雙特異性抗體制備方法進(jìn)展

1、雙特異性抗體制備方法進(jìn)展雙特異性抗體制備方法進(jìn)展目 錄CONTENT01 | 背景02 | 化學(xué)交聯(lián)03 | 雜交瘤細(xì)胞技術(shù)04 | 基因工程制備05 | 總結(jié)與展望06 | 參考文獻(xiàn)目CONTENT01 | 背景0 1PART ONE背景0PART ONE背景背景4雙特異性抗體： 含有2種特異性抗原結(jié)合位點(diǎn)的人工抗體，能在靶細(xì)胞和功能分子(細(xì)胞)之間架起橋梁，激發(fā)具有導(dǎo)向性的免疫反應(yīng)。背景6雙特異性抗體：背景5雙特異性抗體的優(yōu)勢(shì)改變特異性免疫應(yīng)答細(xì)胞的方向到癌細(xì)胞，增強(qiáng)癌細(xì)胞殺傷能力通過和兩個(gè)不同的細(xì)胞表面抗原結(jié)合，有效增強(qiáng)癌細(xì)胞靶向性降低治療費(fèi)用同時(shí)阻斷兩個(gè)不同的通路背景7雙特異性抗體的優(yōu)

2、勢(shì)改變特異性免疫應(yīng)答細(xì)胞的方向到癌細(xì)胞背景630年前2009年2014年Medarex公司開發(fā)出雙特異性抗體，并在2001年進(jìn)行三期臨床試驗(yàn)Trion公司研發(fā)的Catumaxomab被歐盟批準(zhǔn)上市用于治療Ep CAM陽(yáng)性腫瘤所引起的惡性腹水安進(jìn)公司研發(fā)的Blinatumomab獲得FDA 的批準(zhǔn)，用于治療費(fèi)城染色體陰性的復(fù)發(fā)性或難治性B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病開發(fā)進(jìn)展背景830年前2009年2014年Medarex公司開發(fā)出雙背景7背景90 2PART ONE化學(xué)交聯(lián)0PART ONE化學(xué)交聯(lián)化學(xué)交聯(lián)9Chemical cross-linking（化學(xué)交聯(lián)）缺點(diǎn)：純化困難、穩(wěn)定性差、活性降低制備

3、方法：分別連接交聯(lián)劑脫鹽混合，化學(xué)結(jié)合化學(xué)交聯(lián)11Chemical cross-linking（化化學(xué)交聯(lián)10Controlled Fab-arm exchange (cFAE) 可控制的Fab臂交換技術(shù)制備方法：制備CH3突變的母抗體鉸鏈區(qū)鏈間二硫鍵還原制備半抗體重新形成二硫鍵不同半抗體結(jié)合優(yōu)點(diǎn)：可大規(guī)模生產(chǎn)（1500L）化學(xué)交聯(lián)12Controlled Fab-arm excha0 3PART ONE雜交瘤細(xì)胞技術(shù)0PART ONE雜交瘤細(xì)胞技術(shù)雜交瘤細(xì)胞技術(shù)12Quadroma technology雜交瘤細(xì)胞技術(shù)制備方法： 融合兩個(gè)分別表達(dá)不同抗體的雜交瘤細(xì)胞，兩株異源抗體輕重鏈隨機(jī)裝配

4、，形成混合雙功能抗體。重鏈的正確裝配：CH3區(qū)小氨基酸突變?yōu)榇蟀被酑H3區(qū)大氨基酸突變?yōu)樾“被嵬钩龅蔫瓢枷莸木孰s交瘤細(xì)胞技術(shù)14Quadroma technology制備雜交瘤細(xì)胞技術(shù)13優(yōu)點(diǎn)：保留了Fc段的生物學(xué)功能缺點(diǎn)：輕鏈也會(huì)隨機(jī)裝配，這是我們不想要的兩類抗體使用序列相同的輕鏈，這種輕鏈可以和兩類抗原結(jié)合雙細(xì)胞系分別表達(dá)半抗體結(jié)合crossmab技術(shù)（把重鏈CH1區(qū)和輕鏈CL區(qū)交換）和knobs-into-holes技術(shù)在VH-VL和CH1-CL的內(nèi)表面引入新的突變避免輕鏈的隨機(jī)裝配的方法雜交瘤細(xì)胞技術(shù)15優(yōu)點(diǎn)：保留了Fc段的生物學(xué)功能兩類抗體使用雜交瘤細(xì)胞技術(shù)14主要藥物Catum

5、axomab第一個(gè)上市的雙功能抗體（2009）靶標(biāo)：CD3+EpCAM適應(yīng)癥：惡性腹水FBTA05：CD3+CD20，臨床1-2期Ertumaxomab：CD3+Her2，臨床2期雜交瘤細(xì)胞技術(shù)16主要藥物CatumaxomabFBTA050 4PART ONE基因工程制備0PART ONE基因工程制備基因工程制備16Genetic engineering of BsAbs基因工程制備雙特異性抗體 利用分子克隆技術(shù)，可將一個(gè)抗體的部分/全部恒定區(qū)用于構(gòu)建雙特異性抗體。Ig-G樣形式：指BsAbs中含有Fc段（保留了Fc介 導(dǎo)的效應(yīng)器功能） 非Ig-G樣形式：不含F(xiàn)c段基因工程制備18Genet

6、ic engineering o基因工程制備17Ig-G樣形式（含F(xiàn)c段）：基因工程制備19Ig-G樣形式（含F(xiàn)c段）：基因工程制備18非Ig-G樣形式 優(yōu)勢(shì)： 抗體尺寸更小 具有更好的腫瘤組織滲透性 每個(gè)親本單克隆抗體的可變區(qū)和接頭均可被克隆和連接。基因工程制備20非Ig-G樣形式 優(yōu)勢(shì)： 基因工程制備19非Ig-G樣形式串聯(lián)scFv 通過額外的肽接頭如甘氨酸-絲氨酸重復(fù)基序連接的兩scFv片段最常用的結(jié)構(gòu)域順序： VLA-linker1-VHA-linker2-VHB-linker3-VLB 接頭1和接頭3的長(zhǎng)度決定了scFv的聚合情況 接頭2決定了兩個(gè)scFv之間的運(yùn)動(dòng)靈活性 （VL和V

7、H衍生自單鏈抗體片段; A和B代表親本單克隆抗體A和B）基因工程制備21非Ig-G樣形式串聯(lián)scFv 基因工程制備20非Ig-G樣形式Blinatumonmab 已上市，最著名的雙特異性T細(xì)胞銜接器（BiTEs）之一在大腸桿菌中不易表達(dá)，但在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)良好靶點(diǎn)：CD3+CD19兩個(gè)較長(zhǎng)的接頭被置于輕鏈和重鏈之間，短接頭以串聯(lián)形式橋接兩個(gè)scFv短鏈接頭阻止VL和VH結(jié)構(gòu)域的鏈內(nèi)而非鏈間配對(duì)，長(zhǎng)接頭允許抗原結(jié)合位點(diǎn)自由旋轉(zhuǎn)基因工程制備22非Ig-G樣形式Blinatumonm基因工程制備21四價(jià)串聯(lián)雙抗體（Tand-Abs） 含有連接在單個(gè)多肽鏈中的兩對(duì)VL和VH結(jié)構(gòu)域在表達(dá)時(shí)，兩種多肽

8、產(chǎn)物以頭對(duì)尾的方式二聚化，形成具有大分子量（105kDa）的同源二聚體藥物AFM11是一種靶向CD19和CD3的四價(jià)雙特異性TandAb，其在小鼠靜脈內(nèi)給藥后的半衰期為18.4至22.9小時(shí)（期臨床試驗(yàn)中）AFM13（進(jìn)入期臨床試驗(yàn)）基因工程制備23四價(jià)串聯(lián)雙抗體（Tand-Abs）含有連接在基因工程制備22半衰期延長(zhǎng)策略多聚化與PEG鏈共軛連接（PEG化）與人血清白蛋白（HSA）融合與Fc片段融合基因工程制備24半衰期延長(zhǎng)策略多聚化0 5PART ONE結(jié)論與展望0PART ONE結(jié)論與展望結(jié)論與展望24雙特異性抗體的發(fā)展仍面臨著許多問題穩(wěn)定性低低表達(dá)率免疫原性生物利用度低 除了化學(xué)交聯(lián)、雜

9、交瘤細(xì)胞技術(shù)、基因工程之外，還可以利用分子克隆技術(shù)、抗體工程等，對(duì)雙特異性抗體的選擇性進(jìn)行改造，提高生物活性和臨床療效。結(jié)論與展望26雙特異性抗體的發(fā)展仍面臨著許多問題穩(wěn)定性低 0 6PART ONE部分參考文獻(xiàn)0PART ONE部分參考文獻(xiàn)部分參考文獻(xiàn)261Zhang X, Yang Y, Fan D, Xiong D. Bispecific antibodies and their applications. Exp Hematol Oncol. 2017;6:12.2Kontermann RE, Brinkmann U. Bispecifc antibodies. Drug Discov

10、 Today. 2015;20:83847.3Chames P, Baty D. Bispecifc antibodies for cancer therapy: the light at the end of the tunnel? mAbs. 2009;1:6,53947.4Fan G, Wang Z, Hao M, Li J. Bispecifc antibodies and their applications. J Hematol Oncol. 2015. doi:10.1186/s13045-015-0227-0.5Zhang X, et al. Bispecific antibodies and their applications. Exp Hematol Oncol. 2017;6:12.6Kontermann RE, et al. Bispecifc antibodies. Drug Discov Today. 2015;20:83847.7 Yankelevich M, et al. Anti-CD3 anti-GD2 bispecifc antibody redirects T-cell cytol