柱色譜法分離

1、實(shí)驗(yàn)十、柱色譜法分離 柱色譜的原理跟薄層色譜、紙色譜、氣相色譜及高效液相色譜等一樣，即是利用混合物中各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶解性能（即分配）的不同或其它親和作用性能的差異，使混合物的溶液流經(jīng)該種物質(zhì)，進(jìn)行反復(fù)的吸附或分配等作用，從而將組分分開。流動(dòng)的混合物稱為流動(dòng)相，固定的物質(zhì)稱為固定相。 1 柱色譜（柱上層析）常用的有吸附柱色譜和分配柱色譜兩類。吸附柱色譜常用氧化鋁和硅膠作固定相。在分配柱色譜中以硅膠、硅藻土和纖維素作為支持劑，以吸收較大量的液體作固定相，而支持劑本身不起分離作用。 吸附柱色譜通常在玻璃管中填入表面積很大，經(jīng)過活化的多孔性或粉狀固體吸附劑。當(dāng)待分離的混合物溶液流過吸附柱時(shí)

2、，各種成分同時(shí)被吸附在柱的上端。當(dāng)洗脫劑流下時(shí)，由于不同化合物吸附能力不同，往下洗脫的速度也不同，于是形成了不同層次，即溶質(zhì)在柱中自上而下按對(duì)吸附劑親和力大小分別形成若干色帶，再用溶劑洗脫時(shí)2 常用的吸附劑有氧化鋁、硅膠、氧化鎂、碳酸鈣和活性炭等，一般要經(jīng)過純化和活性處理。顆粒大小均勻，粒小，表面積大吸附能力就高，但過小，溶劑流速太慢。氧化鋁有：酸性PH為4，中性PH=7.5，堿性PH=10，3種，大多數(shù)吸附劑都能強(qiáng)烈吸水，使活性降低，通常用加熱方法使吸附劑活化?；钚缘燃?jí)可用勃?jiǎng)诳寺鼧?biāo)準(zhǔn)測定法，分五級(jí)。I級(jí)活性最高，V級(jí)吸附力最弱。已經(jīng)分開的溶質(zhì)可以從柱上分別洗出收集；或者將柱吸干，擠出后按色

3、帶分割開，在用溶劑將各色帶中的溶質(zhì)萃取出來。對(duì)于柱上不顯色的化合物分離時(shí)，可用紫外光照射后所呈現(xiàn)的熒光來檢查，或在用溶劑洗脫時(shí)，分別收集洗脫液逐個(gè)加以鑒定。3色層的展開首先使用極性較小的溶劑，使最容易脫附的組分分離。然后加入不同比例的極性溶劑配成的洗脫劑，將極性較大的化合物自色譜柱中洗脫下來。所用溶劑必須純粹、干燥。吸附劑用量為被分離樣品量的3040倍，需要時(shí)可增至100倍。柱高與直徑之比是75：1。（利用相似相溶原理）本實(shí)驗(yàn)采用干法裝柱?；衔锏奈叫耘c它們的極性成正比。4一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解掌握柱色譜原理和方法2、進(jìn)一步掌握旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的使用方法。二、試劑 5g氧化鋁，自制乙酰二茂鐵（溶于1.5ml正己烷），石英砂。洗脫劑： 正己烷，1 ：1=二氯甲烷：正己烷， 9 ：1=二氯甲烷：正己烷， 9 ：1=二氯甲烷：甲醇。5三、裝置圖溶劑石英砂氧化鋁砂芯柱色譜裝置6四、操作規(guī)程收集黃色產(chǎn)物于一已知重量燒瓶中78五、操作要點(diǎn)1、色譜柱一定要干燥，若潮濕可用吹風(fēng)機(jī)吹干或用無水有機(jī)溶劑（甘油等）清洗。2、裝柱要緊密均勻，無裂縫，無氣泡，是分離效果好壞的關(guān)鍵。但裝填時(shí)過分敲擊，又會(huì)太緊密而流速太慢。3、加入砂子的目的是在加料時(shí)不致把吸附劑沖起，而影響分離效果。94、在整個(gè)洗脫過程中，為了保持色譜柱的均一性，應(yīng)使柱中洗脫劑液面始終保持不低于石英砂面。否則柱中溶劑流干時(shí)，就會(huì)使柱