血液培養(yǎng)常見問題

1、血液培養(yǎng)常見問題血培養(yǎng)是一種將新鮮離體的血液標(biāo)本接種于營養(yǎng)培養(yǎng)基上，在一定溫度、濕度等條件下，使對營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌生長繁殖并對其進(jìn)行鑒別，從而確定病原菌的一種人工培養(yǎng)法。血培養(yǎng)是臨床診斷敗血癥的重要方法，目前是臨床上診斷敗血癥的金標(biāo)準(zhǔn)，也是獲得血流感染病原菌，并進(jìn)行下一步鑒定藥敏試驗的主要途徑。陽性結(jié)果對明確診斷、對癥治療有極高的應(yīng)用價值。但據(jù)文獻(xiàn)報道目前國內(nèi)的血培養(yǎng)陽性率僅為17.8%和18.4%。為了提高血培養(yǎng)的陽性率，客觀的反映出敗血癥患者血內(nèi)存在病原菌的實際狀況，臨床醫(yī)生精確選用血培養(yǎng)，檢驗科室精心分離鑒定。懷疑血流感染時應(yīng)在什么時間采血最好？盡可能在患者寒戰(zhàn)開始時、發(fā)熱高峰前 0.

2、51h 內(nèi)采血；也可于寒戰(zhàn)或發(fā)燒后 1h 進(jìn)行；在患者接受抗菌藥物治療前采血；如患者已經(jīng)應(yīng)用抗菌藥物進(jìn)行治療，應(yīng)在下一次用藥之前采血培養(yǎng)；無需同時或短時間內(nèi)完成幾套血培養(yǎng)采集，除非懷疑存在持續(xù)性菌血癥時（如亞急性感染性心內(nèi)膜炎）。為什么每套標(biāo)本中應(yīng)包含厭氧培養(yǎng)？厭氧培養(yǎng)能提高厭氧菌感染患者的診斷率；提高臨床兼性厭氧菌的檢出率；注：（1）厭氧瓶除了檢出厭氧菌，另外對葡萄球菌、腸桿菌菌科細(xì)菌以及苛氧菌的檢測有優(yōu)勢。（2）資料顯示 16% 的鏈球菌和 17% 的腸桿菌科細(xì)菌血培養(yǎng)時僅厭氧瓶報告陽性。（3）有研究者對 7072 份同時做需氧瓶和厭氧瓶的血培養(yǎng)結(jié)果分析顯示，640 份血培養(yǎng)陽性，陽性率為

3、 9%，其中需氧和厭氧瓶同時陽性為 55%，僅需氧瓶陽性為 26%，僅厭氧瓶陽性為 19%。研究顯示需氧瓶有 9% 比厭氧瓶早 1 天報告陽性結(jié)果，而厭氧瓶有 5% 比需氧瓶早 1 天報告陽性結(jié)果。采血量和血培養(yǎng)的數(shù)量采血量：對從菌血癥或真菌菌血癥病人血培養(yǎng)中獲得的微生物，每個培養(yǎng)瓶抽取的血量是唯一重要的變量。對嬰幼兒和兒童，一般采血15ml用于血培養(yǎng)。成人血培養(yǎng)的標(biāo)本量為10ml，血液和肉湯比一般推薦為1:510。兒童按年齡和體重采集足夠的血量，不超過患兒總血量的 1%；新生兒0.5ml/瓶；嬰幼兒（136個月）1.0ml/瓶；（36個月）4.0ml/瓶；血培養(yǎng)的數(shù)量：血培養(yǎng)的數(shù)量和采血時間

4、關(guān)系到菌血癥的病理生理學(xué)，一次靜脈采血注入到多個培養(yǎng)瓶中應(yīng)視為單份血培養(yǎng)。一般而言，采集血培養(yǎng)都應(yīng)該在使用抗生素之前進(jìn)行，推薦同時采集23份血。成人最少 2 套，3 套更好;兒童一般只采需氧培養(yǎng)瓶。研究表明，不同血培養(yǎng)套數(shù)檢測靈敏度不同，1 套為 73.2%；2 套為 93.9%；3 套為 96.9%采集后的血液注入順序血量充足：先注厭氧瓶，后注需氧瓶，避免空氣進(jìn)入；血量不足：優(yōu)先注入需氧瓶，剩余注入?yún)捬跗?，因為多?shù)菌血癥是由需氧菌和兼性需氧菌導(dǎo)致的。（用 75% 乙醇消毒培養(yǎng)瓶瓶塞，待干，將血標(biāo)本分別注入需氧瓶和厭氧瓶內(nèi)，迅速輕搖，混勻。）血培養(yǎng)采集的流程假陽性怎么處理？對于血培養(yǎng)的假陽性一

5、直是困擾臨床的問題，而且判斷假陽性比較困難，很難確認(rèn)是否是假陽性還是其他種種原因造成的轉(zhuǎn)種失敗，因而目前將血培養(yǎng)常見的假陽性和轉(zhuǎn)種失敗的原因進(jìn)行總結(jié)分析，以供判斷。環(huán)境原因1、劇烈的溫度變化實驗室環(huán)境溫度劇烈變化造成血培養(yǎng)的生長曲線波動而導(dǎo)致的假陽性，建議維持實驗室的溫度相對恒定，室溫保持在1525之間。儀器避免陽光直射或空調(diào)吹風(fēng)口。2、供電電壓儀器連接的電壓不穩(wěn)定或同一電源下連接其他大功率的設(shè)備，并且有頻繁使用，引發(fā)電壓波動。會導(dǎo)致生長曲線因電壓而波動。建議如果電壓不穩(wěn)可以考慮配置穩(wěn)壓電源，不要將血培養(yǎng)儀和大功率的電器設(shè)備例如滅菌鍋，離心機(jī)等位于同一線路上。儀器和培養(yǎng)瓶的原因1、儀器儀器是否

6、按時保養(yǎng)和校準(zhǔn)。此外在校準(zhǔn)空位的過程中，需要保證儀器中沒有正在培養(yǎng)的血培養(yǎng)瓶，不然可能會報告假陽性。2、血培養(yǎng)瓶確認(rèn)血培養(yǎng)瓶的送檢流程符合要求，在送檢過程中無劇烈的問題變化。如果血培養(yǎng)瓶不能及時上機(jī)，建議在室溫進(jìn)行保存。在35保存時間超過12小時或放2-8冰箱保存可能會造成漏檢或假陽性。在血培養(yǎng)瓶上機(jī)前檢查，標(biāo)簽是否完整，是否過期，培養(yǎng)基底部是否變色。培養(yǎng)瓶需要常溫避光保存，避免陽光直射。樣本因素或其他原因1、采血量采血量過多或過少，血液細(xì)胞本身也能代謝產(chǎn)生CO2，無菌血液在血培養(yǎng)瓶培養(yǎng)時也會產(chǎn)生本地曲線的變化，當(dāng)采血量過多的時候可能會造成假陽性，因而建議控制采血量。此外對于部分腫瘤病人，由于

7、其血液細(xì)胞的代謝率較高，也可能引發(fā)假陽性，對于這部分病人目前尚無完美的解決方法。2、對于陽性標(biāo)本的轉(zhuǎn)種失敗誤判假陽性血培養(yǎng)標(biāo)本陽性后需要進(jìn)行染色圖片和轉(zhuǎn)種。推薦使用含血的BHI瓊脂進(jìn)行培養(yǎng)，使用一般哥倫比亞血平板，對于一些營養(yǎng)條件要求較高的細(xì)菌可能會傳代失敗。如果發(fā)現(xiàn)血培養(yǎng)涂片有菌，而轉(zhuǎn)種失敗的情況，建議更換營養(yǎng)條件更高的培養(yǎng)基進(jìn)行傳代。此外部分菌株存在自溶現(xiàn)象，如果報陽后不能及時轉(zhuǎn)種也有可能轉(zhuǎn)種失敗。如何判斷假陽性如果血培養(yǎng)儀報陽，而轉(zhuǎn)種無細(xì)菌生長，如何分析是假陽性或者是轉(zhuǎn)種失敗呢？1、血培養(yǎng)直接涂片對于所有血培養(yǎng)報陽的血培養(yǎng)瓶必須進(jìn)行直接染色圖片鏡檢，有條件可以聯(lián)系臨床發(fā)送1級報告。如果直接鏡檢陽性，而轉(zhuǎn)種無細(xì)菌生長，轉(zhuǎn)種失敗的可能性極大，建議SN或FN的陽性瓶使用厭氧平板轉(zhuǎn)種并在使用厭氧環(huán)境進(jìn)行培養(yǎng)，對于PF，SA，F(xiàn)A的陽性瓶，使用含血的BHI瓊脂進(jìn)行轉(zhuǎn)種。2、再次培養(yǎng)如果血培養(yǎng)直接涂片找不到細(xì)菌，且轉(zhuǎn)種平板也為陰性，建議可以將報陽血培養(yǎng)瓶抽出10ml打入新的血培養(yǎng)瓶重新進(jìn)行培養(yǎng)，如果仍報陽