任務(wù) 培養(yǎng)基的制備技術(shù)

1、任務(wù) 培養(yǎng)基的制備技術(shù)第1頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日一、認(rèn)識(shí)化能自養(yǎng)菌氧化硫桿菌的培養(yǎng)基粉末狀硫 10g KH2PO4 4g MgSO4 0.5g CaCl2 0.5g (NH4)2SO4 0.4g FeSO4 0.01g 水 1000mL（自來(lái)水即可） 提問(wèn)：其中各組分作用是什么？空氣中的CO2能源碳源是什么？氮源鹽也可補(bǔ)加一部分碳酸鈉。第2頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日培養(yǎng)一種大腸桿菌的培養(yǎng)基配方如下： 葡萄糖 0.5g K2HPO4 1g MgSO4 0.2g NaCl 5g NH4H2PO4 0.4g 水 1000mL大腸桿菌的營(yíng)

2、養(yǎng)類(lèi)型？ 化能異養(yǎng)型。培養(yǎng)基的基本要求？ 至少有一種有機(jī)物，實(shí)驗(yàn)室中通常是葡萄糖第3頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日培養(yǎng)基類(lèi)型合成培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)天然培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基富集培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基按成分不同劃分按用途劃分按物理形態(tài)劃分二、培養(yǎng)基的分類(lèi)第4頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日(一)按成分劃分：天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)基第5頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日(一)按照培養(yǎng)基成分來(lái)源分：a. 天然培養(yǎng)基：利用化學(xué)成分還不清楚或不穩(wěn)定的天然有機(jī)物制成的培養(yǎng)基。 第6頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5

3、月20日，14點(diǎn)5分，星期日 優(yōu)點(diǎn)：原料來(lái)源充足、營(yíng)養(yǎng)豐富、經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便 缺點(diǎn)：成分和含量不確定，重復(fù)性差 用途：適用于實(shí)驗(yàn)室粗放性實(shí)驗(yàn)和大規(guī)模生產(chǎn)之用。 舉例：麥芽汁培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基第7頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日b. 合成培養(yǎng)基：用化學(xué)成分和量都確切知道的純化學(xué)試劑制成的培養(yǎng)基。 優(yōu)點(diǎn)：成分精確、穩(wěn)定、重復(fù)性好 缺點(diǎn)：價(jià)格較貴，微生物生長(zhǎng)緩慢用途：適用于做分類(lèi)鑒定，生物測(cè)定、選種育種等要 求較高的研究工作。舉例：高氏一號(hào)培養(yǎng)基，查氏培養(yǎng)基等 第8頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日(一)按照培養(yǎng)基成分來(lái)源分：c.半合成培養(yǎng)基：用天然有機(jī)物和化學(xué)藥

4、品制成的培養(yǎng)基。 特點(diǎn)：能充分滿足微生物的營(yíng)養(yǎng)要求，適合于大多數(shù)微生物的培養(yǎng)。 舉例：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基第9頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日可溶性淀粉 20.0克KNO3 1.0克K2HPO4 0.5克MgSO47H2O 0.5 克NaCl 0.5克FeSO4 7H2O 溶液2滴（10%）蒸餾水 1000毫升牛肉膏 3.0 克蛋白胨 10.0 克食鹽 5.0 克蒸餾水（自來(lái)水） 1000毫升合成培養(yǎng)基 天然培養(yǎng)基 第10頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日天然的固體培養(yǎng)基如馬鈴薯塊、麩皮、米糠、胡蘿 卜條、木屑等；凝固劑(1.52瓊脂) ，可用于微生

5、物的分離、鑒定、計(jì)數(shù)、保藏等凝固劑(0.30.6瓊脂)。常用于觀察細(xì)菌運(yùn)動(dòng)特征，噬菌體效價(jià)鑒定等。 微生物能充分接觸養(yǎng)料，有利于生長(zhǎng)繁殖及代謝產(chǎn)物積累，常用于微生物大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)。 固體培養(yǎng)基(solid medium)半固體培養(yǎng)基(semi-solid medium)液體培養(yǎng)基(liquid medium)（二）按照培養(yǎng)基的物理性狀分第11頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日不被微生物液化、分解和利用；在微生物生長(zhǎng)的溫度范圍內(nèi)保持固體狀態(tài)；凝固點(diǎn)溫度對(duì)微生物生長(zhǎng)無(wú)害；不因滅菌而被破壞；透明度好、黏著力強(qiáng)；配制方便，價(jià)格低廉。 理想的凝固劑應(yīng)具備以下條件：瓊脂：膠體多糖

6、，熔點(diǎn)96，凝固點(diǎn)40-50 第12頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日第13頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日基礎(chǔ)培養(yǎng)基加富培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基生產(chǎn)用培養(yǎng)基(三)按照培養(yǎng)用途分：第14頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日b. 加富培養(yǎng)基：根據(jù)待分離微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求配制的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。使目標(biāo)微生物能在其中旺盛生長(zhǎng)，逐步占優(yōu)勢(shì)，從而達(dá)到與雜菌分離的目的。 培養(yǎng)時(shí)要同時(shí)考慮營(yíng)養(yǎng)成分和培養(yǎng)環(huán)境兩個(gè)因素，才能達(dá)到預(yù)期的目的a. 基本培養(yǎng)基：能滿足一般微生物生長(zhǎng)繁殖所需要培養(yǎng)基。(三)按照培養(yǎng)用途：第15頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月2

7、0日，14點(diǎn)5分，星期日根據(jù)微生物的特殊要求，從自然界分離出特定已知微生物種類(lèi)；分離培養(yǎng)在特殊環(huán)境中才能生長(zhǎng)的微生物，以纖維素或石蠟油為唯一碳源的富集培養(yǎng)基，可以從混雜的微生物群體中分離出能分解纖維素或石蠟油的微生物。富集培養(yǎng)第16頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日C.選擇培養(yǎng)基 在培養(yǎng)基中加入抑制劑以殺死或抑制不需要的菌種，而目標(biāo)微生物因?qū)υ撘种苿┯锌剐远ＩL(zhǎng)繁殖的一類(lèi)培養(yǎng)基。 (三)按照培養(yǎng)基的用途分：第17頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日抑制劑： 青霉素（抑制 G+ 細(xì)菌） 分離G- 細(xì)菌 抗生素 氯霉素，鏈霉素（抑制細(xì) 菌 分離酵母、霉

8、菌 染料 膽鹽：抑制G+ 分離G- 孟加拉紅：抑制 分離 用于選擇性的物理因素有：溫度，氧氣，pH值，滲透壓等第18頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日 目的：增殖少數(shù) 手段：“投其所好”混合樣品 富集培養(yǎng)基 成為中劣勢(shì)菌 選擇培養(yǎng)基 優(yōu)勢(shì)菌 目的：抑制多數(shù)菌 手段：“取其所抗” 第19頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日d.鑒別培養(yǎng)基：利用微生物的代謝產(chǎn)物與指示劑的顯色反應(yīng)，快速鑒別不同微生物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。(三)按照培養(yǎng)基的用途：第20頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日鑒別培養(yǎng)基(differential medium)伊紅-美藍(lán)培

9、養(yǎng)基（EMB）：伊紅和美藍(lán)二種染料，可用于鑒別食品、水源、乳制品等待檢樣品中是否含有大腸桿菌。如果有大腸桿菌，則其代謝產(chǎn)物能與伊紅與美藍(lán)結(jié)合，使菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤。第21頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日目的：為了獲得數(shù)量充足和質(zhì)量較好的健壯菌體，同 時(shí)兼顧菌種對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基的適應(yīng)能力。 特點(diǎn)：營(yíng)養(yǎng)成分豐富且完全，氮源和維生素含量高、 易被利用目的：獲得最大強(qiáng)度的代謝產(chǎn)物。 特點(diǎn)：原料粗放、來(lái)源充足、價(jià)格低廉、碳源比例大，有時(shí)還在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加前體、促進(jìn)劑或抑制劑。（1）種子培養(yǎng)基 （2）發(fā)酵培養(yǎng)基 (四)按照培養(yǎng)基的使用目的分：第22頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，

10、5月20日，14點(diǎn)5分，星期日三、培養(yǎng)基應(yīng)具備的條件具有合適的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，滿足微生物對(duì)六大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求；應(yīng)始終保持在微生物發(fā)育的pH值范圍內(nèi)；任何培養(yǎng)基一旦配成，須立即滅菌后才能使用。第23頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日（一）目的明確（二）營(yíng)養(yǎng)協(xié)調(diào)（三）營(yíng)養(yǎng)適宜（四）條件適宜（五）經(jīng)濟(jì)節(jié)約四、配制培養(yǎng)基的原則第24頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日（一）目的明確培養(yǎng)何物？積累代謝產(chǎn)物？實(shí)驗(yàn)室或大規(guī)模發(fā)酵？培養(yǎng)菌體？第25頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日生理特點(diǎn)不同細(xì)菌放線菌霉菌營(yíng)養(yǎng)要求不同（ ）培養(yǎng)基（ ）培養(yǎng)基（ ）培養(yǎng)

11、基（二）營(yíng)養(yǎng)適宜自養(yǎng)微生物簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)物異養(yǎng)微生物至少提供一種有機(jī)物培養(yǎng)自生固氮微生物？培養(yǎng)乳酸菌？無(wú)氮培養(yǎng)基添加生長(zhǎng)因子第26頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日（三）營(yíng)養(yǎng)協(xié)調(diào)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度及配比合適 濃度過(guò)小 濃度過(guò)高水碳源氮源P 、SK、Mg生長(zhǎng)因子第27頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日（三）營(yíng)養(yǎng)協(xié)調(diào)一般培養(yǎng)基中C/N比為（100:0.52）但谷氨酸生產(chǎn)中較特殊： C/N 4/1時(shí)，菌體大量繁殖，谷氨酸積累少；C/N3/1 時(shí)，菌體生長(zhǎng)受抑制，而谷氨酸大量增加。第28頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日1. 滲透壓等滲溶液高滲

12、溶液細(xì)胞發(fā)生（ ） 低滲溶液 細(xì)胞（ ）（四）條件適宜第29頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日 細(xì) 菌：7.08.0放線菌：7.58.5酵母菌：3.86.0霉 菌：4.05.82. pH pH 內(nèi)源調(diào)節(jié) 緩沖液：K2HPO4/KH2PO4（pH 6.47.2）調(diào)節(jié)方式 固體碳酸鹽：CaCO3 外源調(diào)節(jié)：流加酸或堿第30頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日加入CaCO3 “備用堿”：CO32 HCO3 H2CO3 CO2+H2O+H+H+H+H磷酸緩沖液：pH值從6.7.之間K2HPO4+HCl KH2PO4+KClKH2PO4+KOH K2HPO4+H2O2. pH第31頁(yè)，共34頁(yè)，2022年，5月20日，14點(diǎn)5分，星期日3.O2濃度的調(diào)節(jié)由微生物與氧氣的關(guān)系形成了三類(lèi)微生物： 專(zhuān)性好氧性微生物 專(zhuān)性厭氧性微生物 兼性厭氧的微生物實(shí)踐對(duì)策： 專(zhuān)性好氧性微生物：空氣提供氧氣、工業(yè)上采用通氣裝置。 專(zhuān)性厭氧性微生物：采用理化方法除氧、向培養(yǎng)體系