實驗十六維生素C的定量測定(2,6二氯酚靛酚滴定法)

1、 維生素的定量測定（二氯酚靛酚滴定法）一、目的要求：（）學習并掌握用二氯酚靛酚滴定法測定植物材料中維生素含量的原理和方法。（）了解蔬菜、水果中維生素含量情況。（）熟悉微量滴定法的基本操作過程。二、實驗原理：維生素是人類營養(yǎng)中最重要的維生素之一，它與體內(nèi)其它還原劑共同維持細胞正常的氧化還原電勢和有關酶系統(tǒng)的活性。維生素能促進細胞間質(zhì)的合成，如果人體缺乏維生素時則會出現(xiàn)壞血病，因而維生素又稱為抗壞血酸。水果和蔬菜是人體抗壞血酸的主壞來源。不同栽培條件、不同成熟度和不同的加工貯藏方法，都可以影響水果、蔬菜的抗壞血酸含量。測定抗壞血酸含量是了解果蔬品質(zhì)高低及其加工工藝成效的重要指標。維生素具有很強的還

2、原性。它可分為還原性和脫氫型。金屬銅和酶（抗壞血酸氧化酶）可以催化維生素氧化為脫氫型。二氯酚靛酚（DCPIP）是一種染料，在堿性溶H0CHOCH!:：CHqOH抗壞血酸運&二氯酣靛酚遙紅色芳液中呈藍色，在酸性溶液中呈紅色。抗壞血酸具有強還原性能使2,二二氯氯酚靛酚還原褪色，其反應如圖：當用2,二二氯氯酚靛酚滴定含有抗壞血酸的酸性溶液時，滴下的2,二二氯氯酚靛酚被還原成無色；當溶液中的抗壞血酸全部被氧化成脫氫抗壞血酸時，滴入的2,二二氯氯酚靛酚立I、實一材材還原型2-二氯酚靛酚無色即使溶液呈現(xiàn)紅色。因此用這種染料滴定抗壞血酸至溶液呈淡紅色即為滴定終點，根據(jù)染料消耗量即可計算出樣品中還原型抗壞血酸

3、的含量。:實驗材H 2臺主壞血器 ()漏斗8)脫脂紗布()濾紙()容量瓶()()刻度吸管(，()錐形瓶()6)微量滴定管(3，)3試劑：()%()標準抗壞血酸溶液精確稱量抗壞血酸(應為潔白色，如變?yōu)辄S色則不能用)，溶于%中，移入容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，貯于棕色瓶中，冷藏，最好臨用前配制，此溶液每中含抗壞血酸，()二氯酚靛酚準確稱氧化型一二氯酚靛酚、碳酸氫鈉溶于熱蒸餾水中，稀釋至，充分振搖，裝入棕色瓶內(nèi)，置冰箱內(nèi)過夜，臨用前過濾，用標準標定其濃度。置冰箱內(nèi)冷藏(C)保存不得超過天(最長約可保存一周)。準四、操作方法：準一、標準液滴定取標準抗壞血酸，用一二氯酚靛酚溶液滴定，以生成為微紅持續(xù)秒

4、不退為終點，另取%作空白對照，滴定。計算一二氯酚靛酚溶液的濃度，以每二氯酚靛酚溶液相當于抗壞血酸的數(shù)來表示。二、提取1水洗干凈整株新鮮蔬菜或整個新鮮水果，用紗布或吸水紙吸干表面水分。每一樣品稱取或0放入研缽中，加入%一起研磨成勻漿，提取液通過層紗布過濾到容量瓶中，然后用%沖洗研缽及紗布一次,最后用%稀釋至刻度線。2如果提取液含有色素，則倒入錐形瓶內(nèi)加入1匙白陶土(高嶺土)，充分振蕩5分鐘，濾紙過濾，白陶土吸附生物樣品中的色素，有利于終點的觀察。準3取三角錐形瓶兩個，各加脫色的提取液或，用一二氯酚靛酚溶液滴定,直至出現(xiàn)微紅色秒不退色為終點。記錄兩次滴定的數(shù)，取平均值。滴定必須迅速不要超過分鐘，因

5、為在實驗條件下，一些非的還原物質(zhì)其還原作用較遲緩，快速滴定可以避免或減少它們的影響。.另取或%作空白對照，滴定。5按下式計算每樣品中所含的的毫克數(shù)。()XX維生素含量(樣品)=XX式中：滴定樣品提取液消耗染料平均值()滴定空白消耗燃料的平均值()樣品提取液定容體積()每染料所能氧化抗壞血酸的數(shù)滴定時吸取樣品提取液體積（或）被檢測樣品的重量（或）【備注】（1）某些水果、蔬菜（如橘子、西紅柿等）漿狀物定容時泡沫太多，可加數(shù)滴丁醇或辛醇消泡。（2）樣品的提取液制備和滴定過程，要避免陽光照射和與銅、鐵器具接觸，以免抗壞血酸被破壞。整個操作過程要迅速，防止還原型抗壞血酸被氧化。滴定過程一般不超過i滴定所

6、用的染料不應小于或多于，如果樣品含維生素太高或太低時，可酌情增減樣液用量或改變提取液稀釋度。本實驗必須在酸性條件下進行。在此條件下，干擾物反應進行得很慢。鹽酸有抑制抗壞血酸氧化酶的作用干擾滴定因素有：若提取液中色素很多時，滴定不易看出顏色變化，可用白陶土脫色，或加氯仿，到達終點時，氯仿層呈現(xiàn)淡紅色。+可還原二氯酚靛酚。對含有大量+的樣品可用乙酸溶液代替草酸溶液提取，此時+不會很快與染料起作用。樣品中可能有其它雜質(zhì)還原二氯酚靛酚，但反應速度均較抗壞血酸慢，因而滴定開始時，染料要迅速加入，而后盡可能一點一點地加入，并要不斷地搖動三角瓶直至呈粉紅色，于內(nèi)不消退為終點。提取的漿狀物如不易過濾，亦可離心

7、，留取上清液進行滴定。（）市售二氯酚靛酚質(zhì)量不一，以標定抗壞血酸消耗左右的染料為宜，可根據(jù)標定結(jié)果調(diào)整染料溶液濃度。五、思考題1該法測定抗壞血酸有何不足？2用2%鹽酸提取樣品的目的是什么？參考答案1用本法測定抗壞血酸含量雖簡便易行，可以一次測定大量的樣品。但有下述缺點：第一，在生物組織內(nèi)和組織提取物內(nèi)，抗壞血酸還能以脫氫抗壞血酸及結(jié)合抗壞血酸的形式存在，本法只能測定還原型抗壞血酸，不能測出具有同樣生理功能的氧化型抗壞血酸和結(jié)合型抗壞血酸。第二，樣品中的色素經(jīng)常干擾對終點的判斷，可預先用白陶土脫色，或加入二氯乙烷，以二氯乙烷層變紅為終點。第三,生物組織提取物和生物體液中常有其他還原性的物質(zhì)，其中有些也可以在同樣條件下使2,二二氯酚靛酚還原脫色。2用2鹽酸制備樣品提取液，可有效地抑制抗壞血