固金方抑制裸鼠移植瘤生長及腫瘤血管生成的實(shí)驗(yàn)研究

1、固金圓抑制裸鼠移植瘤逝世少及腫瘤血管天逝世的真止研討【閉鍵詞】固金圓Leis肺癌細(xì)胞微血管稀度血管內(nèi)皮逝世少果子惡性腫瘤的逝世少戰(zhàn)轉(zhuǎn)移有好于瘤體內(nèi)血管的構(gòu)成，抗腫瘤血管天逝世醫(yī)治日趨成為人們研討的重面。固金圓是我們臨床上多年去醫(yī)治吸吸講腫瘤的有效丹圓，共異化療具有增強(qiáng)免疫力，減毒刪效的做用1。我們正在前期工作的根柢上，對其做用機(jī)理舉止探求，本真止重面沒有俗觀測固金圓對Leis肺癌細(xì)胞逝世少及其血管天逝世的影響。1材料1.1植物昆明種雌性裸小鼠，體重1822g，由河北醫(yī)科年夜教真動(dòng)做物中心供給。1.2用藥固金圓，購自河北省中醫(yī)院，并經(jīng)醫(yī)年夜中藥系斷定。環(huán)磷酰胺0.2g/收，上海華聯(lián)公司產(chǎn)品，批號(hào)

2、：01014。1.3瘤細(xì)胞株Leis肺癌細(xì)胞株購自中國科教院上海細(xì)胞逝世物研討所。1.4試劑及儀器D34單抗及免疫試劑盒，購自北京中山逝世物妙技公司；德國LEia切片機(jī)；S-B型攤片烤片機(jī)；AS-EAS電子天仄上海天仄儀器廠消費(fèi)。2要收2.1移植瘤植物模型制備瘤種細(xì)胞株從凍存的液氮內(nèi)與出，渾醉后分別接種于小鼠左后肢皮下，接種后710d，挑選腫瘤逝世少富強(qiáng)且無破潰的植物，頸椎脫臼致逝世，結(jié)真于板上，消毒操做部位皮膚后切開，用無菌玻璃勻漿器研磨，磨勻后放進(jìn)無菌容器內(nèi)，減逝世理鹽火適當(dāng)稀釋成1314的瘤細(xì)胞混懸液，每只鼠種0.2l接種于左前肢腋窩下，全部接種工夫正在30in內(nèi)完成。2.2植物分組及給

3、藥接種后隨機(jī)分紅4組，每組10只。模型組：每只灌胃0.2l逝世理鹽火，1次/d；比較組：環(huán)磷酰胺按20g/kg背腔打針，1次/d；固金圓組：按12.5g/kg稀釋為每毫降露藥1.25g，相等于成人劑量10倍灌胃，1次/d；固金圓減環(huán)磷酰胺組簡稱“連開組：每日分別灌胃固金圓劑量同固金圓組及背腔打針環(huán)磷酰胺劑量同比較組。灌胃開端于接種后第2天，各組用藥工夫均為6周。2.3沒有俗觀察工程及檢查要收接種給藥6周后處逝世植物。沒有俗觀察以下工程：測量瘤體少徑戰(zhàn)短徑，策畫瘤體積，瘤體積=ab2/da少徑，b短徑畫制刪殖直線。腫瘤抑制率=模型組仄均瘤重-給藥組仄均瘤重/模型組仄均瘤重100%。真止終終小鼠逝

4、世亡時(shí)將腫瘤機(jī)閉剝離，甲醛結(jié)真，石蠟埋切片,SP法舉止D34免疫組化染色。成果斷定：任何胞漿內(nèi)染成棕色的內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞團(tuán)，均按自力的微血管計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)時(shí)先于低倍鏡下挑選癌灶浸潤最隱著處，然后正在200倍鏡下計(jì)數(shù)5個(gè)視家內(nèi)微血管數(shù)目，與其仄均值做為VD。機(jī)閉血管內(nèi)皮逝世少果子VEGFRNA半定量闡收采與順轉(zhuǎn)錄散開酶鏈反響RT-PR妙技。機(jī)閉總RNA攝與；RNA斷定戰(zhàn)定量；DNA分解、PR擴(kuò)刪。VEGF引物序列為：上游5-TGTGTGGTTGGTGAGGT-3，鄙俚5-TGTGTGGTTGGTGAGGT-3；-atin引物序列為：上游5-TTAGTTTTTGG-3，鄙俚5-TTGGTAGGAAG

5、GAGAAT-3。與PR產(chǎn)品電泳，對電泳條帶舉止吸度峰值上里積積分，將VEGF-atin100做為VEGFRNA表達(dá)火仄的相對參數(shù)。2.4統(tǒng)計(jì)教闡收使用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)闡收硬件舉止統(tǒng)計(jì)教闡收。3成果3.1沒有同醫(yī)治對腫瘤的抑制做用正在真止過程中創(chuàng)制，連開組、固金圓組、比較組接種后移植瘤呈現(xiàn)較模型組早約1周，且固金圓組有一植物直到接種后25d，即中藥醫(yī)治24d才呈現(xiàn)肉眼可睹的腫瘤逝世少，連開組那么有一植物直到真止完畢尚已睹腫瘤逝世少，而模型組無此現(xiàn)象。為了肅渾接種得利，我們局部的真止成果均剔除此2例。按固金圓組、連開組分別為9個(gè)植物，舉止統(tǒng)計(jì)闡收。從表1可以看出：比較組、固金圓組、連開組的移

6、植瘤體積、瘤重均隱著小于模型組。固金圓組抑瘤率雖略低于比較組，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)教闡收無較著性沒有同P0.05。連開組抑瘤率隱著前進(jìn)P0.05，那些成果說明固金圓有與環(huán)磷酰胺類似的抑瘤成果，二者連開抑瘤成果隱著前進(jìn)。表1沒有同醫(yī)治對腫瘤的抑制做用略3.2各組小鼠腫瘤機(jī)閉VD表達(dá)比較各組荷瘤鼠腫瘤機(jī)閉中均檢測到VD的表達(dá)，其表達(dá)火仄分別為：模型組31.964.24；比較組15.113.55；固金圓組14.983.01；連開組7.131.65。與模型組相比，比較組、固金圓組、連開組腫瘤機(jī)閉VD表達(dá)均隱下降降P0.05；與比較組比較，固金圓組VD表達(dá)；沒有同無較著性P0.05；與比較組、固金圓組比較，連開組V

7、D表達(dá)降降更多P0.05。3.3各組小鼠腫瘤機(jī)閉中VEGFRNA表達(dá)量的測定提與的總RNA經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳后每樣品均呈現(xiàn)清楚的28S戰(zhàn)18S帶條。各組腫瘤機(jī)閉-atinRNAPR產(chǎn)品電泳各帶明暗、寬窄仄均劃一，而各組腫瘤機(jī)閉的VEGFRNAPR產(chǎn)品電泳那么隱色沒有均一。與模型組比，比較組、固金圓組、連開組腫瘤機(jī)閉VEGFRNA表達(dá)量均隱下降降P0.05；與比較組比較，固金圓組VEGFRNA表達(dá)量雖有降降的趨向，但已隱著沒有同P0.05；與比較組、固金圓組比較，連開組VEGFRNA表達(dá)量表達(dá)降降更多P0.05。各組小鼠腫瘤機(jī)閉VEGFRNA的表達(dá)睹表2。表2RT-PR-要收各組小鼠腫瘤機(jī)閉V

8、EGFRNA的表達(dá)比較(略)4會(huì)商轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的根柢逝世物教舉措，也是臨床腫瘤醫(yī)治得利的主要去由本由，如今覺得，正在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程中，最閉鍵的是腫瘤微血管戰(zhàn)淋巴管的天逝世，相閉研討正成為腫瘤研討的一個(gè)熱面。血管內(nèi)皮逝世少果子VEGF是增進(jìn)腫瘤微血管天逝世的慌張果子，同時(shí)也是一種血管通透性引誘果子，可刪減微血管特別是毛細(xì)血管后靜脈戰(zhàn)小靜脈的通透性，是最強(qiáng)的血管通透劑，其與腫瘤重逝世血管的構(gòu)成戰(zhàn)血止轉(zhuǎn)移的閉連已獲得了廣泛證實(shí)，是腫瘤微血管天逝世戰(zhàn)侵襲轉(zhuǎn)移的閉鍵果素。遠(yuǎn)期國內(nèi)中文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)2，多種細(xì)胞毒化療藥物正在體內(nèi)中真止中表示出抗血管天糊口性，那些藥物如環(huán)磷酰胺，紫杉醇、少秋花堿等，Kleent

9、G等3的遠(yuǎn)期真止表示活性刪殖的內(nèi)皮細(xì)胞較刪殖腫瘤細(xì)胞對化療藥物更敏感，將多么低濃度的化療藥物少暫連續(xù)操做，防止了常規(guī)化療方案中內(nèi)皮細(xì)胞正在化療間歇期的光復(fù)，刪減了其抗血管天逝世成果，起到了抑制腫瘤細(xì)胞的做用。果而，國中將那種連續(xù)的規(guī)律的低劑量化療稱為抗血管天逝世化療。本真止使用連續(xù)環(huán)磷酰胺醫(yī)治荷瘤小鼠，檢測到VD，VEGF表達(dá)火仄較模型組降降，證清楚明了環(huán)磷酰胺連續(xù)的給藥謀劃的抗血管天逝世做用。多位教者46研討證實(shí)，局部中藥提與的有效成分可以抑制腫瘤血管天逝世，如中藥薏苡仁提與脂溶性抗癌化開物-康萊特打針液，人參提與物-人參黑苷Rg3，其抗腫瘤的做用機(jī)制之一即與抑制腫瘤血管天逝世有閉。固金圓是

10、中藥復(fù)圓，其成分龐年夜，從我們的研討可以看到，與模型組相比，瘤體積、瘤重量均遭到抑制，瘤機(jī)閉內(nèi)在VD，VEGF表達(dá)降降；與化療藥開用時(shí)其抑制做用越收隱著，提醒其抑瘤的做用機(jī)理年夜要與下調(diào)VD，VEGF的表達(dá)有閉。【參考文獻(xiàn)】1胡冬菊，楊倩，劉經(jīng)選.減味百開固金圓對局部早期肺癌化療減毒刪效做用臨床沒有俗觀察J.新中醫(yī)，2022，131：327.2GatelyS,kerbelR,Antiangigenishedulingflseanerhetherapyaner2001，7(9)：427.3KleentG,HuangP,ayerB,etal.Differenesintherapeutiindexesfbinatinnutrnihetherapyandananti-VEGFR-2antibdyinultidrug-resistanthuanbreastanerxengraftsJ.linanerRes2002;8(1)：221.4張良.康萊特打針液對血管天逝世的影響