生長抑素類似物奧曲肽對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖及凋亡的影響

1、生長抑素類似物奧曲肽對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖及凋亡的影響黃子健陳穎梅雪婷何麗娟喻玫【摘要】目的研究生長抑素類似物奧曲肽對(duì)卵巢癌細(xì)胞SK-V-3增殖和凋亡的作用。方法將奧曲肽濃度分別為1.563、3.125、6.25、12.5、25、50gL-1作用于卵巢癌細(xì)胞，用TT法檢測細(xì)胞活性，同時(shí)通過碘化丙啶PI染色，采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡比率。結(jié)果奧曲肽對(duì)SK-V-3細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng)具有劑量依賴性特點(diǎn)，并能誘導(dǎo)SK-V-3細(xì)胞凋亡。結(jié)論奧曲肽對(duì)SK-V-3細(xì)胞增殖具有重要調(diào)控作用，生長抑素類似物可促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞凋亡。【關(guān)鍵詞】生長抑素類似物卵巢癌細(xì)胞奧曲肽細(xì)胞凋亡【Abstrat】Abjetive：Te

2、xplretheeffetfsatstatintretidenprliferatinandapptsisfvariananerell.ethds：SK-V-3ellseretreatedithtretide1.563、3.125、6.25、12.5、25、50gL-1respetively.TheeffetsftretidenprlifieratinfSK-V-3ellsereassessedbyTTassay.ellapptsisalsasdetetedbyflytetry.Results：tretideinhibitedtheprliferatinfSK-V-3ellsindse-depe

3、ndentanners，andinduedellapptsis.nlusins：SatstatinreeptrplaysaniprtantrleinregulatingprliferatinfSK-V-3ells，andsatstatinanindueellapptsis.【Keyrds】SatstatinanalguevariananerelltretideApptsis化療已成為治療卵巢癌的主要方法，目前國內(nèi)、外所使用的藥物包括鉑類、紫杉醇和其他二線化療藥物，盡管這些藥物對(duì)治療有一定的療效，但紫杉醇價(jià)格極其昂貴，其他藥物很容易耐藥，因此尋找效果好、副作用小的化療藥物變得非常重要。奧曲肽是一

4、種生長抑素類似物，近年來有研究人員將其用于消化道類癌癥的治療，對(duì)初發(fā)、復(fù)發(fā)病例均有一定療效。本研究以卵巢癌細(xì)胞株SK-V-3為研究對(duì)象，觀察奧曲肽對(duì)卵巢癌細(xì)胞生長的抑制作用并對(duì)其相關(guān)機(jī)制進(jìn)展討論，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)參考。1材料與方法1.1試劑善寧醋酸奧曲肽注射液，0.1g/1l/支，進(jìn)口藥品注冊(cè)證號(hào)：H20220555，諾華制藥消費(fèi)，批號(hào)：50076；四甲基偶氮唑鹽TT，購自siga公司；碘化丙啶PI，購自上海華舜生物工程。1.2細(xì)胞株及培養(yǎng)人卵巢癌細(xì)胞株SK-V-3購自中國科學(xué)院腫瘤研究所。于37、5%2飽和濕度培養(yǎng)，培養(yǎng)基為含10%胎牛血清HylneLabratrEisIn.提供，優(yōu)等，批

5、號(hào)：A15818的DEInvitrgen.提供，批號(hào)：1290007，0.25%胰蛋白酶上海華美生物公司消化傳代。1.3TT法檢測細(xì)胞活性將濃度為5104個(gè)/l卵巢癌細(xì)胞SK-V-3，接種于96孔平底培養(yǎng)板中，每孔100l，培養(yǎng)24h后，再分別設(shè)空白對(duì)照組和不同濃度藥物組1.563、3.125、6.25、12.5、25、50gL-1，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。置37，體積分?jǐn)?shù)為52培養(yǎng)24h，于完畢前4小時(shí)參加TT20l/孔，4h后棄上清液，參加二甲基亞砜DS100l/孔，振蕩10in左右，置酶標(biāo)儀測定D值，波長為450n。按以下公式計(jì)算細(xì)胞抑制率，評(píng)價(jià)藥物對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖的抑制作用。細(xì)胞抑制率%=正常

6、對(duì)照組平均D值-實(shí)驗(yàn)組平均D值/正常對(duì)照組平均D值100%1.4PI染色法檢測細(xì)胞凋亡搜集經(jīng)1.563、3.125、6.25、12.5、25、50gL-1奧曲肽處理24h的SK-V-3細(xì)胞，經(jīng)0.25%胰蛋白酶消化5in，1500rp離心3in，搜集細(xì)胞于1.5lEP管中，用PBS洗3次后3500rp離心5in；再用200lPBS重懸細(xì)胞，邊渦漩振蕩邊滴加70%預(yù)冷4乙醇，共加1l，振蕩均勻后于4過夜。3500rp離心5in，棄固定液。每個(gè)樣品用500lPBS重懸細(xì)胞，3500rp離心5in，洗滌2次。棄上清液，用200lPBS重懸細(xì)胞，吹打均勻，每個(gè)樣品加800lPI染液，4染色30in。最

7、后，用400目尼龍網(wǎng)將細(xì)胞懸液過濾至流式細(xì)胞管中，上機(jī)檢測，用ELLQUEST軟件分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以xs表示，結(jié)果經(jīng)irrsftExel2000進(jìn)展統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，并進(jìn)展TTEST分析，t值法比擬組間差異的顯著性。2結(jié)果2.1奧曲肽對(duì)SK-V-3細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)TT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，奧曲肽對(duì)SK-V-3細(xì)胞增殖的抑制作用具有劑量相關(guān)的特點(diǎn)，當(dāng)奧曲肽濃度12.5gL-1時(shí)，對(duì)SK-V-3細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)明顯。2.2奧曲肽對(duì)SK-V-3細(xì)胞形態(tài)投射電鏡觀察結(jié)果鏡下可見SK-V-3細(xì)胞的核更大，細(xì)胞呈現(xiàn)橢圓形，核仁多個(gè)且明晰，核內(nèi)染色質(zhì)均勻，線粒體多呈現(xiàn)長條形，內(nèi)峭排列規(guī)那么明晰。

8、奧曲肽50g/L處理24h后，可見大量有膜空泡，核內(nèi)容物變淡，但胞膜及核膜完好；奧曲肽25g/L處理細(xì)胞24h后，溶酶體增多，細(xì)胞腫脹，線粒體溶解，胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)大量有膜空泡，核基質(zhì)密度下降。2.3奧曲肽誘導(dǎo)SK-V-3細(xì)胞凋亡流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，以1.563、3.125、6.25、12.5、25、50g?L-1奧曲肽處理SK-V-3細(xì)胞24h后，各組凋亡細(xì)胞所占比例顯著高于對(duì)照組，說明奧曲肽可誘導(dǎo)SK-V-3細(xì)胞凋亡。而且奧曲肽促進(jìn)SK-V-3細(xì)胞凋亡作用明顯具有劑量相關(guān)的特點(diǎn)，隨劑量的升高，各組凋亡細(xì)胞所占比例也逐漸升高，與TT結(jié)果相一致。3討論生長抑素satstatin，S

9、ST是一種環(huán)狀多肽類激素，具有強(qiáng)大的生物學(xué)活性，在多種內(nèi)分泌和外分泌激素分泌過程中發(fā)揮重要作用。其生物學(xué)活性是通過靶細(xì)胞膜上的生長抑素受體satstatinreeptr，SSTR介導(dǎo)的，其中以其亞型2SSTR2的作用最為重要1，2。目前已經(jīng)發(fā)如今多種腫瘤細(xì)胞中有SSTR2的表達(dá)3，體內(nèi)外研究均發(fā)現(xiàn)生長抑素類似物satstatinanalgue，SSA可通過SSTR抑制腫瘤細(xì)胞增殖，并發(fā)生細(xì)胞凋亡。本實(shí)驗(yàn)通過TT法檢測了生長抑素類似物奧曲肽對(duì)人卵巢癌細(xì)胞SK-V-3的增殖抑制率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)奧曲肽對(duì)人卵巢癌細(xì)胞的增殖具有抑制作用，并且抑制率具有明顯的濃度依賴性。同時(shí)，流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示奧曲肽對(duì)S

10、K-V-3細(xì)胞有誘導(dǎo)凋亡的作用，經(jīng)相關(guān)分析顯示藥物濃度與凋亡比率呈正相關(guān)。奧曲肽對(duì)SSTR2具有很強(qiáng)的親和力，已被用作垂體腺瘤、肝癌等癌癥的治療藥物，并且獲得顯著療效，臨床觀察腫瘤明顯縮小，其作用機(jī)理可能與其通過SSTR誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡有關(guān)。這與本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，通過本研究的初步觀察，提示生長抑素類似物通過促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞凋亡而對(duì)人卵巢癌細(xì)胞的增殖產(chǎn)生抑制作用。進(jìn)一步研究生長抑素類似物對(duì)卵巢癌增殖與凋亡的調(diào)控作用及機(jī)制，可為治療卵巢癌提供新的途徑與思路。參考文獻(xiàn)1BrazeauP,Vale,BurgusR,etal.Hypthalaiplypeptidethatinhibitstheseretinfiunreativepituitarygrthhrne.Siene,1973,179:77-79.2andarinL,StennerD,Blanhard,etal.Seletiveeffetsfsatstatin-14,-25and-28ninvitrinsulinandgluagnseretin.Nature,1981,291:76-77.3REisineT,BellGI.leularbilgyfsatstatinreeptrs.EndrRev,1995,16:427-442.4ReubiJ,LandltA.Highdensityfsatstatinreeptrsinpitu