依諾沙星片血藥濃度的測(cè)定及在健康志愿者體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究

1、依諾沙星片血藥濃度的測(cè)定及在安康志愿者體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究【摘要】目的:建立人血漿中依諾沙星濃度的高效液相色譜HPL方法，研究口服單劑量依諾沙星片后安康志愿者體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)過(guò)程。方法:安康志愿者20名，單劑量口服依諾沙星片0.4g，分別于服藥后24h內(nèi)多點(diǎn)抽取靜脈血。以HPL法測(cè)定血漿中依諾沙星的濃度。以DAS藥代動(dòng)力學(xué)程序計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，分析體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程。結(jié)果:依諾沙星片在(0.056.0)gL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9999)，相對(duì)回收率均在85%115%范圍內(nèi)，絕對(duì)回收率大于75%；日內(nèi)和日間變異均小于15%。依諾沙星濃度主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為：Tax為(1.3500.580

2、)h；ax為(3.0290.671)gL-1；T1/2為(5.8350.908)h；AU(0-24)、AU(0-inf)分別為(17.6782.899)ghL-1和18.6853.172ghL-1。結(jié)論:本方法靈敏度高，選擇性好，重現(xiàn)性佳，可準(zhǔn)確測(cè)定人血漿中依諾沙星的濃度，合適藥動(dòng)學(xué)研究，為臨床用藥提供指導(dǎo)根據(jù)?！娟P(guān)鍵詞】依諾沙星高效液相色譜法藥代動(dòng)力學(xué)依諾沙星Enxain，化學(xué)名為1-乙基-6-氟-1，4-二氫-4-氧代-7-1-哌嗪基-1，8-萘啶-3-羧酸倍半水合物，為三氟喹諾酮類抗菌藥，能通過(guò)抑制細(xì)菌的DNA盤旋酶、拓?fù)洚悩?gòu)酶IV，抑制DNA的合成和復(fù)制而導(dǎo)致細(xì)菌死亡。其具有廣譜抗菌作

3、用，對(duì)大多數(shù)革蘭陽(yáng)性菌和革蘭陰性菌具有良好的抗菌活性，對(duì)沙眼衣原體、支原體、軍團(tuán)菌具良好的抗微生物作用，對(duì)結(jié)核桿菌和非典型分枝桿菌也有抗菌活性1。本實(shí)驗(yàn)旨在建立簡(jiǎn)單快捷的檢測(cè)方法，研究依諾沙星片在中國(guó)安康志愿者體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)，為臨床用藥提供參考根據(jù)。1材料和方法1.1藥品、試劑和儀器依諾沙星片規(guī)格：0.1g/片、氟羅沙星由湖北百科亨迪藥業(yè)提供。依諾沙星對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。甲醇和乙腈為色譜純，由天津市科密歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心提供。三氟乙酸為Siga公司產(chǎn)品064K3647。70%高氯酸、冰乙酸為分析純，由天津市化學(xué)試劑三廠消費(fèi)。實(shí)驗(yàn)用水為本實(shí)驗(yàn)室自制重蒸水。1.2受試者選擇根據(jù)藥

4、物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原那么2，選取20名安康男性志愿者，年齡2124歲，體重5577kg。受試者無(wú)煙酒嗜好，無(wú)神經(jīng)系統(tǒng)、精神異常及代謝異常等病史，血尿常規(guī)、肝腎功能及心電圖等檢查均正常。受試前2周至整個(gè)試驗(yàn)期間禁煙、酒和禁服其他任何藥物。試驗(yàn)方案經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，受試者均簽署知情同意書。1.3給藥方法和樣品采集20名受試者禁食12h后，于次日清晨空腹口服單劑量依諾沙星片0.4g，200l溫開(kāi)水送服，服藥2h前方可飲水，4h后進(jìn)統(tǒng)一餐。服藥前取空白血，服藥后分別于0.333、0.667、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、24h取靜脈血3.0l，注入肝素化的試管，

5、離心3000rin-110in，取血漿，-65冰凍保存?zhèn)錅y(cè)。1.4血漿樣品處理及血藥濃度測(cè)定1.5血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備和定量下限1.6方法學(xué)考察1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法用DASDrugAndStatistis，versin2.0程序處理，非房室模型計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。ax和Tax均為實(shí)測(cè)值；AU為DAS計(jì)算所得。2結(jié)果2.1方法學(xué)依諾沙星的色譜行為見(jiàn)圖1。顯示其保存時(shí)間為2.9in，內(nèi)標(biāo)氟羅沙星的保存時(shí)間為3.5in。兩峰別離完全。準(zhǔn)確度、回收率、穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表14。依諾沙星血漿樣品的日內(nèi)日間精細(xì)度標(biāo)準(zhǔn)偏向均在10%以內(nèi)，相對(duì)回收率標(biāo)準(zhǔn)偏向在5%以內(nèi)，絕對(duì)回收率在75%以上。在室溫放置12h以內(nèi)測(cè)定

6、，結(jié)果沒(méi)有明顯變化；-65冰箱冰凍條件下冷藏1個(gè)月內(nèi)測(cè)定，結(jié)果同樣無(wú)明顯變化。以上說(shuō)明血漿樣品具有較好的精細(xì)度和準(zhǔn)確性，在室溫放置和冰凍保存條件下表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性。3討論伊諾沙星血藥濃度的HPL檢測(cè)法，文獻(xiàn)3-5報(bào)道多以檸檬酸-甲醇-乙腈作流動(dòng)相為主。本研究曾參照該條件進(jìn)展分析，但未獲得良好的別離效果。由于伊諾沙星分子構(gòu)造中的胺基和羧基能在水溶液中解離，故考慮單獨(dú)以乙腈-水或甲醇-水為流動(dòng)相，會(huì)出現(xiàn)色譜峰拖尾、對(duì)稱性差、別離度低和保存值不穩(wěn)定等問(wèn)題，而采用離子抑制或離子對(duì)色譜能克制這些缺點(diǎn)6。三氟乙酸是離子對(duì)試劑常見(jiàn)的手段。流動(dòng)相中的三氟乙酸通過(guò)與疏水鍵合相和殘留的極性外表以多種形式互相作用

7、，來(lái)改善峰形、克制峰展寬和拖尾問(wèn)題。此外，三氟乙酸的紫外最大吸收峰低于200n，檢測(cè)干擾校其添加在流動(dòng)相中的濃度一般為0.1%，在該濃度下，大部分反相色譜柱都可以產(chǎn)生良好的峰形，故本研究以乙腈-0.1%三氟乙酸-水20：20：60，V/V/V為流動(dòng)相，并獲得了良好的別離效果。如圖1所示，可見(jiàn)出峰對(duì)稱，無(wú)雜質(zhì)干擾，專屬性高。且分析時(shí)間僅為4in，合適臨床血藥濃度的分析監(jiān)測(cè)，有利于個(gè)體化用藥的開(kāi)展。依諾沙星在整個(gè)紫外區(qū)均有吸收，210n、270n和342n處有吸收峰，由于270n為最大吸收，故文獻(xiàn)3-7報(bào)道多以270n左右作為檢測(cè)波長(zhǎng)，但本研究考慮到342n處血漿內(nèi)源性物質(zhì)少，為防止干擾，采用342n作檢測(cè)波長(zhǎng)，得到干凈利落的檢測(cè)峰形。對(duì)血漿樣品的處理我們采用35%高氯酸蛋白沉淀法，較萃取法4，5操作簡(jiǎn)便，本錢低廉，且專屬性高，別離完全，有較高的回收率和精細(xì)度，適用于依諾沙星人體藥代動(dòng)力學(xué)和血藥濃度分析。本研究所得血藥濃度數(shù)據(jù)及主要藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)與文獻(xiàn)報(bào)道4，5根本一致。其達(dá)峰時(shí)間較短，Tax為1.3500.580h，T1/2為5.8350.908h，AU(0-24)、AU(0-inf)分別為17.6782.899ghL-1和18.6853.172