專性厭氧菌的培養(yǎng)方法及注意事項(xiàng)

1、Word文檔 專性厭氧菌的培養(yǎng)方法及注意事項(xiàng) 一、專性厭氧菌的介紹 依據(jù)細(xì)菌生長對(duì)氧的需求，主要可分為四大類：專性需氧菌、兼性厭氧菌、專性厭氧菌、微需氧菌。 專性厭氧菌需要在嚴(yán)格無氧的氣體環(huán)境中生長，氧氣會(huì)對(duì)菌產(chǎn)生毒害作用，也有一些厭氧菌在含5%-10%二氧化碳?xì)怏w環(huán)境中可耐受低濃度的氧氣。常見的專性厭氧菌有梭菌屬（如產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、破傷風(fēng)梭菌、困難梭菌等）、雙歧桿菌屬（如嬰兒雙歧桿菌、動(dòng)物雙歧桿菌等）、擬桿菌屬、梭桿菌屬、厭氧消化鏈球菌屬等。 二、厭氧培育環(huán)境的構(gòu)造 （1）使用厭氧培育箱，通氣培育。一些厭氧培育箱可同時(shí)進(jìn)行接種等微生物操作，并直接進(jìn)行培育，操作便利，勝利率高，缺點(diǎn)是多

2、數(shù)試驗(yàn)室不具備，損耗較大，對(duì)于小規(guī)模的培育試驗(yàn)來說，成本較高。 （2）使用厭氧罐、厭氧盒或厭氧培育袋+厭氧產(chǎn)氣包，可制作小型或中型空間的厭氧環(huán)境，操作便利，不需要任何簡單的特地設(shè)備，可在全部試驗(yàn)室中使用，特別適合試驗(yàn)室中小規(guī)模的試驗(yàn)操作。 留意事項(xiàng)：培育基必需與厭氧環(huán)境氣體流通，如使用試管、錐形瓶等容器培育，必需確保塞子透氣；培育平皿時(shí)，必需保證平皿的透氣性良好，不能使用封口膜密閉纏繞。 （3）液體培育基可采納掩蓋石蠟隔絕氧氣的方法，如皰肉培育基、梭菌增菌培育基等，在培育基配制完成分裝后，在培育基上方掩蓋約0.5-1cm厚度的液體石蠟，再進(jìn)行滅菌處理，可直接進(jìn)行厭氧菌的培育，無需使用厭氧培育箱

3、或厭氧罐等設(shè)備。 注：在滅菌前掩蓋石蠟，滅菌過程中培育基中溶解的氧氣會(huì)逸出，冷卻后石蠟會(huì)阻隔空氣中氧氣的進(jìn)入，可以更好的制造厭氧環(huán)境；培育基中也可補(bǔ)加肯定量的還原性鐵粉或硫乙醇酸鈉、半胱氨酸等還原性成分，關(guān)心維持厭氧環(huán)境。 （4）有些培育基可自然的形成厭氧環(huán)境，無需厭氧培育，如硫乙醇酸鹽流體培育基，靜置過程會(huì)自發(fā)分層，下層為無氧環(huán)境，無需任何厭氧設(shè)備，也無需掩蓋液體石蠟，即可培育厭氧菌。 三、常見厭氧菌的培育基 1.硫乙醇酸鹽流體培育基 此培育基常用于梭菌的活化及增菌培育，也可對(duì)養(yǎng)分成分進(jìn)行改良用于一些養(yǎng)分要求較高的厭氧菌的培育，此培育基可自然的形成厭氧環(huán)境，無需厭氧培育，此培育基靜置過程會(huì)自

4、發(fā)分層，下層為無氧環(huán)境，無需任何厭氧設(shè)備，也無需掩蓋液體石蠟，即可培育厭氧菌。 2.皰肉培育基 相比較于硫乙醇酸鹽流體培育基，此培育基需掩蓋液體石蠟，用于培育梭菌時(shí)，可以存活更長時(shí)間（如生孢梭菌，在硫乙醇酸鹽流體培育基中只能存活數(shù)天，而在皰肉培育基中可存活數(shù)月以上）。 3.GAM/改良GAM培育基 此培育基養(yǎng)分特別豐富，適用于絕大多數(shù)的厭氧菌培育，特殊是用于比較難培育的養(yǎng)分苛求型細(xì)菌（如擬桿菌屬）。 4.血平板/CDC厭氧菌瓊脂 養(yǎng)分豐富，適用于絕大多數(shù)厭氧菌的培育（梭菌、擬桿菌等均可培育）。 5.MRS瓊脂/肉湯 用于雙歧桿菌的培育，制備好的MRS肉湯培育基澄清透亮無沉淀，常用于乳酸菌或雙歧桿菌的活化、增菌及收集菌體。 四、留意事項(xiàng) （1）培育基的制備 需掩蓋石蠟的液體培育基，應(yīng)在滅菌前完成分裝并掩蓋液體石蠟；流體培育基或半固體培育基在有氧條件下培育厭氧菌時(shí)，使用前可采納沸水浴或其他除氧方式排出培育基內(nèi)溶解的氧氣. （2）操作過程 因氧氣會(huì)對(duì)厭氧菌產(chǎn)生毒害作用，因此整個(gè)操作過程應(yīng)在特地的無氧設(shè)備中進(jìn)行。如在正?？諝庵胁僮鳎瑥膮捬蹙┞对诳諝庵虚_頭到放入?yún)捬醐h(huán)境中培育結(jié)束，整個(gè)過程應(yīng)盡可能快速操作，一般不超過15分鐘，暴露時(shí)間越長，厭氧菌越簡單死亡。 （3）培育環(huán)境 可采納厭氧罐、厭氧培育箱、厭氧產(chǎn)氣包等方式供應(yīng)厭氧環(huán)境，除了確保氣體環(huán)境無氧之