2014溫醫(yī)生技大三下課件植物組織培養(yǎng)實驗

1、實驗五黃瓜愈傷組織增殖和分化（一）實驗目的掌握黃瓜愈傷組織的增殖和分化技術，熟悉植物組織繼代培養(yǎng)操作過程。（二）實驗原理在不同的條件下（主要是植物生長調節(jié)劑配比的不同），愈傷組織可以分化成芽、根等不同器官，也可以繼續(xù)形成更多的愈傷組織。（三）實驗材料和用具 實驗材料：黃瓜愈傷組織實驗藥品：MS、 1mg/ml NAA 、 1mg/ml 6-BA、 1mol/L HCl、1mol/L NaOH、蒸餾水、燈用酒精、70酒精。滅菌培養(yǎng)基：MS1、 MS2和MS7實驗用具：天平、燒杯、玻璃棒、量筒、移液槍、三角瓶、pH試紙、電爐、高壓滅菌鍋。無菌室、勺子、酒精燈、酒精棉花、滴管、記號筆、廢液罐、火柴、

2、光照培養(yǎng)箱。（四）實驗步驟 配制以下培養(yǎng)基各100ml ：MS4：MS+2.0mg/LBA+2.0mg/L NAAMS7：MS+0.1mg/LBA+2.0mg/L NAAMS8：MS+2.0mg/L NAA取200ml燒杯3只，標記，各加入4g MS培養(yǎng)基和100ml蒸餾水，加熱直至完全溶解。 各加入 1mg/ml NAA 200l ，并不斷攪拌。分別加入 1mg/ml 6-BA 200l、10l和0l，并不斷攪拌。用1mol/L HCl或NaOH調節(jié)pH至5.86.0。分裝。將3種培養(yǎng)基分別分裝到4個三角瓶中，做好標記。滅菌。用高壓蒸汽滅菌鍋在121、 0.1MPa條件下滅菌1520min。

3、操作按儀器操作步驟進行。滅菌后待壓力下降到0Pa時取出，凝固后待用。4. 接種 進入無菌室，用70乙醇擦洗雙手和工作臺面，點燃酒精燈。解開三角瓶的繩子，將三角瓶按使用順序排好。在火焰邊打開三角瓶的封口紙，燒灼瓶口和勺子，待勺子冷卻后挑取愈傷組織（注意剝離外植體），轉移至新鮮培養(yǎng)基上，每瓶接3-5塊，一瓶轉接3-5瓶。每組每種培養(yǎng)基接種4瓶。光照培養(yǎng)箱25 、60光照16h/d培養(yǎng)。作業(yè)1周后觀察培養(yǎng)體系有無污染，計算每一個平皿內染菌愈傷組織數(shù)和愈傷組織外的菌落數(shù)，分析染菌原因。1周后觀察每種培養(yǎng)基上愈傷組織的變化情況，是形成芽、根或者維持愈傷組織的生長？計算其芽（根）的誘導率（形成芽（根）的愈傷組織塊數(shù)/總