利用快速溶劑萃取方法提取人參蛋白的研究

1、利用快速溶劑萃取方法提取人參蛋白的研究【摘要】目的該研究采用快速溶劑萃取裝置(ASE)萃取人參蛋白，并與傳統(tǒng)浸提法進展比擬研究，建立了人參蛋白質(zhì)的最正確提取工藝。方法參加搗碎的鮮人參10g，萃取溶劑為低濃度的KH溶液，溫度50，靜態(tài)萃取時間5in，循環(huán)3次，萃取體積100l。結(jié)果人參蛋白的提取率為84.08%。而采用傳統(tǒng)浸提法，人參蛋白提取率為72.77%。結(jié)論采用快速溶劑萃取方法提取人參蛋白要大大優(yōu)于傳統(tǒng)的浸泡提取方法。【關(guān)鍵詞】快速溶劑萃取儀；人參蛋白現(xiàn)代化學(xué)分析技術(shù)的飛速開展,分析手段越來越向著快速、準(zhǔn)確、自動化的方向開展。但完成一個實驗有一半甚至更多時間要用在樣品的前處理上,復(fù)雜樣品的

2、前處理還存在很多的問題，且操作難度大。樣品前處理越來越成為現(xiàn)代分析方法開展的制約,已引起人們的重視?？焖偃軇┹腿?AeleratedSlventExtratin，ASE)1是一種新的樣品提取方法,它是在一定的溫度(40200)和壓力(10003000psi或10.320.6Pa)下用溶劑對固體或半固體樣品進展萃取的方法。使用常規(guī)的溶劑、通過進步溫度和增加壓力來進步萃取的效率，其結(jié)果大大加快了萃取的時間并明顯降低萃取溶劑的使用量。與傳統(tǒng)的萃取方式相比,ASE快速溶劑萃取技術(shù)具有如下的顯著特點2，3：時間短、溶劑少、萃取效率高、使用方便、平安性好。ASE的特點突出,可以大幅度進步萃取效率。ASE的

3、應(yīng)用涉及環(huán)境、食品、制藥、農(nóng)業(yè)和聚合物領(lǐng)域。本文將利用快速溶劑萃取法提取人參可溶性蛋白，從溶劑、料液比、時間、蛋白濃度和糖含量為輔助指標(biāo)，建立人參蛋白的最正確提取條件，并與傳統(tǒng)浸提的方法進展比擬。1材料與儀器1.1材料57年生鮮人參，購自撫松，凱氏定氮法測得鮮人參中粗蛋白的含量為4.02%。1.2試劑牛血清白蛋白(BSA)上海新興醫(yī)藥保健品科技開發(fā)中心，考馬斯亮藍G-250上海生化試劑采購供給站試劑廠，其它化學(xué)試劑均為國產(chǎn)分析純。1.3設(shè)備紫外分光光度計DU-7500型美國Bekan公司，快速溶劑萃取儀ASE300型美國TANGAHA，真空冷凍枯燥機西班牙TELSTAR，高速離心機LG10-2

4、.4A型北京醫(yī)用離心機廠，酸度離子分析儀EA940型美國Bekan公司。2方法2.1工藝流程2.1.1快速溶劑萃取工藝流程鮮人參搗碎放入萃取池設(shè)計萃取條件快速萃鰓萃取液沉淀蛋白離心取沉淀凍干。2.1.2傳統(tǒng)提取方法工藝流程鮮人參搗碎參加溶劑攪拌浸提抽濾取清液沉淀蛋白離心取沉淀凍干。2.2分析方法采用GB/T6435-86，半微量凱氏定氮法測定總氮含量。采用考馬斯亮藍G-250法測定蛋白質(zhì)含量。采用3，5-二硝基水楊酸法測定總糖含量。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.3結(jié)果3.1快速溶劑萃取法提取人參蛋白的研究3.1.1萃取溶劑的選擇準(zhǔn)確稱取搗碎的鮮人參10g，在溫度50，萃取體積100l的條件下，分別采用

5、H2、KH稀溶液、低濃度pH8.05的Tris-Hl緩沖液，循環(huán)萃取2次，靜態(tài)萃取時間5in，測定蛋白質(zhì)含量和糖的濃度，計算蛋白質(zhì)提取率。結(jié)果見表1。表1不同萃取溶劑的比擬略3.1.2加樣量確實定分別稱取10，15，20，30，50g樣品，溫度50，循環(huán)萃取2次，靜態(tài)萃取時間5in，萃取體積100l。測定蛋白含量，計算蛋白質(zhì)提取率。結(jié)果見表2。表2不同加樣量的比擬略由表2可見，隨著樣品的增加，蛋白提取率顯著降低。因此，為節(jié)約本錢，充分利用資源，每100l萃取池參加樣品10g。3.1.3單因素分析萃取溫度對人參蛋白提取的影響：分別在不同溫度條件下，循環(huán)萃取2次，靜態(tài)萃取時間5in，測定蛋白含量，

6、研究不同溫度對蛋白提取率的影響。結(jié)果見圖1。由圖1可見，當(dāng)溫度高于45時，隨著溫度的升高提取率逐漸下降?？紤]蛋白質(zhì)的特性，本研究確定萃取溫度為40、45、50。靜態(tài)萃取時間對人參蛋白提取的影響：在溫度45條件下循環(huán)2次，研究不同時間對蛋白提取率的影響。結(jié)果見圖2。由圖2可見，隨著萃取時間的增加，蛋白提取率逐漸下降，可能由于時間過長導(dǎo)致蛋白質(zhì)分解的緣故，因此為了進步萃取效率，本研究選擇靜態(tài)萃取時間為5，10，15in。循環(huán)次數(shù)對人參蛋白提取的影響：在溫度45，時間5in條件下，分別循環(huán)萃取1，2，3，4，5次，并測定蛋白含量，研究不同循環(huán)次數(shù)對蛋白提取率的影響。結(jié)果就見圖3。由圖3可見，隨著循環(huán)

7、次數(shù)的增加，人參蛋白提取率逐漸增加，但循環(huán)3次以后增加幅度較小，從節(jié)約原料、進步萃取效率考慮，選擇循環(huán)萃取2次，3次，4次。3.1.4快速萃取人參蛋白最優(yōu)條件確實定根據(jù)單因素實驗所確定的各因素程度進展3因素3程度正交實驗，因素程度表見表3，以蛋白提取率%為測定指標(biāo)進展極差分析。結(jié)果見表4。表3因素程度表略由表4正交實驗極差分析結(jié)果可知，各因素的主次順序為BA，即循環(huán)次數(shù)靜態(tài)萃取時間萃取溫度，萃取條件應(yīng)選擇A3B13的組合，即溫度50，靜態(tài)萃取5in，循環(huán)4次,在此條件下萃取人參蛋白的提取率為84.08%，蛋白濃度為3.38g/l。3.2傳統(tǒng)浸提法提取人參蛋白的研究料液比110，溫度40，提取3

8、次，提取時間5h，此時蛋白提取率為72.77%，蛋白濃度為0.9751g/l。表4正交實驗極差分析結(jié)果略4小結(jié)本實驗采用快速溶劑萃取系統(tǒng)提取人參蛋白，并與傳統(tǒng)的浸提法進展比擬研究，通過單因素實驗和正交實驗建立了快速溶劑萃取法最正確萃取條件為：參加搗碎的鮮人參10g，萃取溶劑為低濃度的KH溶液，溫度50，靜態(tài)萃取時間5in，循環(huán)3次，萃取體積100l，此時蛋白提取率為84.08%。傳統(tǒng)提取法采用料液比110，溫度50，提取3次，每次提取時間5h，此時蛋白提取率為72.77%。將快速溶劑萃取法與傳統(tǒng)浸泡提取法比擬：快速溶劑萃取法時間短，循環(huán)3次的時間為15in，而傳統(tǒng)的提取方法要到達相似的提取效果

9、需要15h左右；快速溶劑萃取法效率高，蛋白提取率比傳統(tǒng)方法進步了11.31%，并且萃取液體積小，蛋白濃度高，使蛋白質(zhì)的沉淀到達很好的效果；快速溶劑萃取裝置操作簡便、節(jié)約溶劑，而傳統(tǒng)方法由于體積較大，蛋白濃度低，導(dǎo)致蛋白質(zhì)沉淀效果較差，操作費時費力。采用快速溶劑萃取法提取人參蛋白要大大優(yōu)于傳統(tǒng)的浸泡提取方法?！緟⒖嘉墨I】1AbrhaY,RaghavanD.Plyhlrinatedbiphenyl(PB)reveryfrspikedrganiatrixusingaeleratedslventextratin(ASE)andSxhletextratinJ.JualfHazardusaterials，2000，80:147.2RihterBE，JnesBA