活化部分凝血活酶時(shí)間APTT測(cè)定作業(yè)指導(dǎo)書(shū)

1、活化部分凝血活酶時(shí)間APTT測(cè)定作業(yè)指導(dǎo)書(shū)1. 實(shí)驗(yàn)原理確定量的血漿樣本（50l）經(jīng)過(guò)一定時(shí)間（3min）加濕后，加入部分凝血活酶時(shí)間反應(yīng)試劑（50l），加溫3min，加入0.025MCaCl250l，采用波長(zhǎng)660nm的光照射樣本，凝血過(guò)程中血漿的混濁度可以通過(guò)測(cè)量散射光光強(qiáng)度的改變來(lái)測(cè)定，然后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出活化部分凝血活酶時(shí)間。2. 標(biāo)本采集2.1 早晨空腹采血(空腹12小時(shí)左右)，靜脈采血。2.2 3.8(w/v)枸椽酸鈉0.2ml+靜脈血1.8ml，混勻。3. 標(biāo)本存放：1小時(shí)內(nèi)(3000r/min15min)分離血漿，室溫放置不超過(guò)2小時(shí)，28保存不超過(guò)4小時(shí)，長(zhǎng)時(shí)間保存需在冰凍條

2、件下，（-70不超過(guò)6個(gè)月），只能凍融1次，在37迅速解凍，以減低凝血因子的消耗，解凍后立即測(cè)試。4. 標(biāo)本運(yùn)輸：低溫條件下運(yùn)輸。5. 標(biāo)本拒收的標(biāo)準(zhǔn)：抗凝劑不符合，采血量不準(zhǔn)確，凝固，溶血，脂血標(biāo)本不能作該項(xiàng)目檢測(cè)。6. 實(shí)驗(yàn)材料：6.1 德國(guó)Dade Behring Marburg 公司活化部分凝血活酶時(shí)間反應(yīng)試劑，每瓶2ml（40人份水劑），未開(kāi)封試劑28貯存到說(shuō)明書(shū)上有效期，開(kāi)蓋后28保存14天。6.2 0.025m CaCl2，28貯存到說(shuō)明書(shū)有效期。6.3 Dade Citrol質(zhì)控血漿.用蒸餾水1ml溶解后放置30分鐘，才能使用或分裝。復(fù)溶后，室溫保存2小時(shí)，284小時(shí)。7. 儀

3、器設(shè)備：7.1 儀器名稱(chēng)：Sysmex CA-1500全自動(dòng)血液凝固分析儀7.2 儀器廠家：日本Sysmex公司7.3 儀器型號(hào)：Sysmex CA-15007.4 儀器技術(shù)參數(shù)：7.4.1 速度： 最快檢測(cè)速度180測(cè)試/小時(shí)，組合檢測(cè)約140測(cè)試/小時(shí)7.4.2 試劑位：36個(gè)，具冷藏功能。7.4.3 樣本位：50個(gè)，可自動(dòng)連續(xù)添加。7.5 儀器校準(zhǔn)程序：7.5.1 校準(zhǔn)頻率：當(dāng)方法改變，試劑廠家或試劑型號(hào)改變，儀器維修影響測(cè)定結(jié)果等情況時(shí)，必須進(jìn)行校準(zhǔn)。7.5.2 校準(zhǔn)操作：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線分析(由儀器提供商指定工程師執(zhí)行)8. 操作步驟：8.1 檢查前準(zhǔn)備：8.1.1 清空廢液瓶，清空反應(yīng)

4、杯拋棄槽。8.1.2 添加足夠反應(yīng)杯(不能超出警告線)。8.1.3 添加清潔液、試劑，清洗用蒸餾水。8.2 開(kāi)機(jī)：先開(kāi)打印機(jī)再開(kāi)主機(jī)，開(kāi)機(jī)后儀器自檢，約15分鐘，屏幕上方“Not Ready”變?yōu)椤癛eady”，表示儀器預(yù)熱完成，進(jìn)入系統(tǒng)準(zhǔn)備工作狀態(tài)，可進(jìn)行測(cè)定。8.3 輸入工作清單：從主菜單選Work List出現(xiàn)第一架樣本工作清單輸入畫(huà)面，選ID NO Entry輸入第一個(gè)樣本號(hào)按相應(yīng)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱(chēng)鍵APTT，并同時(shí)輸入此標(biāo)本的其他測(cè)試項(xiàng)目，若選“凝血四項(xiàng)（PT、APTT、Fbg、TT）”，可按Profile #1組合選項(xiàng)選擇，選中項(xiàng)目相應(yīng)位置標(biāo)記為“”，選完項(xiàng)目后按ENTER確認(rèn)，要?jiǎng)h除某

5、項(xiàng)目時(shí)只需按該項(xiàng)目名稱(chēng)鍵（按鍵如APTT變?yōu)锳PTT-）即可，用鍵，同樣輸入其他標(biāo)本編號(hào)項(xiàng)目。快速輸入可用Repeat鍵，輸入重復(fù)標(biāo)本數(shù)，復(fù)制同樣項(xiàng)目的輸入。8.4 放置樣本：按8.3所設(shè)好的工作清單順序?qū)㈦x心分離好的樣本放置于樣本架上，并按順序把樣本架排列于Sampler進(jìn)樣器右邊位置(最多同時(shí)放5架共50個(gè)樣本)8.5 按Start鍵開(kāi)始測(cè)定：蓋好遮光蓋，確認(rèn)儀器為“Ready”狀態(tài)，按Start鍵，進(jìn)樣開(kāi)始，測(cè)定進(jìn)行，儀器顯示為“Analying”(被選擇項(xiàng)目背景變?yōu)椤啊保藭r(shí)可重復(fù)8.3，8.4，繼續(xù)輸入其他架樣本工作清單，按Rigester，繼續(xù)確認(rèn)測(cè)試任務(wù)，添加樣本架繼續(xù)測(cè)試，測(cè)定

6、完成，測(cè)定項(xiàng)目背景變?yōu)椤啊?，打印機(jī)打印出測(cè)定結(jié)果，所有測(cè)定清單完成，系統(tǒng)恢復(fù)“Ready”狀態(tài)。8.6 每日維護(hù)：完成每日的測(cè)定后，關(guān)機(jī)前維護(hù)。8.6.1 沖冼針Rinse Probe8.6.2 清空廢液瓶，和已使用過(guò)的反應(yīng)杯。8.6.3 將試劑架連用試劑放入冰箱。8.7 關(guān)機(jī)：先關(guān)主機(jī)，再關(guān)打印機(jī)。9. 檢驗(yàn)結(jié)果的判斷與分析：9.1 儀器測(cè)定APTT的線性范圍在5-600秒，測(cè)定完成后儀器顯示PT秒數(shù)，若不能對(duì)參數(shù)進(jìn)行正確計(jì)算，將出現(xiàn)下列信息：.出現(xiàn)錯(cuò)誤，不能得到分析數(shù)據(jù).不能計(jì)算參數(shù).數(shù)值超出線性范圍.9.2 儀器設(shè)定APTT參考范圍在23-35秒，如果得不到一個(gè)正常數(shù)值，在數(shù)據(jù)的左側(cè)將出

7、現(xiàn)下列標(biāo)記： 出現(xiàn)錯(cuò)誤信息 數(shù)據(jù)高于可報(bào)告的高限10. 質(zhì)量控制：每批樣本同時(shí)測(cè)定兩個(gè)濃度水平(高值和正常值)的質(zhì)控品，以2S為警告限，3S為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控。質(zhì)控規(guī)則詳見(jiàn)室內(nèi)質(zhì)控作業(yè)指導(dǎo)書(shū)。11. 臨床意義：APTT常用于內(nèi)源性凝血系統(tǒng)（、因子）的篩選及肝素抗凝治療的監(jiān)測(cè)。11.1參考范圍：23-35秒（患者結(jié)果超過(guò)正常對(duì)照10秒以上為異常）11.2 APTT延長(zhǎng)：見(jiàn)過(guò)先天性凝血因子缺乏（如血友病甲、乙，接觸因子、缺乏、VWF等）；多種凝血因子缺乏（如嚴(yán)重肝病、維生素K缺乏、DIC、纖溶亢進(jìn)等）；血液中有抗凝物質(zhì)存在。11.3 APTT縮短：見(jiàn)于DIC高凝期和妊娠高血壓綜合癥

8、等高凝狀態(tài)。11.4 是監(jiān)測(cè)肝素治療的首選指標(biāo)。12. 變異的潛在來(lái)源12.1 抗凝劑：草酸鹽、EDTA、肝素不適用于PT檢查。12.2 標(biāo)本采集處理不當(dāng)，如血與抗凝劑未充分混勻，出現(xiàn)凝塊，混勻時(shí)過(guò)分用力使標(biāo)本溶血，造成結(jié)果變異。12.3 纖溶藥物的影響（如雙香豆素、鏈激酶、尿酶等），超劑量使用肝素。12.4 FDP增加使凝固時(shí)間延長(zhǎng)。12.5 某些藥物的影響（如口服避孕藥、雌激素、天門(mén)冬酰胺酶、鈉絡(luò)酮等）。13. 操作注意事項(xiàng)：干粉試劑及質(zhì)控血漿溶解13.1 確認(rèn)溶劑類(lèi)型，一般溶解液包括：蒸餾水、生理鹽水、緩沖液、廠家特定溶解液，必須按說(shuō)明書(shū)要求使用。13.2 溶解時(shí)，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)容器，保證干粉

9、完全溶解，避免劇烈振蕩。13.3 復(fù)溶后，室溫放置5-10分鐘方可使用。14. 儀器維護(hù)與保養(yǎng)14.1 日常維護(hù)（見(jiàn)8.6）14.2 每周維護(hù)14.2.1 液路沖洗：儀器在“Ready”狀態(tài)下，從主菜單按 Special Menu按Maintain按RinsePrepare 按 Execute 鍵運(yùn)行此程序完成后按 Return 返回。14.2.2 清潔儀器：定期用擦布擦干凈儀器內(nèi)外，包括試劑槽。14.3 需要時(shí)維護(hù)：14.3.1 調(diào)整壓力：儀器在“Ready”狀態(tài)下，以主菜單按Special Menu按Maintain 按Pressure Adjust 鍵，顯示壓力是否在其調(diào)整范圍內(nèi)？若不在，則打開(kāi)儀器右側(cè)相應(yīng)壓力調(diào)整旋鈕，旋動(dòng)調(diào)整好壓力，再鎖緊旋鈕。14.3.2 更換燈泡：關(guān)機(jī)從儀器右側(cè)取下燈泡外蓋及內(nèi)蓋換上好的燈泡裝上內(nèi)外蓋從主菜單按Special