慢性高尿酸血癥大鼠模型建立方法的探討

1、慢性高尿酸血癥大鼠模型建立方法的討論慢性高尿酸血癥大鼠模型建立方法的討論【關(guān)鍵詞】高尿酸血癥;腺嘌呤;酵母;尿酸酶抑制劑;模型,動(dòng)物;大鼠,istar【摘要】目的討論慢性高尿酸血癥大鼠模型的建立方法。方法雌性istar大鼠40只，隨機(jī)分為對(duì)照組和模型組,模型組飼以高酵母飼料并給予腺嘌呤100g/(kgd)灌胃,定期監(jiān)測(cè)大鼠血尿酸程度，血尿酸程度開場(chǎng)下降時(shí)，改良造模方法，模型組飼以高酵母飼料，并以腺嘌呤溶液50g/(kgd)灌胃，同時(shí)給予氧嗪酸鉀乳懸液100g/(kgd)分2次皮下注射，以維持大鼠高尿酸血病癥態(tài)。結(jié)果實(shí)驗(yàn)第14天始,模型組大鼠血尿酸程度均顯著高于對(duì)照組(t=5.4388.404,

2、p0.05)。結(jié)論以高酵母飼料加腺嘌呤灌胃并適時(shí)給予氧嗪酸鉀乳懸液皮下注射所復(fù)制的大鼠慢性高尿酸血癥模型，具有血尿酸值高、維持時(shí)間長(zhǎng)、模型穩(wěn)定的特點(diǎn)?！娟P(guān)鍵詞】高尿酸血癥;腺嘌呤;酵母;尿酸酶抑制劑;模型,動(dòng)物;大鼠,istarkeyrdshyperurieia;adenine;yeast;uriaseinhibitr;del,anial;rat,istar1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物1.2實(shí)驗(yàn)儀器和試劑1.3各種灌胃液及高酵母飼料的制備1.4實(shí)驗(yàn)分組及方法大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7d后，隨機(jī)分為對(duì)照組20只、模型組20只。根據(jù)文獻(xiàn)7的方法，模型組飼以質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.10的高酵母飼料，并以100g/(kgd)

3、腺嘌呤溶液灌胃，以制備高尿酸血癥模型;對(duì)照組飼以普通大鼠顆粒飼料，并給予同體積蒸餾水灌胃。每周監(jiān)測(cè)血尿酸程度變化，第7周血尿酸程度開場(chǎng)下降時(shí)，改良造模方法，模型組飼以質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.10的高酵母飼料，并以50g/(kgd)腺嘌呤溶液灌胃，同時(shí)給予氧嗪酸鉀乳懸液100g/(kgd)分2次皮下注射，以維持大鼠高尿酸血病癥態(tài);對(duì)照組飼以普通大鼠顆粒飼料，并給予同體積蒸餾水灌胃，繼續(xù)監(jiān)測(cè)血尿酸程度。1.5實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測(cè)別離出血清，在全自動(dòng)生化分析儀上測(cè)定血尿酸(sua)、肌酐(r)、尿素氮(bun)、三酰甘油(tg)、總膽固醇(t)程度。1.6統(tǒng)計(jì)方法2結(jié)果2.1兩組一般狀態(tài)比擬隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng)，模型組飲

4、水量逐漸增加，最高飲水量達(dá)對(duì)照組的23倍;同時(shí)體質(zhì)量逐漸下降，尿量逐漸增多，體毛枯槁無(wú)光澤、精神委靡、活動(dòng)減少等，嚴(yán)重者出現(xiàn)肌肉震顫、抽搐，衰竭而死亡，本組共死亡6只大鼠。對(duì)照組飲水量、尿量、體質(zhì)量無(wú)明顯變化，反響機(jī)敏，活動(dòng)正常，體毛有光澤，無(wú)大鼠死亡。2.2兩組血生化程度比擬2周后模型組大鼠血清sua程度明顯升高，與對(duì)照組相比差異均有顯著意義(t=5.4388.404，p0.05)。見(jiàn)表1。模型組大鼠3、10周的血清bun、r、t程度與對(duì)照組相比差異有顯著性(t=2.53012.232,p0.05)。見(jiàn)表2、3。2.3尿液變化模型組3周后尿量逐漸增加，腎臟排泄尿酸功能減退，尿尿酸減少，同時(shí)尿

5、密度減低，5周時(shí)與對(duì)照組相比差異均有顯著性(t=5.55318.296，p0.05)。見(jiàn)表4。表1兩組大鼠不同時(shí)期血尿酸程度比擬表2兩組大鼠3周時(shí)血生化程度比擬表3兩組大鼠10周時(shí)血生化程度比擬表4高嘌呤飲食5周后大鼠24h尿量、飲水量、尿密度及尿尿酸的比擬(s)組別24h尿量(v/l)24h飲水量(v/l)尿密度尿尿酸2.4病理變化對(duì)照組大鼠腎臟外觀無(wú)腫脹，色紅有光澤，包膜易于剝離，腎小球、腎小管形態(tài)正常，皮質(zhì)、髓質(zhì)分界清楚。模型組大鼠腎臟體積增大，兩腎呈灰白色，外表呈顆粒狀，腎包膜與腎本質(zhì)粘連不易剝離，切面皮髓質(zhì)分界不清。光鏡檢查：對(duì)照組腎小球囊腔內(nèi)未見(jiàn)異常物質(zhì),腎曲小管、集合管亦未見(jiàn)異常

6、病變。模型組部分腎小球萎縮，數(shù)量減少，腎小管濁腫,腎小管及間質(zhì)部位有較多的尿酸鹽結(jié)晶沉積,結(jié)晶周圍可見(jiàn)異物巨細(xì)胞反響，間質(zhì)有灶性淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，個(gè)別區(qū)域有灶性纖維化;高倍鏡下觀察腎小管間質(zhì)部位,可見(jiàn)尿酸鹽結(jié)晶呈針狀、雙折光放射形排列。3討論尿酸是人類嘌呤代謝的終產(chǎn)物，其血中濃度受遺傳和環(huán)境兩種因素的影響。原發(fā)性痛風(fēng)的病因,除1%2%的病人與先天性酶缺陷有關(guān)外,多數(shù)病因不明,但臨床可見(jiàn)有相當(dāng)一部分因進(jìn)食高嘌呤飲食而誘發(fā)。高嘌呤飲食可使sua濃度升高,甚至到達(dá)相當(dāng)于痛風(fēng)病人的程度9。所以,高尿酸血癥是痛風(fēng)重要的生化根底,痛風(fēng)危險(xiǎn)性與sua程度有明顯的相關(guān)性1。近年來(lái)，高尿酸血癥和痛風(fēng)的發(fā)病率逐漸上升

7、，發(fā)病年齡提早，對(duì)其病因?qū)W、流行病學(xué)、分子遺傳學(xué)的研究漸成為熱點(diǎn)。臨床治療正成為大家所關(guān)注的問(wèn)題。高尿酸血癥動(dòng)物模型的建立，為開發(fā)研究驗(yàn)證治療藥物提供了一種有效途徑，而至今國(guó)內(nèi)外尚沒(méi)有關(guān)于慢性高尿酸血癥模型制備的統(tǒng)一報(bào)道，有待于進(jìn)一步討論。目前關(guān)于高尿酸血癥動(dòng)物模型的制備，國(guó)內(nèi)外尚未有明確統(tǒng)一的方法，其中氧嗪酸鉀作為體內(nèi)尿酸酶的有效抑制劑用于制備高尿酸血癥動(dòng)物模型的方法因?yàn)殪`敏、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好，在國(guó)際上已普遍得到采用，但一般為短期造模。本實(shí)驗(yàn)選用雌性istar大鼠，結(jié)合應(yīng)用酵母飼料飼喂、腺嘌呤灌胃和尿酸酶抑制劑皮下注射制備慢性高尿酸血癥模型,觀察sua程度及腎功能變化。實(shí)驗(yàn)第14天始,模型組s

8、ua程度均顯著高于對(duì)照組,提示高尿酸血癥模型制備成功。同時(shí),模型組r、bun程度亦高于對(duì)照組(p0.05)。實(shí)驗(yàn)第5周,腎臟切片光鏡下可見(jiàn)腎小管濁腫,腎小管及間質(zhì)部位有尿酸鹽結(jié)晶沉積,間質(zhì)有出血及大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),所有這些病理特征與臨床上高尿酸血癥所致痛風(fēng)性腎病較為相似。本實(shí)驗(yàn)結(jié)合應(yīng)用酵母飼料飼喂、腺嘌呤灌胃和尿酸酶抑制劑皮下注射，可以使模型組sua程度明顯升高且維持超過(guò)12周，可以成功制備大鼠慢性高尿酸血癥動(dòng)物模型,結(jié)合使用尿酸酶抑制劑前后模型組sua比擬無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,高尿酸血癥模型較穩(wěn)定。此外，模型組大鼠t明顯高于對(duì)照組，這與臨床上高尿酸血癥和痛風(fēng)病人易合并脂代謝紊亂相符合。應(yīng)該成認(rèn),目前尚無(wú)理想的動(dòng)物模型問(wèn)世。本實(shí)驗(yàn)結(jié)合應(yīng)用幾種模型,在時(shí)效性、穩(wěn)定性方面有所改善，但仍存在缺乏。人體產(chǎn)生的尿酸約有2/3經(jīng)腎臟隨尿液排除,因此,高尿酸血癥必然影響到腎功能的減退10。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M大鼠出現(xiàn)尿酸鹽腎臟沉積現(xiàn)象，導(dǎo)致腎臟排泄尿酸功能減退，尿尿酸減少以及尿量增多、尿密度減低，結(jié)合腎臟免疫組化染色光鏡下腎小