甲型H1N1流感 病例標本的采集、保藏、和運輸

1、甲型H1N1流感 病例標本的采集、保藏、和運輸提綱法規(guī)依據(jù)新甲型H1N1流感標本的采集、運輸、保藏和防護感染性物質(zhì)運輸?shù)陌b、標簽與文件準備法規(guī)要求應注意的問題法規(guī)依據(jù)引文“標本采集-按照本指南的應急監(jiān)測方案（附件2）要求，采集相關(guān)標本進行檢測。具體標本采集類型、方法參見全國流感/人禽流感監(jiān)測實施方案的“流感監(jiān)測實驗技術(shù)操作規(guī)范”。生物安全要求-流感病毒培養(yǎng)應在具有資質(zhì)的BSL-3實驗室中進行，標本儲存、包裝和運送應按照病原微生物實驗室生物安全管理條例（國務院424號令）和可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定（中華人民共和國衛(wèi)生部第45號令）等有關(guān)規(guī)定執(zhí)行?！?甲型H1N

2、1流感預防控制技術(shù)指南（試行） （以下簡稱 “技術(shù)指南”）法規(guī)依據(jù)衛(wèi)生部甲型H1N1流感病毒實驗室檢測技術(shù)方案(試行)衛(wèi)生部甲型H1N1流感預防控制技術(shù)指南（試行） 衛(wèi)生部甲型H1N1流感診療方案（2009年試行版第一版） 人間傳染的病原微生物名錄可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定（2005年衛(wèi)生部45號令) 國家CDC全國流感/人禽流感監(jiān)測實施方案 新甲型H1N1流感標本的采集、運輸、保藏和防護采集要求 從事檢測標本采集的技術(shù)人員必須經(jīng)過生物安全培訓和具備相應的實驗技能。在標本采集過程中，采樣人員參照規(guī)定的防護措施進行安全防護。 住院病例的標本由所在醫(yī)院醫(yī)護人員在當?shù)?/p>

3、疾病預防控制機構(gòu)專業(yè)人員指導下采集。 標本采集具體種類和數(shù)量由現(xiàn)場工作組確定。 密切接觸者標本由當?shù)丶膊☆A防控制機構(gòu)負責采集。 根據(jù)實驗室檢測工作的需要，結(jié)合病程再次采樣。 采集對象疑似病例確診病例其他需檢測的樣本標本種類引文-推薦采集的呼吸道標本： “疾病發(fā)病后應盡快采集如下標本：鼻拭子、咽拭子、鼻腔吸取物、鼻腔沖洗液。氣管插管的病人也應收集氣管吸取物。標本應置于無菌病毒采樣液，并立即用冰塊或冰排保存或置于4 （冰箱），并馬上送至實驗室。（臨床樣品采集人員及實驗室檢測人員的感染控制指導請見相關(guān)文件。） 采樣同時填寫疑似人感染甲型H1N1感染病例標本采樣單。（附表1） ” -“甲型H1N1流感

4、病毒實驗室檢測技術(shù)方案”標本種類1 上呼吸道標本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液、深咳痰液。最佳采集時間為發(fā)病后3天內(nèi)。2 下呼吸道標本：包括呼吸道抽取物、支氣管灌洗液、肺組織活檢標本。3 尸檢標本：病人死亡后應依法盡早進行解剖，在嚴格按照生物安全防護的條件下，進行尸檢。4 血清標本：每一病例必須采集血清標本，須采集急性期、恢復期雙份血清。第一份血清應盡早（最好在發(fā)病后7天內(nèi)）采集，第二份血清應在發(fā)病后第34周采集。采集量要求5ml，以空腹血為佳，建議使用真空采血管。5 其它標本：如果病例有腹瀉癥狀，可在發(fā)病后采集糞便標本；有胸水者可采集胸水標本。標本采集方法 1 咽拭子：用2根聚丙烯

5、纖維頭的塑料桿拭子同時擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將拭子頭浸入含3ml采樣液的管中，尾部棄去，旋緊管蓋。2 鼻拭子：將1根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動退出。取另一根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子以同樣的方法采集另一側(cè)鼻孔。上述兩根拭子浸入同一含3ml采樣液的管中，尾部棄去，旋緊管蓋。3 鼻咽抽取物或呼吸道抽取物：用與負壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液或從氣管抽取呼吸道分泌物。 將收集器頭部插入鼻腔或氣管，接通負壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出，收集抽取的粘液，并用3ml采樣液沖洗收集器1次（亦可用小孩導尿管接在50ml注射器上來替代收集器）。 標本采集方法 4 咽漱液：

6、用10ml不含抗菌素的采樣液漱口。漱口時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓洗液在咽部轉(zhuǎn)動。然后將咽漱液收集于50ml無菌的螺口塑料管中。無條件的可用平皿或燒杯收集咽漱液并轉(zhuǎn)入10ml螺口采樣管中。5 深咳痰液：要求病人深咳后，將咳出的痰液收集于50ml含3ml采樣液的螺口塑料管中。6 呼吸道灌洗液：將收集器頭部從鼻孔或氣管插口處插入氣管（約30cm深處），注入5ml生理鹽水，接通負壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出。收集抽取的粘液，并用采樣液涮洗收集器1次（亦可用小孩導尿管接在50ml注射器上來替代收集）。標本采集方法7 胸水:在B超定位下進行胸腔穿刺，抽取胸水5ml，置于無菌的塑料螺口管中。8 肺組

7、織活檢標本：在超聲或X線定位下,經(jīng)皮穿刺取肺組織活檢標本,置于含3ml采樣液的塑料螺口管中。9 尸檢標本：每一采集部位分別使用不同消毒器械，以防交叉污染；每種組織應多部位取材，各部位應取2050g，淋巴結(jié)取2個。10 糞便標本：采集510g糞便置于含510ml采樣液無菌螺口管中，嚴格密封。11 血清標本：用真空負壓采血管采集血液標本5ml，室溫靜置30分鐘，15002000rpm離心10分鐘，收集血清于2ml無菌螺口塑料管中。 標本采集所需要的器材引文-“理想的情況下，標本應使用頭部為合成纖維的拭子（例如，聚酯纖維 ），用鋁或塑料做桿。不推薦棉拭子和木桿。不能用海藻酸鈣做的拭子收集標本。標本采

8、集管應包含3毫升病毒運輸液（例如，含有蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑，阻止細菌和真菌生長的抗生素，緩沖液） ?！?“技術(shù)指南”常用的采樣液配方 pH 7.47.6的Hanks氏液或MEM/DMEM液。在采樣液中需加入抗菌素，可用青霉素（終濃度為100U/ml）、慶大霉素（終濃度為1mg/ml）和抗真菌藥物（終濃度為2g/ml） 標本采集所需要的器材1、拭子2、壓舌板3、塑料瓶、采樣杯或器皿4、15ml 的離心管5、移液管6、注射器7、10ml真空取血管 標本采集所需要的器材冰壺采樣運輸管外包裝容器（有生物安全標志）其他：酒精燈、剪刀、紙漏斗、酒精、碘酒、吸耳球、塑料袋、記號筆、標簽、登記表等。標本包裝和運輸引文

9、-臨床標本儲存、運輸 “所有呼吸道標本應保存在4 ，并盡快放置在-70。如果沒有-70度冰箱，標本應保存在4 ，但不應超過4天。 臨床標本應按照A類包裝要求運送，并用干冰運輸。 所有標本應標示清楚。疑似病例標本運送應包含的信息請參照禽流感標本運輸?！?“技術(shù)指南”標本采集后在生物安全級實驗室生物安全柜內(nèi)分裝成一式三份（分裝標本的生物安全柜不能用于提取核酸）。一份當?shù)貦z測用，一份送中國疾病預防控制中心檢測，一份保存以備復核。標本包裝和運輸禽流感實驗室檢測技術(shù)方案中規(guī)定的包裝方式（1）標本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料管里，擰緊。（2）將密閉后的標本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一

10、份標本。（3）直接在塑料管上用油性記號筆寫明樣本的種類、采樣時間、編號、姓名，同時也將標本有關(guān)信息填在禽流感人體標本送檢登記表，連同塑料管用另一塑料袋內(nèi)密封。 （4）將裝標本的密封袋放入專用運輸箱內(nèi)（或疫苗冷藏包），放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的材料。同一患者2 份以上的密封標本，可以放在同一個塑料袋內(nèi)再次做密封。若將進行病毒分離，可將密封好的裝有標本的容器直接放入液氮運輸罐內(nèi)運輸。所有容器必須印有生物危險標識。標本包裝和運輸采集后的標本應當使用能夠抵抗運輸過程中受到一般震動和負荷的包裝材料。采集后的標本必須要有三層包裝，第二層包裝與最后一層包裝之間應當填入適當?shù)木彌_物質(zhì)

11、，即使內(nèi)容物發(fā)生泄露也應當不會損壞這些保護性的緩沖物質(zhì)或者是外包裝。所有采集的疑似禽流感標本在運輸或轉(zhuǎn)運過程中必須標明“傳染性物質(zhì)”字樣運輸樣品必須委派專車雙人負責運送。標本保存用于病毒分離和核酸檢測的標本應盡快進行檢測，24小時內(nèi)能檢測的標本可置于4保存，24小時內(nèi)無法檢測的標本則應置于-70或以下保存。如無70保存條件，則于20冰箱暫存。血清可在4存放3天、-20以下長期保存。標本運送期間應避免反復凍融。 采樣人員的防護引文-二級防護“1適用于進入隔離留觀室和專門病區(qū)的醫(yī)務人員，接觸從病人身上采集的標本、處理其分泌物、排泄物、使用過的物品和死亡病人尸體的工作人員，轉(zhuǎn)運病人的醫(yī)務人員和司機。

12、2進入隔離留觀室和專門病區(qū)必須戴醫(yī)用防護口罩，每4小時更換1次或感潮濕時更換；穿工作服、隔離衣、鞋套，戴手套、工作帽。3每次接觸病人后立即進行手清洗和消毒。手消毒用0.30.5%碘伏消毒液或快速手消毒劑(洗必泰醇、新潔爾滅醇、75%酒精等)揉搓13分鐘。4、對病人實施近距離操作時，戴防護眼鏡。5、注意呼吸道及粘膜防護?！薄凹夹g(shù)指南”防護用品采樣人員的防護采樣過程防護建議穿普通工作服、戴工作帽、外罩一層防護服、戴防護眼鏡和防護口罩（離開污染區(qū)后更換），戴乳膠手套、穿鞋套。感染性物質(zhì)運輸?shù)陌b、標簽與文件準備 一類在運輸中，一旦有暴露發(fā)生，即能夠在所有人類和動物中引起永久性殘疾、導致威脅生命或致命

13、疾病的傳染性物質(zhì)。當感染性物質(zhì)從保護性的包裝中釋放出來即為暴露發(fā)生，導致人類與動物與其的生理接觸。 達到該標準的能引起人體疾病或引起人與動物疾病的感染性物質(zhì)的聯(lián)合國編號為UN2814，而只能引起動物疾病的該類感染性物質(zhì)則為UN2900 。 指定歸屬為UN2814，還是UN2900應基于對其醫(yī)學背景、人類或動物來源的癥狀、地方局部流行的條件、及對涉及人類或動物來源的個體情況的專業(yè)判斷。 UN 2814 恰當?shù)倪\輸名稱是“感染性物質(zhì)，感染人類”。UN 2900 恰當?shù)倪\輸名稱是“感染性物質(zhì)，僅感染動物”。A類感染性物質(zhì)（Infectious substances, Category A）B類感染性

14、物質(zhì)（Infectious substances, Category B） 沒有達到歸屬為A類標準的感染性物質(zhì)。B類感染性物質(zhì)的編號為UN3373。UN 3373恰當?shù)倪\輸名稱是 “診斷樣本”(Diagnostic specimens)或“臨床樣本”(Clinical specimens)。從2007年1月起，“診斷標本”或“臨床標本”這一運輸名稱將改為“生物性物質(zhì)B類” （Biological substance, Category B）。培養(yǎng)物(Cultures) 培養(yǎng)物是指以產(chǎn)生高濃度病原體為目的，擴增和繁殖病原體過程的產(chǎn)物，因此一旦發(fā)生暴露，將增加感染的危險性。該定義所指的培養(yǎng)物指以病

15、原體增殖為目的所準備的培養(yǎng)物，而不是用于診斷和臨床目的的培養(yǎng)物。主容器包裝要求 高致病性病原微生物菌（毒）種或者樣本應正確盛放在主容器內(nèi)，主容器要求無菌、不透水、防泄漏。主容器可以采用玻璃、金屬或塑料等材料，必須采用可靠的防漏封口，如熱封、帶緣的塞子或金屬卷邊封口。主容器外面要包裹有足夠的樣本吸收材料，一旦有泄漏可以將所有樣本完全吸收。主容器的表面貼上標簽，標明標本類別、編號、名稱、樣本量等信息。輔助容器輔助容器是在主容器之外的結(jié)實、防水和防泄漏的第二層容器，它的作用是包裝及保護主容器。多個主容器裝入一個輔助容器時，必須將它們分別包裹，防止彼此接觸，并在多個主容器外面襯以足夠的吸收材料。相關(guān)文

16、件（例如樣品數(shù)量表格、危險性申明、信件、樣品鑒定資料、發(fā)送者和接收者信息）應該放入一個防水的袋中，并貼在輔助容器的外面。輔助容器必須用適當?shù)囊r墊材料固定在外包裝內(nèi)，在運輸過程中使其免受外界影響，如破損、浸水等。A類感染性物質(zhì)的包裝與標簽B類感染性物質(zhì)的包裝與標簽感染性物質(zhì)溢出清除程序發(fā)生感染性或潛在感染性物質(zhì)溢出時，應采用下列溢出清除規(guī)程：1、戴手套，穿防護服，必要時需進行臉和眼睛防護。2、用布或紙巾覆蓋并吸收溢出物。3、向紙巾上傾倒適當?shù)南緞⒘⒓锤采w周圍區(qū)域（通?？梢允褂?%漂白劑溶液）。4、使用消毒劑時，從溢出區(qū)域的外圍開始，朝向中心進行處理。5、作用適當時間后（例如30 min），

17、將所處理物質(zhì)清理掉。如果含有碎玻璃或其他要使用簸箕或硬的厚紙板來收集處理過的物品，并將它們置于可防刺透的容器中以待處理。6、對溢出區(qū)域再次清潔并消毒（如有必要，重復第25步）。7、將污染材料置于防漏、防穿透的廢棄物處理容器中。8、在成功消毒后，通知主管部門目前溢出區(qū)域的清除污染工作已經(jīng)完成。感染性物質(zhì)在實驗室間的轉(zhuǎn)運 法規(guī)要求病原微生物實驗室生物安全管理條例第二章 病原微生物的分類和管理 第七條 國家根據(jù)病原微生物的傳染性、感染后對個體或者群體的危害程度，將病原微生物分為四類：第一類病原微生物，是指能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。第二類病原微

18、生物，是指能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。病原微生物實驗室生物安全管理條例 第三類病原微生物，是指能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預防措施的微生物。第四類病原微生物，是指在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。第一類、第二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。 病原微生物實驗室生物安全管理條例第九條 采集病原微生物樣本應當具備下列條件：（一）具有與采集病原微生物樣本所需要的生物安全防護水平相適應的設備；（二）具有掌握相關(guān)專業(yè)知識和操作技能的工作人員；（三）具有有效的防止病原微生物擴散和感染的措施；（四）具有保證病原微生物樣本質(zhì)量的技術(shù)方法和手段。采集高致病性病原微生物樣本的工作人員在采集過程中應當防止病原微生物擴散和感染，并對樣本的來源、采集過程和方法等作詳細記錄。病原微生物實驗室生物安全管理條例第十一條 運輸高致病性病原微生物菌（毒）種或者樣本，應當具備下列條件：（一）運輸目的、高致病性病原微生物的用途和接收單位符合國務院衛(wèi)生主管部門或者獸醫(yī)主管部門的規(guī)定；（二）高致病性病原微生物菌（毒）種或者樣本的容器應當密封，容器或者包裝材料還應當符合防水、防破損、防外泄、耐高（低