上海交通大學(xué)微生物實驗課件實驗四培養(yǎng)基的使用特點和微生物接種方法

1、實驗?zāi)康呐c要求 強調(diào)無菌操作概念，掌握無菌操作技術(shù)掌握微生物移植、純化的基本方法了解不同微生物在同一培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特征，及同一微生物在不同培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特征掌握幾種常用的鑒別、選擇培養(yǎng)基的使用了解顯微測微尺的構(gòu)造；掌握應(yīng)用顯微測微尺測量微生物細胞大小的方法與技術(shù) 第一頁，共二十四頁。微生物培養(yǎng)Culture：在一定的條件下培養(yǎng)、繁殖得到的微生物群體混合培養(yǎng)物：含有多種微生物的培養(yǎng)物；純培養(yǎng)物： 只有一種微生物的培養(yǎng)物；Pure culture通常情況下只有純培養(yǎng)物才能提供可以重復(fù)的結(jié)果純培養(yǎng)技術(shù)是進行微生物學(xué)研究的基礎(chǔ)！第二頁，共二十四頁。一、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基；固體培養(yǎng)

2、基； 1.5%-2.5%半固體培養(yǎng)基； 0.2%-0.75%瓊脂第三頁，共二十四頁。一、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)菌落（colony）： 單個（或聚集在一起的一團）微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長、繁殖到一定程度可以形成肉眼可見的、 有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞生長群體眾多菌落連成一片菌苔（lawn）第四頁，共二十四頁。無菌操作：火焰附近（酒精燈、煤氣燈）進行第五頁，共二十四頁。 不同微生物在特定培養(yǎng)基上生長形成的菌落或菌苔一般都具有穩(wěn)定的特征（形狀、顏色等），可以成為對該微生物進行分類、鑒定的重要依據(jù)第六頁，共二十四頁。菌落的描述：形態(tài)、表面和邊緣特征第七頁，共二十四頁。第八頁，共二十四頁。同一

3、細菌在不同的培養(yǎng)平板上形成不同的特征菌落第九頁，共二十四頁。一、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)使微生物在固體培養(yǎng)基平板上形成單個菌落的基本方法：1、稀釋倒平板法2、涂布平板法3、平板劃線法4、厭氧微生物的分離第十頁，共二十四頁。第十一頁，共二十四頁。一、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)1、稀釋倒平板法2、涂布平板法操作較麻煩，對好氧菌、熱敏感菌效果不好！使用較多的常規(guī)方法，但有時涂布不均勻！第十二頁，共二十四頁。利用L棒進行涂布第十三頁，共二十四頁。3、平板劃線法第十四頁，共二十四頁。3、平板劃線法第十五頁，共二十四頁。二、選擇培養(yǎng)分離 抑制大多數(shù)其它微生物的生長； 使待分離的微生物生長更快；對微生物群落中數(shù)量

4、占少數(shù)的微生物的分離純化沒有一種培養(yǎng)基或一種培養(yǎng)條件能夠滿足自然界中一切生物 生長的要求，在一定程度上所有的培養(yǎng)基都是選擇性的。第十六頁，共二十四頁。三、選擇培養(yǎng)分離1. 利用選擇平板進行直接分離待分離的微生物生長，其它微生物的生長被抑制 高溫下培養(yǎng)：分離嗜熱細菌； 培養(yǎng)基中不含N：分離固氮菌； 培養(yǎng)基加抗生素：分離抗性菌；第十七頁，共二十四頁。1. 利用選擇平板進行直接分離 顏色反應(yīng)：分離特定的菌株； 牛奶平板：分離蛋白酶產(chǎn)生菌；待分離的微生物的生長特征明顯不同于其它微生物第十八頁，共二十四頁。常用的選擇培養(yǎng)基沙門菌常用的培養(yǎng)基：亞硫酸鉍瓊脂平板(BS):含有煌綠、檸檬酸鉍銨、亞硫酸鈉、硫酸

5、亞鐵，具有強選擇性，分離沙門氏菌HE（Heetoen)：檸檬酸鐵銨、去氧膽酸鹽、硫代硫酸鈉、麝香草酚藍和復(fù)紅，分離腸道致病菌第十九頁，共二十四頁。麥康凱培養(yǎng)基乳糖、膽鹽，弱選擇性，中性紅,分離腸道致病菌中性紅指示劑pH感應(yīng)范圍6.8（紅色）到8.0（黃色）分解乳糖產(chǎn)酸，菌落顏色呈紅色沙門氏菌、志賀氏菌不分解乳糖，菌落顏色與培養(yǎng)基相同膽鹽有助于沙門氏菌的生長，抑制其他細菌大腸桿菌？沙門氏菌？常用的選擇培養(yǎng)基第二十頁，共二十四頁?？耸想p糖鐵 蛋白胨； 牛肉膏 ； 酵母膏 ；乳糖 ； 葡萄糖； 氯化鈉 ； 檸檬酸鐵銨 ；硫代硫酸鈉 ； 瓊脂 ；酚紅為指示劑，黃色為產(chǎn)酸，紅色為產(chǎn)堿觀察克氏雙糖接種后斜

6、面、底層產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、產(chǎn)H2S的情況，大腸桿菌斜面？沙門氏菌斜面？第二十一頁，共二十四頁。接種劃線菌種：大腸桿菌、沙門菌、青霉采用無菌操作進行移植學(xué)會分區(qū)劃線所有平皿和試管必須有標記1824小時（真菌下周觀察）觀察試驗結(jié)果，描述固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)的細菌培養(yǎng)特征第二十二頁，共二十四頁。步驟兩個人為一組，一個接種大腸桿菌，一個接種沙門菌LB液體移植普通瓊脂：分區(qū)劃線麥康凱：分區(qū)劃線LB半固體培養(yǎng)基：穿刺接種克氏雙糖：先穿刺后接種斜面真菌（青霉）接種沙保勞氏培養(yǎng)基第二十三頁，共二十四頁。微生物大小測量原理微生物細胞的大小是其形態(tài)特征之一，也是鑒定的依據(jù)之一。在研究工作中有時要測定顯微鏡下微生物細胞的大小，使用工具為顯微測微尺。顯微測微尺有鏡臺測微尺和目鏡測微尺。目鏡測微尺是一塊可放在目鏡內(nèi)的園形玻片。在玻片中央把5mm長度，刻成100等分的小格，其目鏡測微尺經(jīng)過鏡筒光學(xué)系統(tǒng)后，其每格尺寸隨鏡筒長度變化而變化，也隨放大倍數(shù)而變化，因此必須選定顯微鏡及放大倍數(shù)。然后用已知長度的鏡臺測微尺來校準，計算