化學(xué)發(fā)光介紹

1、化學(xué)發(fā)光介紹第1頁(yè)，共23頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)0分，星期一化學(xué)發(fā)光免疫分析方法簡(jiǎn)介化學(xué)發(fā)光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA） 是近十年來(lái)在世界范圍內(nèi)發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析。它具有高靈敏度、檢測(cè)范圍寬、操作簡(jiǎn)便快速、標(biāo)記物穩(wěn)定性好、無(wú)污染、儀器簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)。它是放射性免疫分析與普通酶免疫分析的取代者，是免疫分析重要的發(fā)展方向。CLIA發(fā)展迅猛，已占各種免疫分析的首位，是目前放射免疫分析和酶聯(lián)免疫分析最佳的取代者。 第2頁(yè)，共23頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)0分，星期一化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定是目前世界公認(rèn)先進(jìn)的標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)，

2、化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)具有高度的準(zhǔn)確性和特異性，成為檢驗(yàn)方法中最為重要的技術(shù)之一?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)作為疾病診斷的主要手段已被廣泛用于機(jī)體免疫功能、傳染性疾病、內(nèi)分泌功能、腫瘤標(biāo)志物、性激素、甲狀腺功能等方面的體外診斷實(shí)驗(yàn)中。第3頁(yè)，共23頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)0分，星期一化學(xué)發(fā)光是一種特異的化學(xué)反應(yīng)，有機(jī)分子吸收化學(xué)能后發(fā)生能級(jí)躍遷，產(chǎn)生一種高能級(jí)的電子激發(fā)態(tài)不穩(wěn)定的中間體，當(dāng)其返回到基態(tài)而發(fā)出光子，即為化學(xué)發(fā)光。將化學(xué)發(fā)光與抗原抗體相結(jié)合而形成的免疫分析技術(shù)，即為化學(xué)發(fā)光免疫分析。 化學(xué)發(fā)光的發(fā)光類型通常分為閃光型（flash type）和輝光型（glow type）兩種。閃光

3、型發(fā)光時(shí)間很短，只有零點(diǎn)幾秒到幾秒。輝光型又稱持續(xù)型，發(fā)光時(shí)間從幾分鐘到幾十分鐘，或幾小時(shí)至更久。閃光型的樣品必須立即測(cè)量，必須配以全自動(dòng)化的加樣及測(cè)量?jī)x。測(cè)量輝光型的樣品可以使用通用型儀器，也可以配全自動(dòng)化儀器。北京泰格科信的化學(xué)發(fā)光免疫分析診斷試劑發(fā)光類型為輝光型。第4頁(yè)，共23頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)0分，星期一化學(xué)發(fā)光免疫分析的優(yōu)勢(shì) 靈敏度高靈敏度高是化學(xué)發(fā)光免疫分析關(guān)鍵的優(yōu)越性，其靈敏度可達(dá) 10-22 mol/L （ RIA 為 10 -12 mol/L ）。化學(xué)發(fā)光免疫分析能夠檢出放射免疫分析和酶聯(lián)免疫分析等方法無(wú)法檢出的物質(zhì)，對(duì)疾病的早期診斷具有十分重要的意義。 第5

4、頁(yè)，共23頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)0分，星期一寬的線性動(dòng)力學(xué)范圍 發(fā)光強(qiáng)度在 4 6 個(gè)量級(jí)之間與測(cè)定物質(zhì)濃度間呈線性關(guān)系。這與顯色的酶免疫分析吸光度（ OD 值）為 2.0 的范圍相比，優(yōu)勢(shì)明顯。雖然 RIA 也有較寬的線性動(dòng)力學(xué)范圍，但放射性限制了其應(yīng)用。 光信號(hào)持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)輝光型的 CLIA 產(chǎn)生的光信號(hào)持續(xù)時(shí)間可達(dá)數(shù)小時(shí)甚至一天。簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作及測(cè)量。 第6頁(yè)，共23頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)0分，星期一分析方法簡(jiǎn)便快速絕大多數(shù)分析測(cè)定均為僅需加入一種試劑（或復(fù)合試劑）的一步模式。 結(jié)果穩(wěn)定、誤差小樣品系直接自己發(fā)光，不需要任何光源照射，免除了各種可能因素（光源穩(wěn)定性、

5、光散射、光波選擇器等）給分析帶來(lái)的影響，使分析結(jié)果靈敏穩(wěn)定可靠。 安全性好及使用期長(zhǎng)免除了使用放射性物質(zhì)。到目前為止，還未發(fā)現(xiàn)其危害性；試劑穩(wěn)定，保存期可達(dá)一年。 第7頁(yè)，共23頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)0分，星期一目前化學(xué)發(fā)光開(kāi)展的項(xiàng)目1、乙肝兩對(duì)半（表面抗原、表面抗體、E抗原、E抗體、核心抗體）6、肝纖維化檢測(cè)（HA,LN,PCIII,CIV,FN）2、腫瘤標(biāo)志物（AFP,CEA,PSA,FPSA,FER,CA199,CA125,CA153,B-2MG）7、不育不孕類（AOA,AEA,ASA,ATB.ACA.ZB,HCG）3、性激素系列（LH,FSH,TSH,E2,PRO,PRL,

6、TES,HCG,B-HCG）8、優(yōu)生優(yōu)育類（TOX,CMV,HSVI,HSVII,RUB）4、甲狀腺功能（T3,T4,FT3,FT4,TSH,TM,TG,TPO）9、其他類（ALB,一些藥物測(cè)試等）5、糖尿病系列（C肽，INS,INS-AB,GAD,PINS,ICA）10、不斷發(fā)展中的其他臨床檢測(cè)項(xiàng)目。第8頁(yè)，共23頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)0分，星期一為什么要開(kāi)展乙肝“兩對(duì)半”定量檢測(cè)乙型病毒性肝炎是世界性的傳染病，嚴(yán)重地威脅著人類的健康。我國(guó)是乙型病毒性肝炎高發(fā)病國(guó)家。據(jù)統(tǒng)計(jì)全世界無(wú)癥狀攜帶者（HBsAg攜帶者）超過(guò)2.8億，我國(guó)占1億以上，且多數(shù)無(wú)癥狀。所以乙肝的早期診斷對(duì)控制傳

7、染源、降低發(fā)病率及疾病的治療均具有很重要的意義。酶標(biāo)（ELISA）檢測(cè)始于20世紀(jì)80年代中期，它對(duì)乙肝“兩對(duì)半”定性測(cè)定在疾病的診斷，病情監(jiān)測(cè)，療效觀察起到了一定的作用，但酶標(biāo)檢測(cè)HbsAg靈敏度較低，不能真正意義上定量測(cè)定血清中HbsAg含量。隨著臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展，定性檢測(cè)已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足臨床及患者的要求。化學(xué)發(fā)光免疫分析定量測(cè)定乙肝“兩對(duì)半”大大彌補(bǔ)了酶標(biāo)定性測(cè)定及靈敏度低的不足。第9頁(yè)，共23頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)0分，星期一一、化學(xué)發(fā)光極大地提高了檢測(cè)靈敏度 HBsAg是HBV感染的特異標(biāo)志，HBsAg的出現(xiàn)就可作為乙肝的早期診斷，絕大多數(shù)HBV感染者外周血可出現(xiàn)HBsAg

8、?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)HBsAg靈敏度可達(dá)0.2ng/ml，而酶標(biāo)（EIASA）檢測(cè)的靈敏度為2ng/ml，放射免疫（RIA）靈敏度為1ng/ml，化學(xué)發(fā)光免疫分析極大地提高檢測(cè)的靈敏度。因此，在急性乙肝早期化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)能及早檢出HBsAg，縮短窗口期的時(shí)間，而酶標(biāo)檢測(cè)在乙肝早期往往HBsAg呈陰性；其次，可發(fā)現(xiàn)低濃度HBsAg攜帶者；在部分慢性乙肝患者中，由于機(jī)體缺乏對(duì)HBV包膜蛋白的免疫應(yīng)答，HBsAg表達(dá)較低，酶標(biāo)檢測(cè)可出現(xiàn)HBsAg和表面抗體（HBsAb）均陰性的情況，化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)的高靈敏度則可避免這些情況的發(fā)生，為正確判斷病情提供依據(jù)。并且目前病毒性肝炎和其他病因所致

9、的肝病甚多，而且臨床癥狀、體征及肝功能無(wú)特殊改變差異，故只有依靠高靈敏度的病原學(xué)鑒別診斷。第10頁(yè)，共23頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)0分，星期一1縮短急性乙肝HBsAg 測(cè)定“窗口期”2如病毒發(fā)生變異后，表達(dá)量較低，常規(guī)ELISA測(cè)不出抗原，而化學(xué)發(fā)光免疫分析定量具有極高的靈敏度，可發(fā)現(xiàn)并極有可能同時(shí)測(cè)定出HBsAg和HBsAb。3. 可發(fā)現(xiàn)低濃度HBsAg攜帶者。特別是一些群體如醫(yī)護(hù)工作者、病人家屬等，由于長(zhǎng)期密切接觸，但又非直接經(jīng)血傳播感染成急性乙肝，而是長(zhǎng)期少量感染，并刺激機(jī)體產(chǎn)生一定的免疫力，可能呈低濃度感染，特別應(yīng)當(dāng)引起人們的足夠重視，密切關(guān)注并采取措施防止發(fā)展成乙肝或慢性攜

10、帶者。第11頁(yè)，共23頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)0分，星期一二、兩對(duì)半定量可動(dòng)態(tài)觀察療效和病情監(jiān)測(cè) 疾病的發(fā)生、發(fā)展、療效、預(yù)后是一個(gè)動(dòng)態(tài)的變化過(guò)程， 化學(xué)發(fā)光免疫分析定量檢測(cè)乙肝“兩對(duì)半”各項(xiàng)標(biāo)志物的濃度變化可對(duì)乙肝的病程、治療、預(yù)后起動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)的作用，能夠讓醫(yī)生對(duì)病情療效作出合理的解釋提供依據(jù)，指導(dǎo)治療。1、定量檢測(cè)HBsAg，對(duì)肝炎病人動(dòng)態(tài)療效觀察很有價(jià)值。HBsAg和HBsAb濃度的變化，可以預(yù)見(jiàn)急性乙肝是否處于恢復(fù)期。如HBsAg濃度降低，HBsAb的濃度逐漸升高，可說(shuō)明病情正往恢復(fù)期發(fā)展。反之，HBsAg濃度處于較高水平或上升趨勢(shì)，而HBsAb一直處于較底水平，則容易發(fā)展為慢

11、性乙肝或攜帶者。2、定量測(cè)定HBeAg和HBeAb濃度的變化，可以反映病情變化和治療效果。明確測(cè)定HbeAg向抗-Hbe轉(zhuǎn)換的時(shí)期，即表現(xiàn)為HbeAg濃度下降和抗-Hbe濃度升高的過(guò)程。高濃度的HbeAg還可間接提示病毒處于高復(fù)制狀態(tài)，具有較高的傳染性。高濃度的抗-Hbe一方面提示病情的好轉(zhuǎn)，而在某些時(shí)候（如肝功能指標(biāo)很差）可能與肝壞死、肝硬化、肝癌有關(guān)。3、HBcAb濃度的高低可以反映病毒感染的狀態(tài)，高濃度的HBcAb提示乙肝急性感染；低濃度一般為恢復(fù)期或既往感染。有利于對(duì)慢性肝炎活動(dòng)性和非活動(dòng)性的判斷。慢性乙肝呈抗-Hbc持續(xù)高濃度，故可以用于慢性乙肝的分類。4. 有利于對(duì)慢性肝炎活動(dòng)性和

12、非活動(dòng)性的判斷。非活動(dòng)性慢性乙肝各項(xiàng)指標(biāo)相對(duì)穩(wěn)定，活動(dòng)性往往呈進(jìn)行性變化。第12頁(yè)，共23頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)0分，星期一三、HBsAb的定量測(cè)定能夠?qū)贵w是否真正具有“中和”HBV的免疫力作出正確評(píng)價(jià)，對(duì)乙肝的預(yù)防起到監(jiān)督作用。 HBsAb的含量在10mIU/mI以上病人在用ELISA測(cè)定就可呈HBsAb“陽(yáng)性”結(jié)果，但并不提示機(jī)體都一定具有免疫力，而HBsAb的含量在10100mIU/mI之間的樣本，定性雖為“陽(yáng)性”，但此時(shí)機(jī)體對(duì)HBV的免疫力較弱，甚至不能預(yù)防HBV感染，仍有感染HBV的危險(xiǎn)。只有HBsAb的含量達(dá)到100mIU/mI以上時(shí)才可確定具有抵抗HBV入侵的作用。

13、HBsAb的含量越高，機(jī)體抵抗HBV入侵的能力越強(qiáng)，持續(xù)保護(hù)時(shí)間越長(zhǎng)。作定量測(cè)定，根據(jù)HBsAb的含量可判斷機(jī)體對(duì)HBV的免疫狀態(tài)及乙肝疫苗的免疫效果，HBsAb的含量較低，應(yīng)該加強(qiáng)注射一針乙肝疫苗，使HBsAb的濃度提高起到保護(hù)作用。同時(shí)，乙肝疫苗接種后機(jī)體產(chǎn)生免疫力因個(gè)體差異而不同，有的可產(chǎn)生高濃度的抗體并持續(xù)數(shù)十年。而有的人產(chǎn)生的抗體濃度不是很高，且持續(xù)時(shí)間也不長(zhǎng)，數(shù)年后就逐漸消失，這部分人應(yīng)及時(shí)關(guān)注HBsAb濃度變化，必要時(shí)也應(yīng)加強(qiáng)注射一針乙肝疫苗（但也有人認(rèn)為機(jī)體在受到病毒感染時(shí)，會(huì)產(chǎn)生記憶反應(yīng)，迅速提高免疫力）。因此定量測(cè)定對(duì)乙肝疫苗免疫力的評(píng)價(jià)和高危人群預(yù)防免疫具有重要意義，特別

14、是在少年兒童預(yù)防乙肝方面。第13頁(yè)，共23頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)0分，星期一四、降低科室成本 大家都知道進(jìn)口試劑因試劑價(jià)格昂貴,并且標(biāo)準(zhǔn)品等要單買(mǎi)，從而使乙肝“兩對(duì)半”定量難以普及。乙肝“兩對(duì)半”進(jìn)口化學(xué)發(fā)光試劑價(jià)格較高，國(guó)產(chǎn)化學(xué)發(fā)光試劑價(jià)格比進(jìn)口試劑的低的多。國(guó)家已實(shí)行了同一種方法學(xué)統(tǒng)一收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)，不分國(guó)產(chǎn)或進(jìn)口試劑，上海、浙江等城市已執(zhí)行國(guó)產(chǎn)、進(jìn)口化學(xué)發(fā)光試劑檢測(cè)項(xiàng)目同一個(gè)收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。用質(zhì)量、性能與進(jìn)口乙肝“兩對(duì)半”試劑相當(dāng)?shù)膰?guó)產(chǎn)試劑，可以降低科室成本。第14頁(yè)，共23頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)0分，星期一化學(xué)發(fā)光與常用免疫分析方法對(duì)比方法優(yōu) 點(diǎn)缺 點(diǎn)化學(xué)發(fā)光操作簡(jiǎn)單，成本

15、較低，靈敏度較高，試劑較穩(wěn)定進(jìn)口試劑成本較高，國(guó)產(chǎn)試劑合理放射免疫試劑成本低，靈敏度較高操作復(fù)雜，放射性污染，有效期短酶聯(lián)免疫試劑成本低，操作簡(jiǎn)單靈敏度低，適用于定性和半定量時(shí)間分辨靈敏度較高，試劑較穩(wěn)定操作復(fù)雜，反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，試劑成本較高電化學(xué)發(fā)光靈敏度較高，試劑較穩(wěn)定試劑成本高，儀器維護(hù)費(fèi)用較高，有本底干擾第15頁(yè)，共23頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)0分，星期一化學(xué)發(fā)光免疫分析法作為非放射性的免疫分析法，具有靈敏度高、所需時(shí)間短、無(wú)污染、檢測(cè)范圍寬等特點(diǎn)，隨著各種自動(dòng)發(fā)光分析儀器面市，以及不同類型的化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒的不斷推出，使得檢測(cè)項(xiàng)目更多，檢測(cè)速度提高，這些勢(shì)必推動(dòng)化學(xué)發(fā)光免

16、疫分析的迅速發(fā)展，成為時(shí)間分辨、放射免疫和酶聯(lián)免疫分析的取代者，已成為檢驗(yàn)的主流,使實(shí)驗(yàn)室更好、更快地為臨床服務(wù)。第16頁(yè)，共23頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)0分，星期一顯著的經(jīng)濟(jì)效益對(duì)醫(yī)院：增加了設(shè)備、患者多了一種選擇，增加了盈利的渠道對(duì)科室：改進(jìn)了方法，科室收益上升，科室地位得到提高對(duì)醫(yī)生：擺脫了患者投訴的煩惱，增加了臨床病情的判斷能力。第17頁(yè)，共23頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)0分，星期一化學(xué)發(fā)光和酶法對(duì)比項(xiàng)目名稱收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)(元)每月標(biāo)本量每年毛收入(萬(wàn)元)每年成本(萬(wàn)元)年凈收入/萬(wàn)元(保守估計(jì))乙肝兩對(duì)半18015*22天71.28 23.76每人份60元 47.52化學(xué)

17、發(fā)光免疫僅乙肝五項(xiàng)年凈收入總計(jì)47.52萬(wàn)元 乙肝兩對(duì)半25 15*22天9.901.19每人份3元8.71酶法試劑乙肝五項(xiàng)年凈收入總計(jì) 8.71萬(wàn)元 其余化學(xué)發(fā)光項(xiàng)目：腫瘤5項(xiàng)，激素8項(xiàng)，糖尿病5項(xiàng)，肝纖維化5項(xiàng)等，都可以創(chuàng)造較大的效益。 第18頁(yè)，共23頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)0分，星期一目前化學(xué)發(fā)光檢測(cè)產(chǎn)品介紹分類兩大類一、原裝進(jìn)口主要以貝克曼、羅氏、雅培、日本東曹等等為主特點(diǎn)：1、儀器試劑為全部封閉配套試劑，自動(dòng)化程度較高2、檢測(cè)成本較高3、對(duì)每天的標(biāo)本量有一定要求，主要面向中大型醫(yī)院二、國(guó)產(chǎn)產(chǎn)品主要以北京泰格科信、北京科美、廈門(mén)波生、鄭州安圖等為主特點(diǎn)：1、儀器試劑一般為配

18、套，但是在廠家授權(quán)下半開(kāi)放2、檢測(cè)成本較低3、面向中小型醫(yī)院4、缺點(diǎn)為自動(dòng)化程度不高。第19頁(yè)，共23頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)0分，星期一北京泰格科信化學(xué)發(fā)光介紹1、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀一臺(tái)2、全自動(dòng)洗板機(jī)一套3、電腦打印機(jī)一套第20頁(yè)，共23頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)0分，星期一第21頁(yè)，共23頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)0分，星期一北京泰格科信化學(xué)發(fā)光特點(diǎn)綜述方法學(xué) 化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定是目前世界公認(rèn)先進(jìn)的標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)，半自動(dòng)化學(xué)發(fā)光原理是采用辣根過(guò)氧化物酶（hrp）標(biāo)記（抗原或抗體）化學(xué)發(fā)光底物是魯米諾，辣根過(guò)氧化物酶作用于底物發(fā)光，通過(guò)化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定各孔的發(fā)光強(qiáng)度，發(fā)光強(qiáng)度與樣本濃度存在線性關(guān)系。化學(xué)發(fā)光受自然光干擾遠(yuǎn)小于熒光，因而在方法學(xué)上化學(xué)發(fā)光要好于熒光。 檢測(cè)項(xiàng)目 肝炎類、性激素類、甲狀腺功能類、肝纖維化類、腎功能類、腫瘤標(biāo)志物類、糖尿病類、優(yōu)生優(yōu)育類、不孕不育類。 操作步驟（以乙肝為例） 1.試劑盒平衡至室溫。2.工作洗滌液：將10ml濃縮洗滌液和240ml蒸餾水或去離子水在干凈的瓶中混合均勻備用。3按順序加入：加樣量（l）孔 別校準(zhǔn)品孔待測(cè)樣本孔 S1S550-待測(cè)樣本-50酶結(jié)合物50 50 加貼封板膜，輕振混勻，37溫育0.5小時(shí)4.小心將封板膜揭下，用洗板機(jī)洗滌5次，每