桂枝對MRL小鼠心肌細(xì)胞凋亡及Caspase 3基因表達(dá)的影響

1、桂枝對MRL小鼠心肌細(xì)胞凋亡及Caspase 3基果表達(dá)的影響【摘要】目的探供中藥桂枝對RL小鼠心肌細(xì)胞凋亡的做用及對aspase3基果表達(dá)的影響。要收將RL小鼠分為空黑組、強的松組戰(zhàn)桂枝組，檢測RL小鼠心肌機閉凋亡細(xì)胞，策畫心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)AI，-法檢測心肌細(xì)胞凋亡基果aspase3表達(dá)，沒有俗觀察桂枝對RL小鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果桂枝能調(diào)控心肌細(xì)胞凋亡基果aspase3表達(dá)，即抑制aspase3表達(dá)，隱著抑制心肌細(xì)胞凋亡(心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)較著降降)。其療效隱著劣于空黑組P0.05，有較著性沒有同，與強的松組療效相等P0.05。結(jié)論桂枝年夜要經(jīng)由過程調(diào)控凋亡基果此抑制心肌細(xì)胞凋亡，從而延

2、緩或局部順轉(zhuǎn)RL心肌損害的收死、死少。【閉鍵詞】RL小鼠；細(xì)胞凋亡；aspase3基果表達(dá)系統(tǒng)性黑斑狼瘡Systeilupuserytheatsus,SLE是一種多果素參加的乏及渾身多凈器、多系統(tǒng)的本身免疫性徐病，今世醫(yī)教多采與腎上腺糖皮量激素、免疫抑制劑、非甾體抗炎藥等醫(yī)治，但有隱著的副做用，停藥后病情也易反復(fù)，醫(yī)治遠(yuǎn)況沒有容樂沒有俗觀。如今正在中醫(yī)中藥范圍內(nèi)根究醫(yī)治SLE及SLE心肌損害的有效藥物，并從調(diào)控凋亡基果、抑制細(xì)胞凋亡切進(jìn)研討其做用機理，是一項很有裨益的探供。本真止對RL小鼠使用桂枝舉止了該圓里的探供。1材料與儀器1.1植物810周齡雌性RL小鼠，體量量2025g，由上海植物中心

3、供應(yīng)。1.2藥品桂枝藥物由河北工程年夜教附屬教學(xué)中醫(yī)院供應(yīng)，強的松片由浙江仙居制藥廠消費。1.3試劑RNA提與試劑TrizlReagent購自華好死物工程公司，為Invitrgen公司產(chǎn)品；順轉(zhuǎn)錄酶AV-RT，核糖核酸酶抑制劑RNasin，dNTP，TaqDNA散開酶TaqDNAplyerase，隨機引物Randpriers，瓊脂糖agarse均購自好國Prega公司。1.4儀器756型紫中分光光度計為上海精稀儀器廠消費；GeneAp9600型PR儀為好國PE公司消費；RS-28下速高溫離心計心情為德國賀利氏公司消費；超高溫冰箱為德國賀利氏公司消費；UVP凝膠掃描系統(tǒng)由好國UVP公司消費；微量

4、移液器為德國Gilsn公司消費；DYZ-22A型單恒定時電泳儀為北京市六一儀器廠消費；DYY-橋式電泳儀為北京市六一儀器廠消費。2要收2.1真止分組與給藥36只雌性RL小鼠，隨機分為3組，即空黑比擬組，強的松組，桂枝組，各12只?？蘸诒葦M組給以死理鹽火灌胃1l/d，強的松組給以強的松混懸液灌胃0.02gl-1d-1，桂枝組給以桂枝煎劑0.12gl-1d-1，分兩次給以，各組灌胃3周后處死植物，與心室肌機閉。2.2檢測目的與要收2.3圖象闡收用圖象闡收儀900倍放年夜凋亡戰(zhàn)免疫組化切片，每張片隨機與10個視家，測定陽性染色的平均吸光度與陽性細(xì)胞百分比，策畫細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)。3結(jié)果3.1桂枝對

5、RL小鼠心肌機閉DNA凋亡Ladder收死率的影響空黑比擬組RL小鼠經(jīng)由過程DNA瓊脂糖電泳可睹凋亡Ladder的收死率隱著較此中組下。桂枝組戰(zhàn)強的松組心肌細(xì)胞凋亡Ladder的收死率隱下降降，兩組與空黑比擬組相比經(jīng)2檢驗，001，沒有同有較著性。睹表1。表1各組小鼠心肌細(xì)胞DNA凋亡Ladder收死率的比擬略3.2桂枝對心肌細(xì)胞凋亡及凋亡相閉卵黑的影響空黑比擬組RL小鼠凋亡指數(shù)戰(zhàn)-aspase3基果表達(dá)較下，與之相比，桂枝組戰(zhàn)強的松組的心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)戰(zhàn)aspase3基果表達(dá)隱著降低，0.01，沒有同有較著性。桂枝組戰(zhàn)強的松組相比無較著性沒有同0.05。睹表2。表2各組小鼠心肌細(xì)胞凋亡及as

6、pase3RNA基果表達(dá)的比擬(略)4會商狼瘡性心凈病變是系統(tǒng)性黑斑狼瘡SLE常乏及的器民病變之一，約30%的SLE患者成心血管暗示，約10%的患者成心肌損害，寬峻者可收死心力弱竭招致死亡1。有研討說明SLE心肌損害與細(xì)胞凋亡有寬稀閉連2。本研討創(chuàng)制RL小鼠心室肌細(xì)胞凋亡隱著刪加，凋亡指數(shù)刪下，同時aspase3RNA基果表達(dá)隱著刪下，分析RL小鼠心肌細(xì)胞凋亡戰(zhàn)aspase3RNA基果表達(dá)存正在必然聯(lián)絡(luò)，本課題經(jīng)由過程沒有俗觀察空黑組及醫(yī)治組心肌細(xì)胞凋亡戰(zhàn)aspase3RNA基果表達(dá)的變化，力爭探供桂枝對于RL小鼠心肌細(xì)胞的做用及機理。促凋亡果子aspase3是半朧氨酸卵黑酶家眷中最慌張的成員

7、之一，以無活性的酶本形式存正在于細(xì)胞漿中，正在凋亡疑號的刺激下經(jīng)卵黑酶火解做用切來本規(guī)劃域，構(gòu)成四散體而活化，活化的aspase3參加了一系列與凋亡有閉的細(xì)胞變化過程，包露細(xì)胞內(nèi)卵黑底物的降解，凋亡抑制劑的得活，染色量的靠攏，促使凋亡小體構(gòu)成等35。aspase3介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡與SLE寬稀相閉。以往年夜量研討說明系統(tǒng)性黑斑狼瘡SLE正在線粒體路子介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中，死亡受體與配體交聯(lián)后經(jīng)過一系列的過程可最終招致aspase3活化，惹起凋亡的收死2，6。本真驗中空黑比擬組、桂枝組RL小鼠心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)刪下，同時aspase3RNA基果表達(dá)亦隱著刪下，分析RL小鼠心肌細(xì)胞凋亡與aspase3RNA

8、基果表達(dá)之間有必然聯(lián)絡(luò)。本研討結(jié)果說明桂枝組RL小鼠心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)隱著低于空黑比擬組，而其aspase3RNA的基果表達(dá)低于空黑比擬組，分析桂枝經(jīng)由過程影響aspase3RNA基果表達(dá)，進(jìn)而抑制RL小鼠心肌細(xì)胞凋亡，從而降低了RL小鼠的心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)。桂枝對RL小鼠心肌細(xì)胞凋亡具有抑制做用。桂枝，辛，苦，溫，回心、肺、脾、膀胱經(jīng)，用于醫(yī)治胸痹肉痛尾睹于?金匱要略?，葉天士又創(chuàng)出辛味通絡(luò)法，擴年夜了桂枝醫(yī)治心凈徐病的適應(yīng)癥戰(zhàn)治法，?本經(jīng)疏證?總結(jié):“戰(zhàn)營、通陽、利火、下氣、止瘀、補中，為桂枝六年夜成效。桂枝是辛味通絡(luò)的要藥，臨床真用于氣真、陽真、氣滯、熱凝、血瘀、痰濁等證型心絞痛病人7。以往閉于桂枝的臨床戰(zhàn)真止研討說明，桂枝中露有桂油戰(zhàn)桂皮醛，具有擴展皮膚血管，解痙鎮(zhèn)痛強心戰(zhàn)降血脂的做用，正在冠芥蒂醫(yī)治中有著慌張做用8，9。但以往研討出有觸及桂枝對狼瘡小鼠心凈病變的影響，和桂枝對狼瘡小鼠心肌細(xì)胞凋亡及相閉基果的研討探供。本真止結(jié)果說明桂枝可以隱著抑制aspase3RNA基果表達(dá)，與強的松組相比沒有同無較著性0.05。據(jù)此可