IC50曲線測試實驗流程

1、IC50曲線的測定IC50即半抑制率，標準曲線是一個 S型曲線。IC50為50%卬制濃度即細胞存活量為對照樣本一半時所對應(yīng)的濃度，半數(shù)抑制越低，說明藥物對細胞的毒性越高。實驗操作步驟如下：細胞準備：細胞狀態(tài)檢測：從培養(yǎng)箱中取出細胞，顯微鏡下觀察。狀態(tài)描述：觀察結(jié)果，細胞匯合度：細胞處理：將細胞培養(yǎng)基吸出后，加入2ml PBS緩沖液洗一次，加入 1ml 0.25% Trypsin-EDTA ，放入培養(yǎng)箱中靜置數(shù)分鐘，直至細胞完全離壁懸浮，加入5ml含10%FBS勺培養(yǎng)基（無抗生素）終止酶活，混勻后液體轉(zhuǎn)移至15ml離心管，1000rpm 離心3min，棄去液體。細胞計數(shù)：于15ml離心管中加入1

2、ml含10%FBS的培養(yǎng)基（無抗生素），充分混勻。取40ul計數(shù)，公式如下：細胞濃度（數(shù)/ml ） = （4大方格細胞數(shù)之和/4 ） X 104X稀釋倍數(shù)最終得到的細胞密度填入下表，根據(jù)最終需要細胞濃度及體積進行稀釋。細胞數(shù)/孔起始濃度（/ml）所需體積（ml）需 20%FBS DMEM(ml)1總體積終濃度（/ml）細胞株名稀釋細胞將稀釋好的細胞用排槍加至 96 / 384 孔板：置于培養(yǎng)箱37 C 5%CO2條件下培養(yǎng)24小時，待細胞貼壁后加藥。藥物稀釋：將藥物進行3倍倍比稀釋。FlS 3倍倍比稀釋圖1111尹 r 評 r初躺沐度藥輛蓿液|v培養(yǎng)基lli將稀釋好的藥物加入前一天鋪好細胞的細

3、胞板上，37 C 5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)72h。熒光素酶檢測：將 Celltiter-Glo 與 ddH20 以 1:1 混合，加入細胞板（96 板：20ul/well; 384 板：10ul/well ）,靜置 10min 后，TECANinfinite F200酶標儀讀值。分析數(shù)據(jù)，繪制IC50曲線，尋找IC30,IC 50等值。驗證 IC50：根據(jù)IC50曲線找出IC50理論值，分別取1/2倍、1倍及2倍的理論值進行藥物濃度驗證。附錄:Materials for Experime ntNameCorporati on96-well plateCorni ng384-well plateGr

4、ei nerCentrifugeTube (15ml)BD Falco nPipets(10ml)Grei nerT-25 FlaskCorni ngTips,EP TubeAxyge n, MatrixReage nts for Experime ntNameCorporati onFBSExcellDPBSHyclone0.25%Trypsi n-EDTAGIBCOMediumCell-Titer Gio ?HyclonePromegaIn strume nts for Experime ntNameModelCorporatio nInv erted MicroscopeTS100Niko nCOI ncubatorBB16UVHeraeusBechtopZHJH-1109ZHCHENGCen trifuge5200KUBOTAMicroplate Readerinfinite F200TECANDisp