欖香烯聯(lián)合生物大分子合成抑制劑對HcaF肝癌的作用

1、欖香烯團結(jié)生物大分子合成按捺劑對Hca-F肝癌的作用作者:郭連英，陳駿，沈潔，邢嶸1，施廣霞，錢振超【摘要】目的本實行接納欖香烯與生物大分子合成按捺劑團結(jié)處置懲罰小鼠肝癌細胞Ha-F，不雅察腫瘤細胞增殖、凋亡和形態(tài)學(xué)的變革，探究按捺/滋擾腫瘤細胞的DNA、RNA或卵白質(zhì)合成對欖香烯抗瘤作用的影響，以期為斷定欖香烯作用的大概靶點提供線索與根據(jù)。要領(lǐng)將Ha-F肝癌細胞用欖香烯50g/l、吡柔比星THP10l/l、單獨和復(fù)合處置懲罰，設(shè)單獨瘤細胞不處置懲罰為陰性比擬。Ha-F細胞濃度均為1106/l，每個不雅察時間點均設(shè)3支復(fù)管，用臺盼藍拒染法盤算細胞存活率，在透射電鏡下不雅察欖香烯與THP團結(jié)處置

2、懲罰對腫瘤細胞超微布局的影響，用流式細胞儀檢測細胞凋亡和細胞周期。效果欖香烯團結(jié)吡柔比星處置懲罰Ha-F比單獨利用兩種藥物的抑瘤率都高。結(jié)論本實行所用生物大分子合成按捺劑不克不及阻斷欖香烯的抗瘤作用，提示欖香烯抗腫瘤作用對新的卵白質(zhì)表達依靠性較低。團結(jié)欖香烯處置懲罰后瘤細胞形態(tài)學(xué)的變革，提示欖香烯大概作用于腫瘤細胞膜或細胞中的某些卵白質(zhì)如酶等而直接殺傷腫瘤靶細胞，使對欖香烯抗瘤作用靶點的熟悉又進了一步。本實行效果表白欖香烯和THP適用可使抗癌作用加強，這對欖香烯團結(jié)其他藥物治療腫瘤大概有必然參考意義?！娟P(guān)鍵詞】欖香烯；按捺劑；肝細胞癌Theeffetfeleenebinedithinhibit

3、rsfarleularsynthesisfrhepatianer【Abstrat】bjetiveInthisexperientfHa-Fells(aurinehepatiellarina)eretreateditheleenebinedithinhibitrsfarleularsynthesis，thEirprliferatin，survival，ellyle，apptsisandrphlgyerebserved.TlarifytheinfluenesfinhibitinfDNA，RNAandprteinntheantitureffetsfeleeneandtfindthepssibletar

4、getsitefeleene.ethdsTheHa-Fellseresingledringledtreateditheleene50g/l，alnerbinedithTHP10l/l，theHa-Fells(ithuttreatent)ereusedtbethenegativepare.TheendnsistenefHa-Fellsis1106/l，threetublesineverytiepint.Talulatetheprprtinfsurvivalithtrypanblue，andbservetheipatntheultrastruturefHa-Fellstreateditheleen

5、eandTHPintransissineletrnirspe，andexainetheapptsisandellylesinflyteter.ResultsTheinhibitinratefprliferatinfHa-FtreateditheleeneandTHPashigherthanthatfHa-Ftreateditheleenenly.nlusinTheseresultsshedthattheantitureffetsfeleeneuldntablishedbybinedtreatentrpretreatentiththeinhibitrsfDNA，RNA，prteinsynthes

6、is，hihsuggestthattheantitureffetsfeleeneaybeindependentntheirsynthesis.binedusagefeleeneithTHPtanertherapyisadvisable.【Keyrds】eleene；inhibitr；hepatellulararina欖香烯(eleene)是從中藥溫莪術(shù)經(jīng)斷定為我國特有新種定名為溫郁金，uruaenyujin揮發(fā)油中提取的抗癌有用身分，它是一種僅含碳氫(15H24)，分子量只有204的小分子、脂溶性的倍半萜類化合物，此類物質(zhì)有抗癌活性屬我國首報1。動物實行與臨床應(yīng)用均表白欖香烯的抗癌作用確切，并

7、且不良反響很低。我們已往的研究表白欖香烯處置懲罰除可按捺腫瘤細胞增殖、誘導(dǎo)其凋亡外，還能加強腫瘤細胞的免疫原性，欖香烯處置懲罰能加強腫瘤細胞膜HSP70的表達，用表達譜基因芯片技能的研究表白欖香烯處置懲罰引起基因表達譜的變革。已往對欖香烯抗癌作用機制的研究僅限于欖香烯對腫瘤細胞增殖、分化和凋亡、免疫原性等的影響，關(guān)于它的作用靶點及其信號傳導(dǎo)通路迄今研究很少。本實行在上述研究的底子上，接納欖香烯與生物大分子合成按捺劑團結(jié)處置懲罰小鼠肝癌細胞Ha-F，不雅察腫瘤細胞增殖、凋亡和形態(tài)學(xué)的變革，探究按捺或滋擾腫瘤細胞的DNA、RNA或卵白質(zhì)合成對欖香烯抗瘤作用的影響，以期為斷定欖香烯作用的大概靶點提供

8、線索與根據(jù)。1質(zhì)料與要領(lǐng)11動物Balb/系小鼠，引自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京藥物研究所，由本室自行生殖提供。12瘤株小鼠腹水型肝癌H22的高淋巴道轉(zhuǎn)移亞系Ha-F2，由本校病理學(xué)教研室凌茂英傳授贈予，本室通例傳代、保種。1.3重要藥品和試劑1%欖香烯注射液(eleene，大連市醫(yī)藥科學(xué)研究所)。吡柔比星(Pirarubiin，THP，深圳萬樂藥業(yè)消費)。RPI1640造就基GIB，USA。1.4Ha-F細胞懸液的制備將傳代保種的Ha-F腹水型肝癌細胞通例接種于小鼠腹腔，0.2l/只，網(wǎng)絡(luò)第78天的腹水腫瘤細胞生長最茂盛時期，殞命細胞和紅細胞含量較少，HS液排除紅細胞，PBS洗3次，計活細胞數(shù)，用含

9、20%小牛血清RPI1640造就液調(diào)細胞數(shù)至所需濃度。1.5Ha-F肝癌細胞的處置懲罰將Ha-F肝癌細胞用欖香烯50g/l、吡柔比星10l/l按本室通例要領(lǐng)單獨或復(fù)合處置懲罰，設(shè)單獨瘤細胞不處置懲罰比擬。Ha-F細胞濃度均為1106/l，每個不雅察時間點均設(shè)3支復(fù)管，參加相應(yīng)的藥品，以臺盼藍拒染法于差異時間計數(shù)活細胞數(shù)，盤算存活率。1.6單純欖香烯處置懲罰和欖香烯團結(jié)THP處置懲罰對Ha-F增殖的影響用TT法測其D值。1.7欖香烯團結(jié)THP處置懲罰對瘤細胞超微布局的影響3Ha-F細胞用欖香烯、THP單一或復(fù)合處置懲罰，細胞濃度和處置懲罰要領(lǐng)同前，處置懲罰時間為1h，收細胞，用PBS洗3次，以2

10、.5%戊二醛結(jié)實，通例包埋制片，鈾鉛雙染色，透射電鏡下不雅察攝片。1.8細胞凋亡的檢測和細胞周期的測定細胞網(wǎng)絡(luò)同前，用PBS洗3次，參加PI染色液染色30in避光、室溫。上機檢測，ellquest軟件低速獲齲用dfit2.0軟件闡發(fā)。2實行效果2.1欖香烯團結(jié)THP處置懲罰對Ha-F存活的影響單純用欖香烯處置懲罰，Ha-F的存活率就顯著低落，在30in1h的時間內(nèi)，細胞殞命率隨著藥物濃度增長而增長表1，單用THP處置懲罰，也可導(dǎo)致Ha-F細胞殞命、藍染，其細胞殞命率也隨著藥物濃度增長而增長，欖香烯團結(jié)THP處置懲罰，腫瘤細胞殞命率可達100%。表1欖香烯單獨或團結(jié)THP處置懲罰對Ha-F細胞存

11、活的影2.2欖香烯和THP團結(jié)處置懲罰對Ha-F細胞周期與凋亡的影響實行效果表白欖香烯與THP團結(jié)處置懲罰對Ha-F細胞周期變革的影響及凋亡細胞百分率變革與單用THP比擬也無顯著區(qū)別，欖香烯處置懲罰與不處置懲罰Ha-F比擬組細胞各時相百分率及凋亡細胞百分率變革無顯著區(qū)別見表2和圖1。表2欖香烯團結(jié)THP處置懲罰對Ha-F細胞周期與凋亡的影響2.3欖香烯團結(jié)THP處置懲罰對Ha-F細胞形態(tài)學(xué)的影響見圖2。圖2可示：當欖香烯與THP團結(jié)處置懲罰的腫瘤細胞形態(tài)產(chǎn)生了顯著的變革，細胞核染色質(zhì)濃縮，核縮小，細胞腫脹破碎，細胞完備性受到顯著粉碎，而單純用THP處置懲罰的30in內(nèi)大多數(shù)沒有顯著改變，受損細胞形態(tài)學(xué)變革不典范，偶可見到凋亡、壞死的細