補骨脂湯對癡呆大鼠海馬NR2B、BDNFTrkB表達的影響

1、補骨脂湯對癡呆大鼠海馬NR2B、BDNF/TrkB表達的影響【摘要】目的為討論補骨脂湯對改善血管性癡呆大鼠的空間學習記憶的機理。方法用雙側結扎頸動脈反復灌注，用rris試驗測試大鼠的空間學習記憶，RT-PR測定與學習記憶親密相關的NR2B、BDNF/TrkB基因表達產物。結果補骨脂湯高、低劑量組的逃避埋伏期都明顯短于模型組P0.01，補骨脂湯高、低劑量，均可明顯進步NR2B、BDNF/TrkBRNA表達P0.05。結論補骨脂湯能明顯改善血管性癡呆大鼠的空間記憶，其可能的機制是通過進步NR2B、BDNF/TrkBRNA表達程度而發(fā)揮作用的?！娟P鍵詞】補骨脂湯；血管性癡呆；NR2B；BDNF/Tr

2、kBRNAAbstrat：bjetiveTeluidatetheehanisfBuGuZhiDetinhtiprvevasulardeentiaratsnspatiallearningandery.ethdsExperientalVDdelratseresubjetedtthebilateralnartidarteriesligatinandreperfusin,theperfranefspatiallearninganderyfallratsereeasuredusingtherrisateraze.estudiedthelevelfNR2B、BDNF/TrkBRNAsinthehippap

3、usfratsbyRT-PRtehnique.ResultsBuGuZhiDetinuldsignifiantlyshrtentheesapelatenytieinplaenavigatintest，inreasethenuberfpassingthrughpriaryflatplaeinspatialprbetestP0.01.ThelevelfNR2B、BDNF/TrkBRNAsintheBuGuZhiDetingruperearkedlyhigherthanthsefthedelgrupandtheshaperatingrupP0.05rP0.01).nlusinBuGuZhiDetin

4、aniprvethespaiuslearning-ery.TheehanisayenhanetheexpressinlevelfNR2B、BDNF/TrkBRNAs.Keyrds：BuGuzhiDetin;Vasulardeentia;NR2B;BDNF/TrkB隨著人類的壽命日趨延長,老年性癡呆的患病率也逐漸增加，該病嚴重影響老年人的生活質量，引起了醫(yī)療界的廣泛關注。在我國常見的老年性癡呆主要是血管性癡呆(VaD)。血管性癡呆是由一系列腦血管因素導致腦組織損害所引起的癡呆的總稱，為一種進展性疾病，預后不良,國內外學者一直進展研究以圖改善病人病癥，進步生活質量，延長壽命。西醫(yī)治療本病存在局限性

5、，而中醫(yī)治療本病療效顯著，可以明顯改善生活質量，因此，得到廣泛認可。根據該病的成因和臨床表現，中醫(yī)辨證認為病位在于腦，涉及肝、腎、心、脾，病因病機為本虛標實。本虛即氣虛、腎虛；標實為氣滯、血瘀、濁毒、火盛。往往因虛致使痰瘀濁毒留于腦竅，形成巢囊，腦氣與臟氣不相接續(xù)而致病13。故本實驗以此病因病機為根據，初步研究發(fā)現補骨脂湯能明顯改善血管性癡呆大鼠空間的學習記憶，但其作用機理目前尚不清楚，故本實驗將從空間學習記憶親密相關的的NDAR2、BDNF/TrkB基因表達產物入手，進一步說明作用處徑，為其臨床應用提供實驗根據。1材料與儀器1.1動物實驗動物選用SD大鼠60只(購于南昌大學醫(yī)學院動物中心)，

6、雌雄各半，體質量160180g。1.2中藥由江西中醫(yī)學院附屬醫(yī)院藥房提供。1.3儀器及試劑水迷宮實驗裝置，PR擴增儀,核酸電泳槽，DPG-900型凝膠圖像分析系統(tǒng)，凈化臺，DYY-5型電泳儀。Trizl及Taq酶均自美國Invitrgen公司，其他化學試劑都是國產試劑。2方法2.1分組把60只大白鼠隨機分成5組，每組雌雄各半，分別為假手術組，模型組，中成藥組，補骨脂湯低劑量組，補骨脂湯高劑量組。2.2造模在造模前補骨脂湯高、低劑量組用補骨脂湯灌胃7d，第8天對5組進展手術造模，用2的戊巴比妥鈉40g/kg腹腔注射麻醉，75酒精消毒頸前皮膚，頸正中切口別離雙側頸總動脈穿線備用，用無創(chuàng)動脈夾夾閉一

7、側頸總動脈10in,去夾后立即關閉另一側頸總動脈，每側夾閉1次，每次10in，去動脈夾撤線縫合皮膚，在手術部位撒一層青霉素粉末。假手術組只進展頸總動脈的別離不夾閉血管，各組手術造模后待大鼠清醒然后放回籠中保溫飼養(yǎng)。2.3給藥方法術后第3天開場給藥，中成藥組劑量予銀杏葉片7.2g/(kgd),補骨脂湯低劑量組劑量予9.82g/(kgd)，高劑量組劑量予19.64g/(kgd)，2次/d，連續(xù)25d。2.4rris實驗將大鼠面向池壁置于象限1/2弧度處入水，經120s未找到站臺的大鼠，將其引至站臺停留10s,引導其學習記憶，各組大鼠每天訓練2次，共訓練6d，記錄大鼠找到平臺確實切時間。在整個實驗中

8、，實驗者要與動物視線隔開，室內要保持安靜及周圍環(huán)境的相對穩(wěn)定。轉貼于論文聯盟.ll.2.5半定量的RT-PR按照TRIZL試劑說明書提取總RNA，在20l反轉錄反響體積中進展反轉錄，合成DNA。取上述逆轉錄產物PR擴增NR2B、BDNF、TrkB。NR2B：Frardprier:5GTAGGATGTATGG3，Reverseprier:5AGGGAGTTTTTTGTT3，產物長度331bp；BDNF：Frardprier:5TTATTTATATTGGTTG3，Reverseprier:5ATGGGATTAAATTGGTT3,產物長度547bp；TrkB：FrardPrie:5GGTTATGTT

9、GTGGT3,Reverseprier:5TGGGTAATGTGTTAGGT3,產物長度148bp。25lPR反響體系中進展PR反響NR2BRNA、BDNFRNA、TrkBRNA:955in,9430s,5320s,7230s,30個循環(huán)，72終延伸5in；GAP-43RNA：955in,9430s,5520s,7230s,30個循環(huán)，72終延伸5in。PR產物用2瓊脂糖凝膠溴化乙錠電泳別離，用凝膠圖形分析系統(tǒng)進展拍照，觀察結果并測定灰度值，以擴增的目的條帶和同時擴增的atin的灰度值比對各基因轉錄程度進展衡量。2.6統(tǒng)計學處理數據采用s表示，應用應用SPSS150統(tǒng)計軟件，組間比擬采用方差分

10、析及q檢驗。3結果3.1補骨脂湯對血管性癡呆大鼠空間學習記憶的影響給藥30d后，進展rris實驗，結果見表1，從表1數據可以看出，各大鼠在游泳測試中，其逃避埋伏期都隨游泳天數的增加逐漸下降，且前三天的的逃避埋伏期下降速度比擬快，后三天的埋伏期逐漸穩(wěn)定下來。而且，與模型組相比，補骨脂湯的高、低劑量組和銀杏葉片組的逃避埋伏期都有明顯的縮短P0.01，說明補骨脂湯和銀杏葉片對血管性癡呆大鼠的空間記憶都有明顯的改善作用。且補骨脂湯的高、低劑量組的逃避埋伏期比銀杏葉片組有明顯的縮短P0.01，說明補骨脂湯改善血管癡呆大鼠的空間記憶的作用要優(yōu)于銀杏葉片。表1各大鼠在rris水迷宮實驗中的空間區(qū)分記憶的逃避

11、埋伏期略3.2補骨脂湯對血管性癡呆海馬內NR2B、BDNF/TrkBRNA表達的影響用RT-PR的方法對NR2B、BDNF/TrkBRNA表達程度進展分析，發(fā)現:與模型組比擬,補骨脂湯無論是高劑量，還是低劑量，均可明顯進步NR2B、BDNF/TrkBRNA表達P0.05,而銀杏片組只進步了BDNF/TrkBRNA表達程度(P0.05)；盡管補骨脂湯組與銀杏片組無明顯差異P0.05，但補骨脂湯促NR2B、BDNF/TrkBRNA表達程度要高于銀杏片(表2)。表2補骨脂湯對血管性癡呆海馬內NR2B、BDNF/TrkBRNA表達的影響略4討論中醫(yī)認為，VaD的發(fā)病病位在腦，屬本虛標實之證，本虛即氣虛

12、、腎虛；標實是指痰濁、瘀血、濁毒。本虛標實互相夾雜、影響、轉化，復加飲食、情志、勞逸等因素，而致臟腑功能失調，氣滯血瘀，濁毒內生，腦氣臟氣不相順接，腦髓失養(yǎng)而本錢病4。根據該疾病的病機，本實驗室選用補骨脂湯治療血管性癡呆大鼠，發(fā)現：補骨脂湯的高、低劑量組的逃避埋伏期都有明顯的短于模型組，說明補骨脂湯能明顯改善血管性癡呆大鼠的空間記憶P0.01。這可能是補骨脂湯中的人參大補元氣，使氣旺精足，安神益智；補骨脂、益智仁、蓯蓉、熟地具有補腎填精成效；遠志能祛痰開竅；大棗、當歸具有益氣作用；丹參有活血行氣祛瘀通絡的作用。諸藥合用，使其具有補腎精、益氣血、活血化痰的作用，從而改善了大鼠的空間學習記憶2，3

13、。為進一步說明該方的作用機理，本實驗對海馬內影響空間學習記憶的NR2B、BDNF/TrkB基因表達產物進展分析，發(fā)現：補骨脂湯無論是高劑量，還是低劑量，均可明顯進步NR2B、BDNF/TrkBRNA表達，提示：補骨脂湯改善癡呆大鼠的空間學習記憶可能與NR2B、BDNF/TrkB基因表達產物有關。因為在哺乳動物中樞神經系統(tǒng)中，由NDA受體介道的興奮性神經傳導在生理、病理過程中發(fā)揮重要作用，也是人類治療神經疾病希望的靶點，通過NDA受體的激活作用調節(jié)基因表達，會影響神經發(fā)育、突觸可塑性及學習記憶，含NR2B和NR2A的NDA受體互相藕聯產生明確的細胞內的信號轉導，導致了的BDNF的表達和細胞外信號

14、調節(jié)激酶1/2激活57。但方中的哪些成分是影響NR2B、BDNF/TrkBRNA表達，從而改善血管性癡呆大鼠空間學習記憶，目前尚不清楚，將是今后研究的重點，也是中藥現代化研究的重要方面。【參考文獻】1姚龍華.血管性癡呆辨治心法J.四川中醫(yī),2022，263：56.2鄭里翔,汪敏,辛增平.補骨脂湯對實驗性血管性癡呆大鼠學習記憶行為學的影響J.江西中醫(yī)學院學報，2022，2：67.3鄭里翔，汪敏，辛增平.補骨脂湯對血管性癡呆大鼠海馬內-FS基因表達及學習記憶的影響J.中醫(yī)藥學刊,2022，245：278.4閆敬來,陳燕清.老年癡呆病機的中醫(yī)學認識概述J.中華中醫(yī)藥雜志,2022，237：168.5JenniferJ.Brightell,laytnA.Sith,etal.Lng-tereryfrplaelearningisfailitatedbyexpressinfAPrespnseeleent-bindingprtEininthedrsalhippapusJ.Learn.e,202214:195.6DavidL,NishhalS,EdiB,