發(fā)酵液溶磷含量測定

1、 編號共4頁制訂人制訂日期審核人審核日期批準人批準日期頒發(fā)部門質(zhì)量管理部實施日期一、目的：制訂發(fā)酵液溶磷含量測定標準操作規(guī)程，確保發(fā)酵液中溶磷含量檢測的準確。二、適用范圍：適用于公司發(fā)酵液溶磷含量的檢驗。三、責(zé)任者：質(zhì)量檢驗部QC操作人員四、內(nèi)容：1、原理：正磷酸鹽在酸性溶液中與鉬酸銨反應(yīng)生成磷鉬酸銨，再用抗壞血酸使之還原成低價的鉬藍，此藍色溶液符合比爾定律。2、儀器：電子分析天平分光光度計3、磷標準溶液配置取一定量KHPO(A.R)置于稱量瓶內(nèi)，在24解，加入ImL硫酸，于期10天。準確吸取上述磷標準溶液磷標準溶液。此標準溶液現(xiàn)配現(xiàn)用。4、定磷試劑配制：將下述溶液3mol/L硫酸、水、勻即得

2、?，F(xiàn)配現(xiàn)用。5、繪制磷標準曲線取7支試管，分別按下表加入各試劑，充分搖勻，照分光光度計校準使用SOP在恒溫水浴堝容量瓶105口干燥至恒重，精密稱取100mL容量瓶中，用水定容至刻度，2.5%鉬酸銨、10%抗壞血酸按體積比45口水浴660nm波長下測量其100mL容量瓶中定容至刻度，搖勻，即得1mL于刻度吸管0.439克，加水溶1mg/mL磷標準溶液。有效搖勻，即得10ug/mL1:2:1:1的比例混20分鐘，冷卻至室溫，按OD值。以溶液磷含量為縱坐標，OD值為橫坐標，繪制標準曲線，得到回歸方程。管號012345610ug/mL磷標準溶液(mL)00.51.01.52.02.53.0溶液磷含皿u

3、g)051015202530水(mL)3.02.52.01.51.00.50定磷試皿mL)3.03.03.03.03.03.03.0線性回歸系皿0.9996、樣品磷含量檢測取發(fā)酵液離心后上清液0.1mL，至試管中，加2.9mL水，再加入定磷試劑3mL,振搖，于45DOO20分鐘，冷卻至室溫，以空白做對照，按照分光光度計校準使用SOP于660波長測OD值。5計算：根據(jù)磷標準曲線以及稀釋倍數(shù)計算磷含量(ug/mL)。五、文件發(fā)放范圍公司生物產(chǎn)業(yè)部質(zhì)量管理部1份，質(zhì)量檢驗部2份，產(chǎn)業(yè)部相關(guān)領(lǐng)導(dǎo)每人1份，存檔2份。六、變更記錄：上版文件編號上版文件實施日期本次變更原因、依據(jù)及詳細變更內(nèi)容SL-QAD-

4、248-002003.02.10采用新版格式和編號，增加文件修訂內(nèi)容SLB-QC-010-012006.08.19增加了定磷試劑的配制、標定方法、標定記錄，規(guī)定了定磷試劑的有效期 磷標準曲線繪制記錄批號：編號：SLB-QC-010-02R1磷標準溶液配制：（天平編號：）精密稱取0.439克于105叮燥至恒重的磷酸二氫鉀，加水溶解，加入于100mL容量瓶中定容至刻度，搖勻，即得1mg/mL磷標準溶液。有效期ImL硫酸，10天。準確吸取上述磷標準溶液10ug/mL磷標準溶液?，F(xiàn)配現(xiàn)用。配制人：0000：1mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，即得00人：定磷試劑00：將下述溶液3mol/

5、L硫酸、水、1：2：1：1的比例混勻即得?，F(xiàn)配現(xiàn)用。0000：2.5%鉬酸銨、10%抗壞血酸按體積比試劑取用數(shù)量3mol/L硫酸水2.5%鉬酸銨10%抗壞血酸00人：0000：年月0磷標準曲線的繪0：（分光光度計編號：）取7支試管，分別按下表加入各試劑，充分搖勻，45D0020分鐘，冷卻至室溫，于660nm波長處分別測溶液OD值。以溶液磷含量為縱坐標，OD值為橫坐標，管號012345610ug/mL磷標準溶液（mL）00.51.01.52.02.53.0水（mLD3.02.52.01.51.00.50定磷試皿mLD3.03.03.03.03.03.03.0繪制標準曲線，得到回歸方程。測得溶液OD值為：管號0123456溶液磷含皿ug）051015202530ODD線性回歸方程（磷標準曲線）為：線性回歸系數(shù)應(yīng)口0.999線性回歸系數(shù)為：符合規(guī)定口標定人：不符合規(guī)定標定00：年月0復(fù)核人：00：年月0 發(fā)酵液溶磷檢驗記錄編號：SLB-QC-010-02R2品名：批號：操作步驟：取發(fā)酵液離心上清液0.1mL至試管中，加2.9mL水，加定磷試劑3mL,振搖，于45口水浴20分鐘，冷卻至室溫，以空白做對照，按照分光光度計校準使用SOP于