西南林大現(xiàn)代生化儀器分析課件06高效液相色譜分析法第1節(jié) 高效液相色譜的特點(diǎn)與儀器

1、第六章高效液相色譜分析法一、高效液相色譜儀HPLC二、高效液相色譜法的特點(diǎn)feature of HPLC三、流程及主要部件general process and main assembly of HPLC第一節(jié)高效液相色譜的特點(diǎn)與儀器high performance liquid chromatographfeature and instrument of HPLC2022/9/9一、液相色譜儀器 high performance liquid chromatograph2022/9/9液相色譜儀（2）2022/9/9液相色譜儀（3）2022/9/9液相色譜儀（4）2022/9/9二、高效液相

2、色譜法的特點(diǎn)（HPLC） 特點(diǎn)：高壓、高效、高速 高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定有機(jī)及生化試樣的高效分離分析方法。2022/9/9三、流程及主要部件1.流程2022/9/92.主要部件(1) 高壓輸液泵主要部件之一，壓力：150350105 Pa。為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相（10m），液體的流動相高速通過時，將產(chǎn)生很高的壓力，因此高壓、高速是高效液相色譜的特點(diǎn)之一。應(yīng)具有壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕等特性（動畫）2022/9/9(2)梯度淋洗裝置外梯度: 利用兩臺高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按一定的比例送入梯度混合室，混合后進(jìn)入色譜柱。內(nèi)梯度: 一臺高壓泵, 通過比例調(diào)節(jié)閥,將兩種或

3、多種不同極性的溶劑按一定的比例抽入高壓泵中混合。2022/9/9(3) 進(jìn)樣裝置 流路中為高壓力工作狀態(tài)， 通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置， 其結(jié)構(gòu)如圖所示：2022/9/9(4) 高效分離柱 柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑16 mm，柱長540 cm。發(fā)展趨勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。2022/9/9(5) 液相色譜檢測器 a. 紫外檢測器 應(yīng)用最廣，對大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)。 特點(diǎn)： 靈敏度高；線形范圍高；流通池可做的很?。?mm 10mm ，容積 8L）； 對流動相的流速和溫度變化不敏感；波長可選，易于操作；可用于梯度洗脫。2022/9/9b. 光電二極管陣列檢測器 紫外檢測器的重要進(jìn)展； 光電二極管陣列檢測器：1024個二極管陣列，各檢測特定波長，計算機(jī)快速處理，三維立體譜圖，如圖所示。2022/9/92022/9/9光電二極管陣列檢測器2022/9/9c. 示差折光檢測器 除紫外檢測器之外應(yīng)用最多的檢測器； 可連續(xù)檢測參比池和樣品池中流動相之間的折光指數(shù)差值。差值與濃度呈正比； 通用型檢測器（每種物質(zhì)具有不同的折光指數(shù)）； 靈敏度低、對溫度敏感、不能用于梯度洗脫； 偏轉(zhuǎn)式、反射式和干涉型三種；2022/9/9示差折光檢測器2022/9/92022/9/9d. 熒光檢測器 高靈