褪黑素及中藥復(fù)方抗雄性鼠前列腺炎作用的研究

1、褪黑素及中藥復(fù)方抗雄性鼠前列腺炎作用的研究【摘要】目的旨在研究褪黑素elatnin，T及中藥復(fù)方(pundhineseTraditinalediine，T)抗雄性鼠前列腺炎的作用并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)展討論。方法通過(guò)考察前列腺腺體器官的重量及指數(shù)、卵磷脂小體的密度、白細(xì)胞總數(shù)以及其組織病理切片等實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)，對(duì)T及T抗前列腺炎作用及機(jī)制進(jìn)展分析討論。結(jié)果實(shí)驗(yàn)說(shuō)明：褪黑素及中藥復(fù)方對(duì)前列腺炎方面表現(xiàn)出較好的藥理作用。顯著降低前列腺重量、指數(shù)，抑制性腺功能，增加卵磷脂小體的密度，降低白細(xì)胞總數(shù)，對(duì)其他炎癥反響也有較好的抑制作用。切片中可見復(fù)方制劑可使腺腔構(gòu)造及腺管直徑根本恢復(fù)正常。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)研究證明褪黑素

2、及中藥復(fù)方有較好的抗雄性鼠前列腺炎的作用，其作用機(jī)制可能與其抗自由基、補(bǔ)腎壯陽(yáng)和抗衰老等成效有關(guān)。【關(guān)鍵詞】褪黑素T；中藥復(fù)方(T)；丙二醛DA；一氧化氮N；前列腺指數(shù)；卵磷脂小體密度；白細(xì)胞總數(shù)褪黑素elatnin，T是松果腺于夜間分泌的、普遍存在于生物體內(nèi)的一種吲哚類激素，在體內(nèi)起重要的生理作用1。T具有明顯的晝夜節(jié)律性及明暗周期。T對(duì)機(jī)體有著廣泛的影響，具有調(diào)節(jié)免疫、抗氧化、抗炎、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、催眠、抗衰老等作用2，未見其治療前列腺炎的國(guó)內(nèi)外報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)中藥復(fù)方pundhineseTraditinalediine，T源自金匱腎氣丸(古成方)，有補(bǔ)腎壯陽(yáng)之成效。PS指前列腺非特異性感染所致的

3、急性或慢性炎癥引起的部分和全身病癥，是男性常見玻本實(shí)驗(yàn)以褪黑素及中藥復(fù)方合用對(duì)雄性鼠進(jìn)展口服灌胃給藥，通過(guò)考察前列腺腺體器官的重量及指數(shù)、卵磷脂小體的密度、白細(xì)胞總數(shù)以及其組織病理切片等實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)，對(duì)T及T抗前列腺炎的作用及機(jī)制進(jìn)展分析討論。1實(shí)驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物istar大鼠，雄性250g左右，由沈陽(yáng)藥科大學(xué)動(dòng)物室提供。1.2實(shí)驗(yàn)藥品和試劑熟地黃RadixRehanniaepreparata、黃芪(Radixastragali)、茯苓(Pria)、肉桂(rtexinnai)、枸杞(Frutuslyii)、山茱萸(Frutusrni)等：購(gòu)自沈陽(yáng)同仁堂大藥房；褪黑素elatnin：江蘇常州醫(yī)

4、藥技術(shù)開發(fā)公司；前列康：浙江康恩貝制藥股份(批號(hào)：021029-3)；角叉菜膠(arrageenin)：美國(guó)SIGA公司。2實(shí)驗(yàn)方法2.1實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕⒔遣娌四z致大鼠實(shí)驗(yàn)性非細(xì)菌性前列腺炎模型37。按張氏8造模方法，取istar雄性大鼠40只，體重250g左右，每鼠分別稱重，按體重腹腔注射10%烏拉坦，1l/100g，待麻醉成功后，剪除下腹部被毛，無(wú)菌條件下，于下腹部正中切口，直達(dá)腹腔，提起膀胱，暴露前列腺腹葉，以1%滅菌角叉菜膠溶液0.1l注入腹葉，送復(fù)臟器，縫合肌肉、皮膚。將40只造模大鼠隨機(jī)分為4組，每組8只，即褪黑素組、褪黑素中藥復(fù)方組、模型對(duì)照組、前列康片對(duì)照組，另取8只未造模大鼠作

5、為正常對(duì)照組。造模后7天開場(chǎng)給藥。模型對(duì)照組灌胃給予蒸餾水10l/kg，實(shí)驗(yàn)組灌胃給予褪黑素8.0g/kg、褪黑素中藥復(fù)方9.72g/kg；陽(yáng)性對(duì)照組灌胃給予前列康片417g/kg。每組每日晚5：00灌胃給藥一次，空白組不予處理。連續(xù)1周，于第8天給藥后1h，將各組動(dòng)物處死，摘取前列腺，取10l前列腺按摩液，用白細(xì)胞稀釋液稀釋20倍，于顯微鏡下數(shù)白細(xì)胞數(shù)。另取1滴前列腺液涂片，鏡下觀察卵磷脂小體密度按臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)分為4級(jí)，即滿視野為4級(jí)，3/4視野為3級(jí)，1/2視野為2級(jí)，1/4視野為1級(jí)。記錄結(jié)果，用t檢驗(yàn)進(jìn)展統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。2.2檢測(cè)方法2.2.1前列腺指數(shù)及性腺器官指數(shù)的測(cè)定9，10大鼠稱重

6、，然后處死，取前列腺稱重。前列腺指數(shù)=前列腺重/體重。2.2.2前列腺液的檢測(cè)11，12用前列腺按摩法采取前列腺液。正常前列腺液為稀簿乳白色液體，鏡檢：有很多卵磷脂小體，每高倍視野白細(xì)胞數(shù)在4個(gè)以下，偶見精子。前列腺炎時(shí)，白細(xì)胞或膿細(xì)胞每高倍視野4個(gè)以上，卵磷脂小體減少，偶可查到滴蟲。在顯微鏡下檢查可見以下幾種成分：(1)卵磷脂小體：正常前列腺液內(nèi)卵磷脂小體幾乎布滿視野，當(dāng)前列腺發(fā)生炎癥時(shí)，巨噬細(xì)胞吞噬大量脂類，故卵磷脂小體減少。因此，卵磷脂小體的多少，在一定程度上反映前列腺炎的輕重。(2)血細(xì)胞：正常前列腺液內(nèi)紅細(xì)胞極少，往往在炎癥時(shí)才出現(xiàn)，如按摩過(guò)重也引起紅細(xì)胞數(shù)增加；正常前列腺液內(nèi)白細(xì)胞

7、散在，每高倍視野下不超過(guò)4個(gè)。2.3切片的制作13用頸椎脫臼法處死大鼠，立即翻開腹腔，摘取前列腺，取部分組織，福爾馬林溶液固定，常規(guī)石蠟包埋切片(6)，HE染色后，光鏡觀察，每組隨機(jī)取5張切片，每張隨機(jī)選擇5個(gè)視野。2.4數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)采用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差xs表示，組間比擬采用t檢驗(yàn)進(jìn)展統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。3結(jié)果3.1T、T中藥復(fù)方對(duì)角叉菜膠所致實(shí)驗(yàn)性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠前列腺重量及指數(shù)的影響見表1。T組、T中藥復(fù)方組及前列康組大鼠的前列腺組織的重量和指數(shù)與模型組比擬差異有顯著性P0.01，模型組與空白組相比差異有顯著性P0.01。T組與模型組比擬差異不明顯。提示：實(shí)驗(yàn)性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠模型成立，T、T中

8、藥復(fù)方及前列康對(duì)實(shí)驗(yàn)性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠的炎癥有一定的抑制作用。Tab.1EffetsfT、T+Tnabaterialprstatitisinduedbyarrageenininrats(xs)Anntatin：paredithntrlgrup：P0.01；paredithdelgrup：*P0.05；*P0.013.2T、T中藥復(fù)方對(duì)角叉菜膠所致實(shí)驗(yàn)性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠卵磷脂小體密度及白細(xì)胞總數(shù)的影響見表2。T組、T中藥復(fù)方組及模型組大鼠的前列腺組織的卵磷脂小體密度與模型組比擬差異有顯著性，前列康組、T中藥復(fù)方組與模型組相比差異有顯著性P0.01。T組與模型組比擬差異不明顯。T組、T中藥

9、復(fù)方組及前列康組大鼠的前列腺液的白細(xì)胞總數(shù)(個(gè)/HP)與模型組比擬均有差異。T中藥復(fù)方組及前列康組差異顯著P0.01。提示：T對(duì)角叉菜膠所致實(shí)驗(yàn)性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠的前列腺炎有一定的抑制作用，T中藥復(fù)方及前列康的作用較T中藥復(fù)方低劑量顯著。Tab.2.EffetsfT+Tnabaterialprstatitisinduedbyarrageenininrats(xs)Anntatin：paredithntrlgrup：P0.01；paredithdelgrup：*P0.05；*P0.013.3T、T中藥復(fù)方對(duì)角叉菜膠所致前列腺炎大鼠前列腺腺體組織構(gòu)造的影響病理切片病理報(bào)告示：1正常對(duì)照組：間質(zhì)

10、內(nèi)未見炎性細(xì)胞及其他異常現(xiàn)象(圖1)；2T中藥復(fù)方組：腺泡間質(zhì)偶見炎性細(xì)胞，腺泡排列大小均未見異常(圖2)；3T組：腺泡間質(zhì)中可見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，結(jié)締組織增生，輕度水腫(圖3)；4模型組：前列腺間質(zhì)內(nèi)可見多數(shù)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腺上皮可見乳頭狀增生，結(jié)締組織增生(圖4)；5前列康組：有的腺泡間質(zhì)內(nèi)可見炎性細(xì)胞，間質(zhì)疏松，呈水腫狀，有的前列腺組織構(gòu)造根本正常(圖5)。圖1前列腺炎癥實(shí)驗(yàn)空白對(duì)照組圖2前列腺炎癥實(shí)驗(yàn)T+T組圖3前列腺炎癥實(shí)驗(yàn)T組圖4前列腺炎癥實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M圖5前列腺炎癥實(shí)驗(yàn)前列康組4結(jié)論角叉菜膠致大鼠前列腺炎模型成立；T中藥復(fù)方、前列康對(duì)角叉菜膠致大鼠前列腺炎有明顯的抑制作用，T組對(duì)角叉菜膠致

11、大鼠前列腺炎有一定的作用。褪黑素及中藥復(fù)方能顯著抑制雄性PS模型鼠的炎癥，減輕其炎性水腫引起的前列腺腺泡間質(zhì)水腫、炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)、結(jié)締組織增生。5討論T中藥復(fù)方的抗前列腺炎作用。常見的前列腺炎動(dòng)物模型根本為慢性炎癥，有以下幾種：角叉菜膠致大鼠前列腺炎模型、蛋清致大鼠前列腺炎模型、大腸桿菌致大鼠前列腺炎模型等。在前期實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)角叉菜膠致大鼠前列腺炎模型比擬典型，因此本實(shí)驗(yàn)選用角叉菜膠作為模型的誘發(fā)劑。自由基代謝紊亂與細(xì)胞損傷程度關(guān)系親密14。它是通過(guò)脂質(zhì)過(guò)氧化作用使細(xì)胞膜受損，LP程度的增高，還能通過(guò)脂質(zhì)氫化過(guò)氧物的分解產(chǎn)物引起細(xì)胞損傷。SD是一種超氧化自由基去除劑，通過(guò)一種連鎖反響是超氧自由基

12、歧化為H22，而后者在過(guò)氧化氫酶的作用下，生成無(wú)毒的H2。劉小平實(shí)驗(yàn)顯示15，BP、NP患者血清中DA高于安康對(duì)照組，SD活力低于安康對(duì)照組，這可能與炎癥的長(zhǎng)期慢性持續(xù)的刺激有關(guān)。氧自由基自始至終參與前列腺炎的發(fā)生開展，促進(jìn)前列腺導(dǎo)管水腫、變性、纖維化，使慢性前列腺炎癥病癥持續(xù)存在。SD活力下降可使RB膜變形才能下降，影響運(yùn)輸氧的功能，導(dǎo)致部分循環(huán)障礙，促進(jìn)或加重前列腺部分淤血、缺氧、水腫。本文用角叉菜膠制造了大鼠實(shí)驗(yàn)性非細(xì)菌性前列腺炎模型，其他炎癥有用二甲苯制造小鼠急性滲出性炎癥模型，用棉球制造小鼠慢性增生性炎癥模型，用蛋清制造大鼠急性滲出性炎癥模型。近年來(lái)的國(guó)內(nèi)外報(bào)道中未見褪黑素抗前列腺炎

13、的研究，但有其抗炎作用的相關(guān)報(bào)道。由本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，褪黑素及褪黑素+中藥復(fù)方可顯著進(jìn)步前列腺液中卵磷脂小體密度，降低白細(xì)胞數(shù)量，改善腺腔大小不一，減輕腔內(nèi)炎細(xì)胞浸潤(rùn)、間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤(rùn)及間質(zhì)水腫的程度，但褪黑素+中藥復(fù)方對(duì)雄性大鼠前列腺炎的治療作用比單用褪黑素效果顯著。實(shí)驗(yàn)說(shuō)明，褪黑素+中藥復(fù)方有一定的抗前列腺炎作用，這可能主要與其抗自由基作用有關(guān)。綜上所述，褪黑素elatnin，T及中藥復(fù)方通過(guò)去除自由基、補(bǔ)腎壯陽(yáng)、抗衰老、增強(qiáng)免疫功能等方面的機(jī)制，起到抗前列腺炎的作用，并為今后進(jìn)一步的藥理學(xué)研究提供理論根據(jù)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1魏偉，徐叔云.褪黑素的神經(jīng)內(nèi)分泌免疫作用及其應(yīng)用前景.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，1

14、997，133：196-200.2劉雪莉，付新錄，錢伯初.褪黑素抗前列腺增生及前列腺腫瘤的研究進(jìn)展.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2002，185：490-493.3唐鳳珍，候惠茹，張景云，等.大鼠前列腺炎模型的制備方法.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，1998，14(2)：187-188.4孫蓉，陳明，呂麗莉，等.前列泰顆粒對(duì)大鼠慢性前列腺炎模型的抗炎作用研究.中藥藥理與臨床，2001，17(6)：42-44.5戴岳，張聰，林巳蘢，等.黃芩總苷對(duì)大鼠急慢性前列腺炎影響的實(shí)驗(yàn)研究.中醫(yī)藥學(xué)刊，2022，21(3)：386-387.6崔祝梅，黃正良，任遠(yuǎn)，等.前列泰片對(duì)前列腺增生及其抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究.中成藥，1994，16(4)：38-40.7王飛，楊奎，蒲旭峰，等.加味三妙膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性前列腺炎大鼠血液流變學(xué)的影響.新疆中醫(yī)藥，2022，21(2)：7-9.8張亞強(qiáng).中藥前列腺湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性前列腺炎病理模型的影響.中西醫(yī)結(jié)合雜志，1991，11(8)：480.9郇宜俊，鐘奮志，郭永成，等.首丹王栓治療慢性前列腺炎的藥效學(xué)研究.山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，26(3)：227-229.10陳奇.中藥藥理研究方法學(xué).北京：人民衛(wèi)生出版社，1993，84.11唐鳳珍，候惠茹，張景云，等.大鼠前列腺炎模型的制備方法.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，1998，14(2)：187-188.12孫蓉，陳明，呂麗莉，等.前列泰