高原嚴(yán)重?zé)齻舆t復(fù)蘇大鼠腦損傷與興奮性氨基酸水平變化

1、高原嚴(yán)峻燒傷耽誤清醒大鼠腦損傷與快樂性氨基酸程度變革【摘要】目的：不雅察高原嚴(yán)峻燒傷耽誤清醒后早期大鼠腦損傷及快樂性氨基酸含量的變革.要領(lǐng)：130只雄性istar大鼠隨機(jī)分為燒傷即時清醒組(n=60)、燒傷耽誤清醒組(n=50)和正常比擬組(高原地域正常比擬組n=10和蘭州地域正常比擬組n=10).前兩組動物被制成高原海拔3800燒傷實行動物模子TBSA30，度.運(yùn)用高效毛細(xì)管電泳法檢測腦構(gòu)造中快樂性氨基酸谷氨酸，Glu含量，接納干、濕重比重法測定腦構(gòu)造含水量，原位末了標(biāo)識表記標(biāo)幟TUNEL不雅察腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡.效果：從蘭州地域急進(jìn)高原后，大鼠腦構(gòu)造Glu含量、腦構(gòu)造含水量、腦皮質(zhì)中TUN

2、EL陽性細(xì)胞數(shù)均未產(chǎn)生顯著改變P0.05；高原嚴(yán)峻燒傷后腦構(gòu)造Glu程度于傷后1h即明顯低落，連續(xù)至傷后24h，于傷后72h規(guī)復(fù)至正常程度P0.05；耽誤清醒組腦構(gòu)造Glu程度在不雅察時限內(nèi)均低于上述兩正常比擬組，耽誤清醒組與即時清醒組比擬除在傷后12h時相點無統(tǒng)計學(xué)差異外，別的時相點均低于即時清醒組P0.05.而腦構(gòu)造含水量于傷后6h開始升高，于24h達(dá)岑嶺，于傷后7d落至正常程度；高原燒傷延復(fù)組變革趨勢同高原燒傷即復(fù)組，但傷后7d仍未規(guī)復(fù).腦皮質(zhì)TUNEL陽性細(xì)胞在傷后1h即增多，也于傷后24h達(dá)岑嶺，傷后7d仍高于正常程度.結(jié)論：由蘭州地域急進(jìn)到高原地域，并不敷以導(dǎo)致大鼠腦構(gòu)造中快樂性氨

3、基酸含量產(chǎn)生變革及大鼠腦水腫的產(chǎn)生和腦皮質(zhì)凋亡細(xì)胞數(shù)的增長；高原嚴(yán)峻燒傷及耽誤清醒后，細(xì)胞外快樂性氨基酸淘汰，同時伴有受傷大鼠敏捷出現(xiàn)腦水腫，腦皮質(zhì)凋亡細(xì)胞明顯增長.【關(guān)鍵詞】燒傷；耽誤清醒；快樂性氨基酸類；腦水腫；細(xì)胞凋亡；大鼠0弁言嚴(yán)峻燒傷引起的腦損傷及腦水腫在平常和戰(zhàn)時均很常見，已有大量文獻(xiàn)報道1-3.大量研究表現(xiàn)快樂性氨基酸exitatryainaids,EAAs的大量開釋而產(chǎn)生的毒性作用，在加重繼發(fā)性腦損傷中起緊張作用.本研究使用大鼠嚴(yán)峻燒傷后即時清醒與耽誤清醒模子，開端不雅察高原嚴(yán)峻燒傷耽誤清醒后早期大鼠腦構(gòu)造中快樂性氨基酸含量變革及與腦損傷的干系.1質(zhì)料和要領(lǐng)1.1質(zhì)料1.2要領(lǐng)

4、致傷前1k，置室溫1925.實行前24h用電推推去背部被毛，單籠豢養(yǎng).實行前12h禁食、水.用含10g/L的戊巴比妥鈉ip注射麻醉40g/kg后，除正常比擬組外，于大鼠背部創(chuàng)立30%度燙傷模子病理證明.致傷條件為90，20s.正常比擬組：模擬燙傷37水浴，20s.動物隨機(jī)分為4組：高原燒傷即時清醒組高傷即復(fù)，n=60，傷后立即腹腔注射等滲鹽水按Parkland公式4L/kg；設(shè)立不雅察與檢測時間點：1hPB1h，6hPB6h，12hPB12h，24hPB24h，72hPB72h，7dPB7d；高原燒傷耽誤清醒組高傷延復(fù)，n=50，傷后6h開始補(bǔ)液；設(shè)立不雅察與檢測時間點：PB6h，PB12h，

5、PB24h，PB72h，PB7d；高原正常比擬組高正常，n=10，不補(bǔ)液.蘭州地域正常比擬組蘭正常，n=10，海拔1517，不補(bǔ)液.高傷即復(fù)組大鼠于傷后1，6，12，24，72h，7d6個時相點，高傷延復(fù)組大鼠于傷后6，12，24，72h，7d5個時相點別離取材，每個時相點各取10只動物，結(jié)實于實行臺，于各時相點抽血后，將大鼠斷頭，敏捷取腦，置0冰鹽水沖洗，去除血液、大血管等結(jié)締構(gòu)造，吸干；用0.1l/L磷酸緩沖液沖洗后，用雙面刀片于腦正中線將腦構(gòu)造縱形剖開，將大腦左半球切取完備的薄片約0.5后置于40g/L的中性甲醛混淆結(jié)實液，放于4冰箱，用于光鏡查抄及免疫構(gòu)造化學(xué)檢測.將上述剩余腦構(gòu)造大腦

6、皮質(zhì)，用電子天平稱重后置于80烤箱36h再稱重，使用構(gòu)造干濕重比值，不雅察腦構(gòu)造含水量，以檢測腦水腫的變革.將大腦右半球敏捷安排于凍存管中置于液氮中保存，用于快樂性氨基酸的檢測.谷氨酸含量接納高效毛細(xì)管電泳法4檢測腦構(gòu)造中谷氨酸含量.所得效果用l/g表現(xiàn).腦構(gòu)造含水量接納干濕比重法測定5：腦構(gòu)造含水量=濕重-干重/濕重100%.細(xì)胞凋亡實行步調(diào)按文獻(xiàn)6及說明書并稍作革新舉行.DAB顯色，顯微鏡下不雅察，細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒者為TUNEL陽性細(xì)胞，即凋亡細(xì)胞.統(tǒng)計學(xué)處置懲罰：所得數(shù)據(jù)以xs表現(xiàn)，接納SPSS統(tǒng)計軟件對組間差異舉行單因素方差闡發(fā)及兩兩比力，P0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義.2效果2.1谷

7、氨酸濃度變革急進(jìn)高原高正常后腦構(gòu)造Glu程度較蘭正常組稍低落，但統(tǒng)計學(xué)無差異P0.05；高原嚴(yán)峻燒傷后，高傷即復(fù)組Glu程度于傷后1h即明顯低于上述兩正常比擬組，于傷后6h開始上升，于12h再次落落，傷后24h又升高，傷后72h規(guī)復(fù)至正常程度P0.05；高傷延復(fù)組腦構(gòu)造Glu程度在不雅察時限內(nèi)均低于上述兩正常比擬組，高傷延復(fù)組與高傷即復(fù)組比擬除在傷后12h時相點無統(tǒng)計學(xué)差異外，別的時相點均低于高傷即復(fù)組P0.05,圖1.2.3細(xì)胞凋亡蘭正常組腦皮質(zhì)中只檢測到很少的TUNEL陽性細(xì)胞2個/高倍視野，高正常組腦皮質(zhì)中TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)較蘭正常組稍增高3.67個/高倍視野，但兩者無統(tǒng)計學(xué)差異；而高

8、傷即復(fù)組腦皮質(zhì)在各時相點均檢測到的TUNEL陽性細(xì)胞較上述兩正常比擬組顯著增多P0.01，隨著受傷時間的延伸，標(biāo)本TUNEL陽性細(xì)胞漸漸增多，于傷后24h達(dá)岑嶺233.67個/高倍視野，今后TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)那么出現(xiàn)落落趨勢，傷后7d仍明顯高于上述兩正常比擬組.高傷延復(fù)組腦皮質(zhì)中TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)變革趨勢根本與高傷即復(fù)組雷同，于傷后6h明顯升高，但于12h有一個落落歷程，隨后開始增長，也于24h達(dá)峰值(216個/高倍視野,圖3)；但高傷即復(fù)組及高傷延復(fù)組在上述各時相點所檢測到的凋亡細(xì)胞數(shù)無統(tǒng)計學(xué)差異P0.05).TUNEL標(biāo)識表記標(biāo)幟陽性的細(xì)胞核被染成棕褐色，胞漿復(fù)染為淡藍(lán)色.3討論海拔3000，大多數(shù)人在靜息狀態(tài)下可出現(xiàn)差異程度的高原反響，隨著海拔高度的增高，高原病的發(fā)病率漸漸增長7.腦構(gòu)造對氧的需求量高，對缺氧的耐受性差，是機(jī)體對缺氧最敏感的構(gòu)造8.腦缺血再灌注損傷的機(jī)制非常龐大，能量代謝、細(xì)胞內(nèi)鈣、細(xì)胞凋亡、快樂性氨基酸毒性、細(xì)胞因子、氧自由基RS產(chǎn)生和炎癥反響等大概與再灌注損傷有關(guān)9.本研究在高原海拔3800實地情況條件下研究高原大鼠嚴(yán)峻燒傷耽誤清醒后腦構(gòu)造快樂性氨基酸含量動態(tài)改變及與腦損傷的干系.黎海濤等10報道犬嚴(yán)峻燒傷早期即有腦水腫形成，傷后12h已十明白確.本研究效果表現(xiàn)，由蘭州地域1517豢養(yǎng)的大鼠通過急進(jìn)高原地域3800，我們