還原糖消耗斐林試劑中一部分二價(jià)銅,剩余的量再用標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖來滴定,即樣品消耗的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖量(B)。將(A)減去(B)就可求得樣品中還原糖量。三、器材及試劑:1器材:山芋粉廣范試紙pHl12。吸管5毫升(x4),10毫升(x2)容量瓶100毫升(x3)燒杯150毫升(xl),100毫升(x1)三角燒瓶250毫升(x6)滴定管25毫升(xl)雙孔橡皮塞電爐300W(xl)天平。2試劑斐林氏甲液:15克硫酸銅、0.05克次甲基藍(lán)溶于1升蒸餾水中。斐林氏乙液:5
4、0克酒石酸鉀鈉、54克氫氧化鈉、4克亞鐵氰化鉀溶于1升蒸餾水中。).1%標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液:準(zhǔn)確稱取干燥恒重的葡萄糖1.00克,加入少量蒸餾水溶解后,再加8毫升濃鹽酸(防止微生物生長(zhǎng)),蒸餾水定容至1升。6molL-1鹽酸;6molL-1氫氧化鈉。四、操作步驟1還原糖提?。悍Q取2.00克山芋粉,在小燒杯中先用少量水調(diào)成糊狀,再加入70毫升水,50C保溫15分鐘,取出后定容至100毫升,經(jīng)過濾,取濾液進(jìn)行還原糖測(cè)定。總糖水解:稱取1.00克山芋粉在小燒杯中,加6molL-1鹽酸10毫升,蒸餾水15毫升,在沸水浴上加熱半小時(shí),取出后用6molL-1氫氧化鈉中和至中性,然后定容至100毫升,經(jīng)過濾,取濾
5、液10毫升稀釋至100毫升,即為稀釋1000倍的總糖水解液。糖的定量測(cè)定:按圖1-1裝置熱滴定儀器。在三角瓶中按下表加入各試劑。在加入斐林試劑甲液和乙液后,為了保證處于沸騰狀態(tài)下快速滴定(整個(gè)滴定時(shí)間在三分鐘內(nèi)完成),在滴定前先從滴定管中加入適量的葡萄糖液,然后在沸騰狀態(tài)下以45秒一滴的速度,繼續(xù)自滴定管加入葡萄糖液,直至藍(lán)色消失停止滴定。由于還原型的次甲基藍(lán)遇到空氣后又能轉(zhuǎn)為氧化型,而恢復(fù)藍(lán)色,因此當(dāng)?shù)味ǖ剿{(lán)色剛消失,出現(xiàn)黃色時(shí)應(yīng)立即停止滴定,如果再現(xiàn)藍(lán)色切勿繼續(xù)滴定。瓶斐林氏試劑還原糖提取液(毫升)總糖水解液(童升)0.1%萄8iSA(毫升)加熱沸騰狀01%葡萄甲液(童升)乙液升)稱個(gè)疋思里(毫升)557=7五、計(jì)算:按下式分別計(jì)算山芋粉中還廩糖和總糖時(shí)百務(wù)重n%=更摯竺
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