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1、Word文檔 菌種衰退了咋辦?該怎么預(yù)防呢 微生物長(zhǎng)期受到外界的影響,遺傳性狀必定發(fā)生某些變異。正是由于變異的存在才使得生物向前進(jìn)化。然而由于突變的存在,菌種在培育或保藏過程中,可能會(huì)消失某些優(yōu)良生產(chǎn)性狀的劣化、遺傳標(biāo)記丟失、典型特征轉(zhuǎn)變等現(xiàn)象,稱為菌種衰退。比如蘇云金芽孢桿菌由于菌種衰退,導(dǎo)致其新生的菌體芽孢和伴孢晶體都比較小;保藏的沙門氏菌鞭毛抗原丟失,導(dǎo)致H多價(jià)血清不凝固等。 1. 菌種衰退緣由菌種衰退的根本緣由是有關(guān)基因的負(fù)突變。假如掌握產(chǎn)量的基因發(fā)生負(fù)突變,則表現(xiàn)為產(chǎn)量下降;假如掌握孢子生成的基因發(fā)生負(fù)突變,則產(chǎn)生孢子的力量下降。菌種在移種傳代過程中會(huì)發(fā)生自發(fā)突變。雖然自發(fā)突變的幾率
2、很低(一般為10-610-9),尤其是對(duì)于某一特定基因來說,突變頻率更低。但是由于微生物具有極高的代謝繁殖力量,隨著傳代次數(shù)增加,衰退細(xì)胞的數(shù)目就會(huì)不斷增加,在數(shù)量上漸漸占優(yōu)勢(shì),最終成為一株衰退了的菌株。此外,菌種衰退還有以下幾種緣由:1)表型延遲造成菌種衰退表型延遲現(xiàn)象也會(huì)造成菌種衰退。如,在誘變育種過程中,常常會(huì)發(fā)覺某菌株初篩時(shí)產(chǎn)量較高,進(jìn)行復(fù)篩時(shí)產(chǎn)量卻下降了。2)質(zhì)粒脫落導(dǎo)致菌種衰退質(zhì)粒脫落導(dǎo)致菌種衰退的狀況在抗生素生產(chǎn)中較多,不少抗生素的合成是受質(zhì)粒掌握的。當(dāng)菌株細(xì)胞由于自發(fā)突變或外界條件影響(如高溫),致使掌握產(chǎn)量的質(zhì)粒脫落或者核內(nèi)DNA和質(zhì)粒復(fù)制不全都,即DNA復(fù)制速度超過質(zhì)粒,經(jīng)
3、多次傳代后,某些細(xì)胞中就不具有對(duì)產(chǎn)量起打算作用的質(zhì)粒,這類細(xì)胞數(shù)量不斷提高達(dá)到優(yōu)勢(shì),則菌種表現(xiàn)為衰退。3)連續(xù)傳代連續(xù)傳代是加速菌種衰退的一個(gè)重要緣由。一方面,傳代次數(shù)越多,發(fā)生自發(fā)突變(尤其是負(fù)突變)的幾率越高;另一方面,傳代次數(shù)越多,群體中個(gè)別的衰退型細(xì)胞數(shù)量增加并占據(jù)優(yōu)勢(shì)越快,致使群體表型消失衰退。4)不相宜的培育和保藏條件不相宜的培育和保藏條件是加速菌種衰退的另一個(gè)重要緣由。不良的培育條件如養(yǎng)分成分、溫度、濕度、pH值、通氣量等和保藏條件如養(yǎng)分、含水量、溫度、氧氣等,不僅會(huì)誘發(fā)衰退型細(xì)胞的消失,還會(huì)促進(jìn)衰退細(xì)胞快速繁殖,在數(shù)量上大大超過正常細(xì)胞,造成菌種衰退。2. 防止菌種衰退措施采納
4、已衰退菌種進(jìn)行生產(chǎn)會(huì)影響生產(chǎn)效率,而把已衰退菌種作為陽性菌株進(jìn)行檢驗(yàn),則會(huì)影響檢驗(yàn)正確率。既然變異是不行避開的,那么我們應(yīng)當(dāng)假如避開菌種衰退呢?1)掌握傳代次數(shù)盡量避開不必要的移種和傳代,把必要的傳代削減到最di的水平以削減突變幾率。傳代次數(shù)越多,產(chǎn)生突變的幾率就越大,菌種發(fā)生衰退的機(jī)會(huì)就越高。在試驗(yàn)室檢驗(yàn)或者是生產(chǎn)實(shí)際中,應(yīng)嚴(yán)格掌握傳代次數(shù)。中國(guó)藥典當(dāng)中規(guī)定,培育基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代,以防止菌株因傳代次數(shù)過多引起衰退影響檢驗(yàn)。2)利用不同類型細(xì)胞進(jìn)行接種傳代放線菌,霉菌用菌絲進(jìn)行移種比分生孢子簡(jiǎn)單衰退,因菌絲是對(duì)核且有異核存在,所以移種霉菌相宜采納孢子。3)良好的培育條
5、件不良的培育條件會(huì)衰退細(xì)胞的消失,因此采納相宜的培育基進(jìn)行菌種培育,以削減衰退幾率4)采納有效的菌種保藏方法依據(jù)保存時(shí)間的長(zhǎng)短,選擇相宜的保存方法。傳代培育法:復(fù)蘇后的第一代放于4冰箱或室溫保存,定期傳代培育。保藏時(shí)間依微生物種類而定。如,芽孢、霉菌、酵母菌保存6個(gè)月轉(zhuǎn)一次,一般細(xì)菌1個(gè)月轉(zhuǎn)一次,假單胞菌2周轉(zhuǎn)一次甘油凍存法:將復(fù)活后經(jīng)過性能確認(rèn)的菌株新奇培育物(一般是其次代菌株),用0.85%的滅菌生理鹽水(約1-2ml)洗斜面菌苔成菌懸液;將上述菌懸液吸取適量于滅菌管(凍存管)中(如,滅菌管容量為5ml,則取1.5ml菌液),加入等體積的40%滅菌甘油,混勻,密封。保藏溫度為20,一般可保存1-2年。瓷珠保存管保存:菌株保藏管內(nèi)含特制的小
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