腦寧康顆粒對腦缺血預(yù)適應(yīng)大鼠HSP70表達(dá)影響的實驗研究

1、腦寧康顆粒對腦缺血預(yù)順應(yīng)大鼠HSP70表達(dá)影響的實行研究【摘要】目的不雅察中藥腦寧康(NNK)顆粒對經(jīng)腦缺血預(yù)順應(yīng)(IP)處置懲罰后大鼠HSP70表達(dá)的影響。要領(lǐng)按照Pulsinelli四管法及Liu法別離制作大鼠IP及腦缺血再灌注(IR)模子，應(yīng)用免疫組化SP法作HSP70染色，比力NNK顆粒對IP和IR兩種模子大鼠HSP70表達(dá)的影響，并以阿斯匹林作比擬。效果NNK在兩模子中均可使HSP70表達(dá)顯著加強(qiáng)(P0.050.01),且效應(yīng)明顯高于阿斯匹林(P0.05)，但兩模子之間比力無明顯性差異。且NNK可以或許延緩HSP70表達(dá)強(qiáng)度的削弱。結(jié)論NNK顆粒通過加強(qiáng)IP和缺血狀態(tài)中HSP70表達(dá)

2、，飾演了強(qiáng)化IP及藥物預(yù)順應(yīng)腳色，旨在增長腦神經(jīng)細(xì)胞對缺血、缺氧的耐受力，并通過對HSP70的滋擾，得到不變神經(jīng)細(xì)胞布局，維護(hù)其正常成效的藥理效應(yīng)?！娟P(guān)鍵詞】腦寧康顆粒；缺血預(yù)順應(yīng)；腦；HSP70Keyrds：NNKpartile;Isheiprenditining;Brain;HSP70比年來，腦缺血預(yù)順應(yīng)(isheiprenditining,IP)歷程中產(chǎn)生的機(jī)體緊張庇護(hù)因子熱休克卵白Heatshkprtein,HSP已引起普及存眷。對團(tuán)體和離體經(jīng)應(yīng)激作用后的細(xì)胞或構(gòu)造的研究表白1，當(dāng)細(xì)胞受到損傷時，均陪同HSP含量增長。因此，普及以為HSP的成效重要是在于不變細(xì)胞的布局，從而維護(hù)細(xì)胞的正

3、常生理成效。在腦缺血損傷范疇的研究表現(xiàn)，HSP具有庇護(hù)腦細(xì)胞，增長腦細(xì)胞對缺氧的耐受性，顯著低落神經(jīng)元對谷氨酸毒性作用的敏感性2，從而對抗神經(jīng)元進(jìn)一步致死性損傷的作用。本研究擬不雅察HSP70在IP和腦缺血再灌注(isheireperfusin,IR)中的表達(dá)及腦寧康(NNK)對其的影響。現(xiàn)報道如下。1質(zhì)料與儀器1.1儀器多成效顯微鏡(LYPUS-269865,JAPAN)，電鏡JE-1200EX,JAPAN，醫(yī)用低溫冷凍冰箱SANY,JAPAN，電子蠕動泵LDB-。1.2試劑與藥品鼠抗HSP70單克隆抗體Nearkerrpratin,USA，鏈卵白素生物素結(jié)合辣根過氧化酶，1300zyed,

4、USA)，染色試劑盒Labvisinrpratin,USA。NNK顆粒由山東中醫(yī)藥大學(xué)隸屬制劑廠消費(fèi)，生藥含量為5g/g；腸溶阿斯匹林(ASP)為沈陽克達(dá)藥廠消費(fèi)，批號970208。1.3動物雄性istar大鼠48只，均勻體質(zhì)量(30030)g，由山東醫(yī)科大學(xué)實行動物中央提供。2要領(lǐng)2.1模子制備與取材2.2分組istar鼠48只，用隨機(jī)數(shù)字表法將動物隨機(jī)分為模子組(DEL)、假手術(shù)組(F)、ASP組和NNK組,每組均按IP要領(lǐng)和IR要領(lǐng)制模,共8組,每組6只。2.3模子制備2.4HSP70檢測要領(lǐng)按照匡式法，構(gòu)造標(biāo)本冰凍切片上行30一連冠狀切片。室溫下，2TritinX-100液中孵育40i

5、n，切片浸入鼠抗HSP70單克隆抗體孵育48h，4。抗體用1血明凈卵白磷酸緩沖液配制，經(jīng)PBS洗滌10in,浸入生物素結(jié)合兔抗鼠IgG，室溫下孵育2h，再經(jīng)PBS洗滌，切片浸入鏈卵白素-生物素結(jié)合辣根過氧化酶孵育2h(室溫)。PBS充實洗滌，加12滴DAB色素于2H126梯度脫水，透明，D-P-X封片備測。3效果NNK對HSP70表達(dá)的影響見表1。由表1可見：皮層布局中，再灌注24h、假手術(shù)組未見顯著HSP70陽性信號；IP模子組及再灌注模子組均可見HSP70陽性信號，但前者陽性細(xì)胞數(shù)目及染色深度顯著強(qiáng)于后者P0.05，提示經(jīng)IP處置懲罰后，HSP70表達(dá)顯著增長。以NNK及阿斯匹林滋擾后創(chuàng)造

6、，NNK在兩模子組中均可使HSP70表達(dá)顯著加強(qiáng)P0.050.01，且效應(yīng)明顯高于阿斯匹林P0.05，提示NNK能積極滋擾HSP70誘導(dǎo)步伐。模子間比力，NNK對HSP70的影響雖以IP模子稍強(qiáng)，但無顯著差異P0.05。提示NNK既大概在IP歷程中有誘導(dǎo)HSP70表達(dá)效應(yīng)，亦大概在缺血再灌注損傷中飾演藥物預(yù)順應(yīng)腳色。從差異時期HSP70表達(dá)強(qiáng)度闡發(fā)中創(chuàng)造與24h時比擬力，72h時相其表達(dá)強(qiáng)度顯著削弱P0.05，但NNK可以延緩這一歷程P0.05。提示NNK顆粒在誘導(dǎo)和調(diào)控HSP70表達(dá)方面均有藥理效應(yīng)。表1NNK顆粒對模子HSP70表達(dá)的影響4討論熱休克征象是Ritssa在不雅察果蠅幼蟲唾液腺

7、細(xì)胞染色體在過熱歷程中形態(tài)變革時起首創(chuàng)造的。厥后，Tissieres等創(chuàng)造，染色體的膨突與細(xì)胞中的卵白質(zhì)合成有關(guān)，故稱其為熱休克卵白HeatShkprtEin,HSP。生物體受外界情況的應(yīng)激作用誘導(dǎo)產(chǎn)生的HSP組分較為龐大，不但能產(chǎn)生分子量相差很大的HSP，也能產(chǎn)生幾個在分子量上非常靠近的HSP。哺乳動物以HSP70家屬為主。熱應(yīng)激、缺血/缺氧、氧自由基等均是緊張的誘導(dǎo)因素。比年來，HSP在缺血預(yù)順應(yīng)IP歷程中的腦庇護(hù)作用已經(jīng)被普及成認(rèn)，之前大多以為其庇護(hù)大腦的機(jī)制是由于HSP70的朋友作用。而最新報道以為，HSP70也可以或許調(diào)治炎癥反響，從而表現(xiàn)出其腦庇護(hù)的作用。本研究效果表白，別離經(jīng)IP

8、處置懲罰及缺血6in再灌注24h后，兩模子組istar鼠大腦皮層布局中均有HSP70表達(dá)，而從前者為強(qiáng)。NNK顆粒滋擾后，兩組HSP70表達(dá)顯著加強(qiáng)，提示NNK既有大概誘導(dǎo)HSP70表達(dá)效應(yīng)，同時也大概在缺血再灌注損傷中發(fā)揮藥物預(yù)順應(yīng)作用。差異時相HSP70表達(dá)強(qiáng)度闡發(fā)表現(xiàn)，缺血72hHSP70表達(dá)強(qiáng)度顯著弱于24h時相，而NNK可使72h時相HSP70削弱幅度變小，提示該藥在調(diào)控HSP70表達(dá)方面有藥理效應(yīng)。由于NNK滋擾了IP歷程中HSP70的表達(dá)，使得在缺血狀態(tài)中HSP70對皮層神經(jīng)細(xì)胞的庇護(hù)作用加強(qiáng)，因此得到了較優(yōu)的治療效應(yīng)。綜上所述，NNK豈論在IP狀態(tài)中按捺或缺血再灌注狀態(tài)中均能使HSP70表達(dá)加強(qiáng)，飾演了強(qiáng)化IP及藥物預(yù)順應(yīng)腳色，旨在增長腦神經(jīng)細(xì)胞對缺血、缺氧的耐受力，并通過對HSP70的滋擾，得到不變神經(jīng)細(xì)胞布局，維護(hù)其正常成效的藥理效應(yīng)。【參考文獻(xiàn)】1任惠民,周兆年.不變細(xì)胞布局的分子底子:熱休克卵白J.生理科學(xué)希望，1994,251:11.2RdrfG,KrshetzJ,BnveutreJV.HeatshkPrtestsulturedneurusfrgluta