新城疫病毒對血管生長的抑制作用

1、新城疫病毒對血管生長的抑制作用【摘要】目的研究雞新城疫病毒對血管的生長抑制作用。方法采用小鼠肺癌轉(zhuǎn)移模型觀測雞新城疫病毒NDV對癌細胞轉(zhuǎn)移的影響及組織內(nèi)微血管的生長情況；用體外藥物敏感實驗TT檢測NDV在不同劑量和作用時間下對人血管內(nèi)皮細胞EV304細胞的增殖抑制效應(yīng)；用PI和Hehst33342進展熒光染色檢測NDV作用后細胞有無凋亡改變及其形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果NDV在體內(nèi)可以有效抑制小鼠發(fā)生癌轉(zhuǎn)移時組織內(nèi)微血管的生成，在體外可以抑制EV304細胞的增殖并導(dǎo)致較為細微的凋亡現(xiàn)象。結(jié)論體內(nèi)外實驗均說明NDV可以抑制腫瘤發(fā)生時微血管的生長，這一作用通過抑制血管內(nèi)皮細胞的增殖而非直接的細胞毒作用實現(xiàn)，

2、該作用機制可能與某種特定病毒蛋白有關(guān)，尚待進一步研究?！娟P(guān)鍵詞】NDV；血管生成抑制劑；肺轉(zhuǎn)移GrthInhibitinfNeastleDiseaseVirus(NDV)nVEinKeyrds：NDV;Angigenesisinhibitr;Pulnaryetastasis腫瘤生長依賴從生長環(huán)境中獲得營養(yǎng)并向環(huán)境排泄代謝產(chǎn)物，當(dāng)腫瘤細胞的量較為少時，其與環(huán)境之間的物質(zhì)交換可以通過彌散的方式來完成，但是，當(dāng)腫瘤組織增大到一定程度時，物質(zhì)交換就需要通過其間的血管網(wǎng)來完成。研究說明，腫瘤組織的增長速度與其對血液供給的依賴性成正比。因此，從理論上來說，通過抑制血管生長進而阻斷腫瘤的血供，可以到達抑制腫

3、瘤增長及轉(zhuǎn)移的目的。大量研究說明，雞新城疫病毒可以通過直接的細胞毒作用和對腫瘤細胞凋亡的誘導(dǎo)作用起到抗腫瘤效果1。本研究通過體內(nèi)、體外兩種方法討論了雞新城疫病毒對血管生長的抑制作用，進一步提醒了雞新城疫病毒抗腫瘤作用的機理。1材料和方法1.1實驗材料1.2實驗方法1.2.2肺轉(zhuǎn)挪動物模型的建立取接種7天左右的種鼠，頸椎脫臼處死后抽取腹水，用生理鹽水稀釋至2.5106/L。經(jīng)尾靜脈注射接種瘤細胞，每鼠0.2L2。1.2.3抗腫瘤轉(zhuǎn)移實驗將接種后的小鼠隨機分為空白對照組及治療組，每組10只。接種后24小時起腹腔給藥血凝效價1640，0.2L/只，每3天給藥一次，對照組給等量PH7.2的PBS，共給

4、藥5次。接種后第15天頸椎脫臼處死小鼠，解剖取肺并檢查有無其他臟器及部位的轉(zhuǎn)移。肺組織常規(guī)固定、包埋、切取最大截面計數(shù)轉(zhuǎn)移灶數(shù)，并觀察肺組織內(nèi)血管的生長情況。1.2.5熒光顯微鏡檢測藥物對EV304細胞核形態(tài)學(xué)特征的影響分別將Hehst33342和碘化丙啶PI配成100g/L的母液，用前等量混合。細胞經(jīng)14NDV處理16h、24h、48h后分組搜集。每個標本取200L移入EP管中，參加熒光染料Hehst33342至終濃度10g/L，碘化丙啶PI20g/L，37下染色15in，取20L細胞懸液迅速滴于載玻片上，加蓋玻片，紫外光激發(fā)，在熒光顯微鏡下觀察可見4種細胞形態(tài)，活細胞VN染為藍色，核呈正常

5、構(gòu)造；早期凋亡細胞VA染為藍色，核呈固縮狀或圓珠狀；非凋亡的死亡細胞NVN染為紅色，核呈正常構(gòu)造；晚期凋亡細胞NVA也染為紅色，但可見明顯的染色質(zhì)凝聚，細胞凋亡率可由以下公式計算4：凋亡率=VA+NVAVN+NVN+VA+NVA100%2結(jié)果2.1雞新城疫病毒對小鼠肺血管生成的影響S180肉瘤尾靜脈內(nèi)接種以形成肺轉(zhuǎn)移灶為主，亦有其他部位的轉(zhuǎn)移。10只對照組小鼠肺外表及肺內(nèi)均出現(xiàn)直徑0.52.0的粒狀轉(zhuǎn)移灶，肺組織顏色深紅，有明顯的充血病癥圖略，其中出現(xiàn)胸膜黏連3只，腹膜、腋下轉(zhuǎn)移性包塊2只。治療組肺組織發(fā)白，除2只肉眼可見極小的轉(zhuǎn)移灶外，其余均為鏡下轉(zhuǎn)移灶圖略。光鏡下S180肉瘤實驗性肺轉(zhuǎn)移對

6、照組的轉(zhuǎn)移灶內(nèi)及周圍血供豐富，瘤細胞密集，生長旺盛，有明顯的血管增生擴張、充血和出血，一些血管腔內(nèi)有從轉(zhuǎn)移灶侵入的瘤細胞。并見大片壞死區(qū)，見圖1，此外，對照組肝臟也可見少量散在的轉(zhuǎn)移灶。NDV組小鼠肺內(nèi)也見散在的小轉(zhuǎn)移灶，其中有散在的凋亡細胞。未見血管擴張、充血，無血管長入，組織內(nèi)血管細、少、閉鎖，亦未見成片的壞死灶，見圖2。2.2TT法觀察NDV對血管內(nèi)皮細胞EV304的影響各濃度NDV對人血管內(nèi)皮細胞EV304的增殖均有抑制作用，且呈良好的時間量效關(guān)系，結(jié)果見表1，治療組細胞生長抑制率同對照組的抑制率比擬有極顯著差異P0.01。表1TT法觀察雞新城疫病毒對人血管內(nèi)皮細胞EV304增殖的抑制作用與空白組比擬:P0.05；*與空白組比擬:P0.012.3熒光顯微鏡檢測細胞核變化在熒光顯微鏡下，可以觀察到存活細胞和凋亡早、晚期及壞死的細胞。藥物作用0、12、24、48h其凋亡率分別為0.5%、4%、6%、11%，隨誘導(dǎo)時間的延長，凋亡率增高，呈時間依賴關(guān)系，見表2。統(tǒng)計說明，NDV組第12、24、48小時時間段凋亡率與陰性組相比雖然表現(xiàn)為不同程度的增加，但均未見顯著性差異。鏡下觀察發(fā)現(xiàn)給藥組隨作用時間的延長，其與空白組相比細胞密度的降低并不主要表現(xiàn)為死亡細胞的增加，而是NDV抑制細胞增殖的