診斷酶學(xué)第五版精選PPT

1、關(guān)于診斷酶學(xué)第五版第一張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第一節(jié) 概 述（一）酶的組成、結(jié)構(gòu)和功能 酶的本質(zhì)-絕大部分的酶是蛋白質(zhì)，有些酶是核酸 和酶蛋白組成的復(fù)合體，極少數(shù)酶的本質(zhì)是核酸。 酶的特性-極高的催化效率、高度的特異性 (specificity)以及催化作用的可調(diào)節(jié)性一、酶的概念與特征 第二張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月酶的結(jié)構(gòu)和功能 酶是蛋白質(zhì)，具有一、二、三級結(jié)構(gòu)，有些酶還具 有四級結(jié)構(gòu)。 單體酶(monomeric enzyme)-只由一條多肽鏈構(gòu)成 寡聚酶 (oligomeric enzyme)-由多個相同或不同 亞基以非共價鍵連接的酶 多酶體系(mult

2、ienzyme system)-由幾種不同功能 的酶彼此聚合而成的多酶復(fù)合物 酶的必需基團(essential group)-與酶的活性密 切相關(guān)的基團 酶的活性中心(active center)-組成具有能與底 物結(jié)合并起催化反應(yīng)的特定空間結(jié)構(gòu)區(qū)域第三張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）酶的催化作用機制酶主要通過與底物形成一種或多種中 間復(fù)合物來降低反應(yīng)的活化能。 在酶促反應(yīng)中，酶與底物結(jié)合時，底物首先和酶分子上的活性中心相結(jié)合，形成酶底物中間復(fù)合物（ES），降低反應(yīng)的活化能，顯著提高了反應(yīng)速度。第四張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（三）酶的命名、分類與編號 酶的命名-

3、習(xí)慣命名法、系統(tǒng)命名法 酶的分類-可分為六大類 氧化還原酶(oxido-reductases)、轉(zhuǎn)移酶(transferases)、水解酶(hydrolases)、裂解酶(或裂合酶)(lyases)、異構(gòu)酶(isomerases)、合成酶(或連接酶)(synthetases或ligases) 酶的編號-用4個數(shù)字加以系統(tǒng)編號 第一個數(shù)字表示酶的類別，第二個表示亞類， 第三個表示亞-亞類，第四個表示酶的編號序數(shù)。 酶的命名-習(xí)慣命名法、系統(tǒng)命名法（四）酶分類與編號第五張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月 習(xí)慣用名 英文縮寫 EC編號 系統(tǒng)名乳酸脫氫酶 LD（LDH） 1.1.1.27 L乳

4、酸：NAD+氧化還原酶單胺氧化酶 MAO 1.4.3.4 單胺：氧化還原酶-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶 -GT/GGT 2.3.2.2 -谷氨酰肽：氨基酸-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 AST 2.6.1.1 L-門冬氨酸：-酮戊二酸氨基轉(zhuǎn)移酶（谷草轉(zhuǎn)氨酶） (GOT)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 ALT 2.6.1.2 L-丙氨酸：-酮戊二酸氨基轉(zhuǎn)移酶（谷丙轉(zhuǎn)氨酶） (GPT)肌酸激酶 CK 2.7.3.2 三磷酸腺苷：肌酸轉(zhuǎn)磷酸酶堿性磷酸酶 ALP(AKP) 3.1.3.1 正磷酸單酯磷酸水解酶臨床酶學(xué)分析中常用酶的名稱與編號第六張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月二、同工酶的概念與特征同工酶是指催化相同化

5、學(xué)反應(yīng)，但酶蛋白的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)乃至免疫學(xué)性質(zhì)不同的一組酶。根據(jù)同工酶的來源和結(jié)構(gòu)不同，從基因角度可將其分為單基因決定的同工酶、復(fù)等位基因同工酶、多基因決定的同工酶和修飾同工酶四類。 第七張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第八張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月三、工具酶通常把酶學(xué)分析中作為試劑用于測定化合物濃度或酶活性濃度的酶稱為工具酶。常用工具酶多為氧化還原酶類。 第九張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月1偶聯(lián)H2O2的工具酶及其指示反應(yīng) 利用葡萄糖氧化酶等工具酶使相應(yīng)底物被氧化生成H2O2。在POD的直接催化下，H2O2氧化芳香族胺色素原生成有色的色素 ,再進行比

6、色測定。 2NAD(P)+或NAD(P)H偶聯(lián)的脫氫酶及其指示反應(yīng) 作為工具酶的脫氫酶如LD將底物的氫原子去除后傳遞給NAD(P)+而形成NAD(P)H。因NAD(P)H在340nm有特征性光吸收，可借此用分光光度法進行檢測。 （一）工具酶參與的指示反應(yīng) 第十張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第十一張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）酶循環(huán)法 （405nm）第十二張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（三）代謝物濃度的酶法測定技術(shù) 直接法 1終點法 酶偶聯(lián)法 2動力學(xué)法 第十三張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第二節(jié) 酶測定技術(shù)酶活性測定主要利用酶有加速化學(xué)反應(yīng)

7、（催化）的特性，通過測定被加速化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)速率，根據(jù)酶促反應(yīng)中底物的減少量或產(chǎn)物的生成量來計算酶活性濃度的高低。 第十四張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月酶促反應(yīng)動力學(xué) 酶促反應(yīng) 第十五張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月 酶促反應(yīng)進程第十六張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月一、酶活性測定 （一）定時法測定酶活性 終點法是在酶促反應(yīng)平衡期（S或P不變）任何一點進行測定，故不需終止反應(yīng)。 第十七張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月1直接法 是在不終止酶促反應(yīng)條件下，直接通過測定反應(yīng)體系中底物或產(chǎn)物理化特性的變化如吸光度、熒光、旋光性、pH、電導(dǎo)率、粘度等，從而計算出

8、酶活性濃度。 2間接法 在原反應(yīng)體系中加入另一些酶試劑，所進行的酶促反應(yīng)和被測酶反應(yīng)偶聯(lián)起來。 連續(xù)測定酶反應(yīng)過程中某一反應(yīng)產(chǎn)物或底物的濃度隨時間變化的多點數(shù)據(jù)，求出酶反應(yīng)初速度，間接計算酶活性濃度的方法。 （二）連續(xù)監(jiān)測法測定酶活性 第十八張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月酶偶聯(lián)反應(yīng) A B C D 酶學(xué)分析中作為試劑用于測定化合物濃度或酶活性濃度的酶 Ei指示酶Ea輔助酶ExEiEa工具酶第十九張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月L-丙氨酸 -酮戊二酸 -丙酮酸 L-谷氨酸丙酮酸 NADH H+ 乳酸 NAD+ALT（樣品）LD（試劑）酶耦聯(lián)法測定ALT340nmA/min-

9、酮酸標本中GLDH標本中試劑1試劑2第二十張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十一張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月酶耦聯(lián)法測定舉例第二十二張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十三張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十四張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月(三)干擾因素 1其他酶和物質(zhì)的干擾 2酶的污染 3非酶反應(yīng) 4分析容器的污染 5沉淀形成 第二十五張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月 （四）血清酶活性濃度測定條件的優(yōu)化 (1)方法選擇 (2)儀器和設(shè)備 (3)試劑 (4)儀器參數(shù)的設(shè)置 1方法類型 2波長 3樣品量與試劑量 4. 稀釋水量

10、 5反應(yīng)時間 6孵育時間 7. 延遲時間 8. 監(jiān)測時間 9. 試劑吸光度上、下 限 10. 底物耗盡限額 11. 線性度 12. 試劑空 白速率 13. 線性范圍 14. 計算因子F值 (五)部分分析前因素對酶活性測定的干擾 1溶血 2抗凝劑 3標本儲存溫度第二十六張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（六）酶活性濃度的單位 1. 酶活性單位 （1）慣用單位 （2）國際單位-在特定的條件下，一分鐘內(nèi)使底 物轉(zhuǎn)變一微摩爾的酶量為一個國際單位。 （3）Katal單位-在規(guī)定條件下，每秒鐘催化轉(zhuǎn)化 一摩爾底物的酶量。1katal60106U 第二十七張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月

11、2. 酶活性濃度單位 以每單位體積所含的酶活性單位數(shù)表示。 （1）表示方法-UL （2）酶活性濃度單位的計算-用連續(xù)監(jiān)測法測 定時，根據(jù)摩爾消光系數(shù)計算。第二十八張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月3. 參考值和正常上限倍數(shù)的應(yīng)用 （1）參考區(qū)間 （2）正常上限倍數(shù)的應(yīng)用 正常上限(upper limits of normal， ULN)倍數(shù)作為酶活性濃度的表示法， 就是測定值除以正常上限值。第二十九張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（七）系數(shù)K值的計算與應(yīng)用1. 系數(shù)K值的意義與設(shè)置2. 系數(shù)K值的類型與計算第三十張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（八）臨床酶學(xué)測定的標

12、準化 1. 標準化途徑 1使用推薦方法和參考方法 2使用公認的酶校正物或酶參考物 2. 酶活性濃度測定的參考系統(tǒng) 1建立原級參考方法 2制備原級參考物 3建立參考實驗室網(wǎng)絡(luò)第三十一張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（一）測定原理（二）免疫化學(xué)測定的優(yōu)缺點 優(yōu)點主要有：靈敏度高特異性高 能用于一些不表現(xiàn)酶活性的酶蛋白 特別適用于同工酶的測定 局限性主要有：制備足夠量的提純酶作為抗原和 具有免疫化學(xué)性質(zhì)的抗血清較困難 測定步驟多，操作繁瑣 測定成本高二、酶質(zhì)量測定第三十二張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月三、同工酶檢測 第三十三張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月 (一)電泳

13、法-瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰 胺凝膠電泳、等電聚焦電泳、 毛細管電泳 用電泳法進行同工酶分析時，如顯示的 區(qū)帶數(shù)與同工酶數(shù)不一致時，要特別注意 巨分子酶的存在。 (二)層析法第三十四張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月血 清 LD 電 泳 圖 譜 分 析第三十五張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月正常和病理狀況時血清CK同工酶譜第三十六張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月(三)免疫分析法 免疫抑制法 利用同工酶的一種亞基與相應(yīng)的抗體結(jié)合后，酶活性受到抑制，測定加與不加抗體前后樣品中酶活性的變化，可以計算出該型同工酶的活性。 不加抗CK-MM血清時樣品的CK活性：CK-MM和C

14、K-MB活性； 加入抗CK-MM血清時樣品的CK活性：50CK-MB的活性； 加入抗CK-MM血清時樣品的CK活性2：CK-MB活性； 所測CK-MM和CK-MB之總活性CK-MB活性CK-MM活性。第三十七張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月 (四)動力學(xué)分析法 1底物特異性分析法 2抑制劑分析法 3pH分析法 4熱失活分析法 (五)蛋白酶水解法第三十八張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第三節(jié) 常用酶及同工酶測定的臨床應(yīng)用 一、血清酶血清酶活性升高的原因：組織器官受損造成細胞破壞或細胞膜通透性增高，細胞內(nèi)的某些酶大量釋放入血；細胞的轉(zhuǎn)換率增高或細胞的增殖加快，其特異的標志酶釋放

15、入血；細胞內(nèi)酶的合成或誘導(dǎo)增強；酶的清除受阻。第三十九張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月1、血清酶的來源 （1）血漿特異酶 （2）非血漿特異酶 外分泌酶 細胞酶2、血清酶的去路 （1）血清酶的半壽期 （2）血清酶的失活和排泄（一）血清酶的來源與去路 第四十張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）血清酶的生理差異 1性別 2年齡 3進食 4運動 5妊娠 6其他第四十一張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月 常用的酶譜：(1)心肌酶譜-AST、LD、CK、CK-MB、CK- MB亞型或CK-MM亞型(2)肌酶譜-LD、AST及其同工酶、CK-MM亞型(3)肝酶譜-ALT、LD、

16、-GT、ALP、ChE、MAO(4)腫瘤酶譜-ACP及其同工酶、ALP及其同工酶、 -GT及其同工酶、AFU、AMY及其同工酶、LPS(5)胰酶譜-AMY及其同工酶、LPS、彈力蛋白酶-1、 磷脂酶A2（三）血清酶的臨床應(yīng)用 第四十二張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第四十三張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月二、尿液酶三、漿膜腔積液酶 四、腦脊液酶 第四十四張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月五、同工酶的診斷價值 LD同工酶心肌梗死、肝功能損傷和惡性腫瘤 CK同工酶心肌梗死、肌肉疾病和神經(jīng)系統(tǒng)疾病 AST同工酶肝臟、心肌等細胞損傷程度的判斷 GP同工酶急性心肌梗死 ARS

17、同工酶膀胱癌 ALD同工酶肝臟疾病、心肌梗死、神經(jīng)肌肉系 統(tǒng)疾病和惡性腫瘤 -GT同工酶肝臟占位性病變 AMS同工酶急性胰腺炎、腮腺炎 ALP同工酶肝膽疾病、骨骼疾病 ACP同工酶前列腺疾病 GST 同工酶肝臟疾病、肺癌 第四十五張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月1、轉(zhuǎn)氨酶及其同工酶DeRitis比值（ASTALT）對于急、慢性肝炎的診 斷、鑒別診斷以及判斷轉(zhuǎn)歸也有特別價值。急 性肝炎時比值1，肝硬化時比值2，肝癌時 比值3。“酶膽分離”現(xiàn)象重癥肝炎時由于大量肝細胞壞死， 血中ALT逐漸下降，而膽紅素卻進行性升高，常 是肝壞死的前兆。第四十六張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月2

18、、-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶及其同工酶-GT同工酶分為-GT1、-GT2、-GT3和-GT4四種，正常人只見-GT2和-GT3。重癥肝膽疾病和肝癌時常有-GT1出現(xiàn)，乙醇性肝壞死和膽總管結(jié)石時常有-GT2增加，-GT4與膽紅素增高密切相關(guān)。第四十七張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月3、肌酸激酶及其同工酶和亞型 在細胞質(zhì)內(nèi)存在3種同工酶，即CK-BB(CK1)，CK-MB(CK2)和CK-MM(CK3)。在細胞線粒體內(nèi)還存在另一CK同工酶，即所謂線粒體CK(CK-Mt)，也稱CK4。CK-MM亞型測定對早期AMI的檢出更為敏感，一般以CK-MM3CK-MMl10作為診斷 AMI的標準CK-MB2亞型

19、在AMI早期診斷和判斷有無再灌注上有很高的靈敏度和特異性。一般CK-MB219UL或CK-MB2CK-MB115可作為AMI的診斷標準之一。第四十八張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月4、乳酸脫氫酶及其同工酶 AMI時，LD由于分子量較大，在常用心肌酶中升高最遲，通常在梗死8-18h升高，48-144h達峰值，可顯著升高(5ULN)，因其半壽期較長，增高持續(xù)時間可達5-10d，此時其他酶已恢復(fù)正常，在亞急性心肌梗死診斷上有一定價值。 測定血清及胸腹水中LD含量常用來鑒別其為漏出液抑或滲出液，若胸水LD血清LD0.6、腹水LD血清LD0.4為滲出液，反之為漏出液。 骨骼肌和肝細胞損傷時常出

20、現(xiàn)LD5LD4。急性肝炎時LD1和LD2相對下降，LD5升高；慢性肝炎時LD5升高，且LDlLD3；肝硬化時僅表現(xiàn)LD2下降和LD5升高；肝癌時LD5升高，但LD1LD3。惡性腫瘤如轉(zhuǎn)移到肝臟往往伴有LD4、LD5升高。第四十九張，PPT共五十五頁，創(chuàng)作于2022年6月5、堿性磷酸酶及其同工酶 人體各組織ALP同工酶可分為3大類，即胎盤ALP、腸ALP和肝骨腎ALP同工酶。 肝硬化、膽石癥和腫瘤引起的膽汁淤積，ALP增高達ULN的520倍。90以上的肝外膽道阻塞患者血清ALP升高，升高的程度常和阻塞程度及病程成正比。 胃腸道腫瘤；肺癌等惡性腫瘤時出現(xiàn)類腸型ALP，稱為Kasahara同工酶和類胎盤同工酶稱為Regan或Nagao同工酶。第五十張