微生物平板菌落計數(shù)法具體實驗步驟

1、微生物平板菌落計數(shù)法具體實驗步驟2010-4-311:17提問者：下雪的下雪|瀏覽次數(shù)：1760次手頭現(xiàn)在沒有實驗課本，故求微生物平板菌落計數(shù)法的具體實驗步驟！詳細(xì)的，包括稀釋倍數(shù)及取樣量！2010-4-314:32最佳答案一、目的要求學(xué)習(xí)平板菌落計數(shù)的基本原理和方法。、基本原理平板菌落計數(shù)法是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個菌落是由一個單細(xì)胞繁殖而成的現(xiàn)象進(jìn)行的,也就是說一個菌落即代表一個單細(xì)胞。計數(shù)時,先將待測樣品作一系列稀釋,再取一定量的稀釋菌液接種到培養(yǎng)皿中,使其均勻分布于平皿中的培養(yǎng)基內(nèi),經(jīng)培養(yǎng)后,由單個細(xì)胞生長繁殖形成菌落,統(tǒng)計菌落數(shù)目,即可換算出樣品中的含菌數(shù)。這種計數(shù)法的優(yōu)

2、點是能測出樣品中的活菌數(shù)。此法常用于某些成品檢定（如殺蟲菌劑）,生物制品檢定以及食品、水源的污染程度的檢定等。但平板菌落計數(shù)法的手續(xù)較繁,而且測定值常受各種因素的影響。三、器材大腸桿菌懸液,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,1ml無菌吸管,無菌平皿,盛有45ml無菌水的試管,試管架和記號筆等。四、操作步驟1編號：取無菌平皿9套，分別用記號筆標(biāo)明10-4、10-5、10-6各3套。另取6支盛有4.5ml無菌水的試管,排列于試管架上,依次標(biāo)明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。2稀釋用1ml無菌吸管精確地吸取0.5ml大腸桿菌懸液放入10-1的試管中，注意吸管尖端不要碰到液面,以免吹出時

3、,管內(nèi)液體外溢。然后仍用此吸管將管內(nèi)懸液來回吸吹三次,吸時伸入管底,吹時離開水面,使其混合均勻。另取一支吸管自10-1試管吸0.5ml放入10-2試管中,吸吹三次,其余依次類推。整個稀釋過程如圖哪-3。取樣用3支1ml無菌吸管分別精確地吸取10-4、10-5、10-6的稀釋菌液0.2ml，對號放入編好號的無菌培養(yǎng)皿中。倒平板于上述盛有不同稀釋度菌液的培養(yǎng)皿中，倒入溶化后冷卻至45C左右的肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基約1015ml,置水平位置,迅速旋動混勻，待凝固后,倒置于37C溫室中培養(yǎng)。計數(shù)培養(yǎng)24小時后,取出培養(yǎng)皿,算出同一稀釋度三個平皿上的菌落平均數(shù),并按下列公式進(jìn)行計每毫升中總活菌數(shù)=同一稀釋

4、度三次重復(fù)的菌落平均數(shù)x稀釋倍數(shù)x5一般選擇每個平板上長有30300個菌落的稀釋度計算每毫升的菌數(shù)最為合適。同一稀釋度的三個重復(fù)的菌數(shù)不能相差很懸殊。由10-4、10-5、10-6三個稀釋度計算出的每毫升菌液中總活菌數(shù)也不能相差懸殊,如相差較大,表示試驗不精確。平板菌落計數(shù)法,所選擇倒平板的稀釋度是很重要的,一般以三個稀釋度中的第二稀釋度倒平板所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個左右為最好。平板菌蓓計數(shù)法的操作除上述的以外,還可用涂布平板的方法進(jìn)行。二者操作基本相同,所不同的是涂布平板法是先將牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基溶化后倒平板,待凝固后編號，并于37C溫室中烘烤30分鐘左右，使其干燥,然后用無菌吸管吸取

5、0.2ml菌液對號接種于不同稀釋度編號的培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基上,再用無菌玻璃刮棒將菌液在平板上涂布均勻,平放于實驗臺上2030分鐘，使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi),然后再倒置于37C的溫室中培養(yǎng)。五、實驗報告結(jié)果將計數(shù)結(jié)果填入下表。思考題為什么溶化后的培養(yǎng)基要冷卻至45C左右才能倒平板？要使平板菌落計數(shù)準(zhǔn)確,需要掌握哪幾個關(guān)鍵？為什么？同一種菌液用血球計數(shù)板和平板菌落計數(shù)法同時計數(shù),所得結(jié)果是否一樣？為什么？試比較平板菌落計數(shù)法和顯微鏡下直接計數(shù)法的優(yōu)缺點用倒平板法和涂布計數(shù)法，其平板上長出的菌落有何不同？為什么要培養(yǎng)較長時間(48h)后觀察結(jié)果?2009-4-1918:06提問者：lakersbao|懸賞分：20|瀏覽次數(shù)：1308次如題，謝謝2009-4-1919:10最佳答案涂布法：(培養(yǎng)基時固態(tài)的)適用于好氧微生物的菌落觀察。涂布法使用較多，但有時不均勻,菌落一般在表面。倒平板