病原微生物評(píng)價(jià)報(bào)告

1、（此文檔為word格式，下載后您可任意編輯修改?。┎≡⑸镲L(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告模板i、生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估依據(jù)1）病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例2）實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求3）人間傳染的病原微生物名錄4） WHO實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊(cè)2、生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估要素1）病原微生物特征；2）病原微生物相關(guān)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)；3）實(shí)驗(yàn)活動(dòng)人員；4）實(shí)驗(yàn)活動(dòng)的設(shè)施、設(shè)備和環(huán)境；5）風(fēng)險(xiǎn)認(rèn)定和評(píng)估結(jié)論。3生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)施病原微生物特征的評(píng)估一般生物學(xué)特性：病原微生物起源、基因組及編碼、產(chǎn)物形態(tài)特征、培養(yǎng)特性、細(xì)菌或病毒屬別 和型別內(nèi)容或技術(shù)鑒定。2）致病性：臨床癥狀、潛伏期、病程、感染劑量、入侵部位、宿主類型、否產(chǎn)生毒素等。3）感染途徑：呼

2、吸道、消化道、血液、媒介、皮膚感染等。4）環(huán)境中的穩(wěn)定性：是指其抵抗外界環(huán)境的存活能力，不同的微生物的穩(wěn)定性不同，對(duì)病原微生物 的穩(wěn)定性評(píng)估除考慮其在自然界中的穩(wěn)定性外，還應(yīng)考慮其對(duì)物理因素與化學(xué)消毒劑的敏感性。5）致病性和感染劑量：不同病原的致病性不同，即使同類病原不同菌（毒）株也有不同強(qiáng)度的致病力；另微生物的致病性與被感染者的免疫狀態(tài)、易感性有關(guān)；暴露后果取決于病原微生物的致病性和機(jī)體的抵抗力；不同屬、種、亞種、型的病原微生物，甚至不同株的病原微生物，其致病性各異；還取決于所感染病原微生物的劑量，當(dāng)大量病原微生物侵襲人體時(shí)，潛伏期一般較短，而病情則較為嚴(yán) 重；不同個(gè)體被傳染后，可產(chǎn)生各種不

3、同的結(jié)局。6）傳播途徑：傳播方式包括呼吸道傳播、通過水和食物等消化道傳播、接觸傳播、血液傳播、母嬰 垂直傳播、媒介傳播等；傳播結(jié)果包括一種病原可有多種傳播途徑和多種病原可以引起相同的癥狀。7）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究、實(shí)驗(yàn)室感染。8）有效的預(yù)防和治療措施：有效的藥物、有效疫苗、疾病監(jiān)測(cè)手段、有效的預(yù)防控制措施手段。病原微生物實(shí)驗(yàn)活動(dòng)的評(píng)估1）實(shí)驗(yàn)活動(dòng)：是指實(shí)驗(yàn)室從事與人病原微生物的菌（毒）種、樣本有關(guān)的研究、教學(xué)培訓(xùn)、檢測(cè)等 活動(dòng)。2）實(shí)驗(yàn)活動(dòng)的類型包括：標(biāo)本或樣品處理、離心、勻漿、超聲、移液操作、銳器的使用、生物安全 柜使用、醫(yī)療廢物消毒或高壓滅菌處理等。3）實(shí)驗(yàn)活動(dòng)風(fēng)險(xiǎn)影響因素：3a.氣溶膠產(chǎn)生：離心

4、、旋轉(zhuǎn)、勻漿、接種環(huán)等。b.潛在傷害：注射器等銳器、酒精燈、玻璃器皿等。c.標(biāo)本的濃縮：來自臨床、現(xiàn)場(chǎng)、培養(yǎng)、濃縮等。d.毒株和細(xì)胞：野毒、減毒、疫苗株、毒素產(chǎn)生等。e.操作指導(dǎo)書。4）病原微生物動(dòng)物實(shí)驗(yàn)風(fēng)險(xiǎn)因素a.標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理程序。b.化學(xué)消毒劑選擇、配置和使用。c.物理消毒設(shè)備的使用和維護(hù)。d.各種實(shí)驗(yàn)材料、器具，尤其是銳器處理。e.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及其排泄物處理。5）廢棄物處理風(fēng)險(xiǎn)影響因素:a.標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理程序。b.化學(xué)消毒劑選擇、配置和使用。c.物理消毒設(shè)備的使用和維護(hù)。d.各種實(shí)驗(yàn)材料、器具，尤其是銳器處理。e.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及其排泄物處理。實(shí)驗(yàn)活動(dòng)人員要求評(píng)估1）健康

5、狀況和健康歷史、耐藥和過敏。2）人員資質(zhì)和心里素質(zhì)。3）生物安全知識(shí)。4）微生物學(xué)專業(yè)知識(shí)。5）操作設(shè)施設(shè)備技能。6）免疫狀況。7）培訓(xùn)狀況。8）應(yīng)急事件處理能力。設(shè)施、環(huán)境和設(shè)備因素要求評(píng)估1）生物安全實(shí)驗(yàn)室相應(yīng)等級(jí)的設(shè)施。2）實(shí)驗(yàn)室生物安全的設(shè)備。3）實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)相關(guān)設(shè)備。4）應(yīng)急設(shè)施。5）設(shè)施設(shè)備管理、維護(hù)、校準(zhǔn)和檢驗(yàn)。風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)論（降低風(fēng)險(xiǎn)的措施）：1）病原微生物風(fēng)險(xiǎn)分類2）實(shí)驗(yàn)活動(dòng)與相應(yīng)的設(shè)施設(shè)備要求3）個(gè)人防護(hù)裝備要求4）人員生物安全和專業(yè)技術(shù)資質(zhì)要求5）人員健康和素質(zhì)要求6）預(yù)防和治療措施要求7）菌（毒）種和實(shí)驗(yàn)活動(dòng)等風(fēng)險(xiǎn)管理要求8）應(yīng)急預(yù)案和措施要求4、生物安全委員會(huì)負(fù)責(zé)審核病原

6、微生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告的適宜性與科學(xué)性，并做出評(píng)估結(jié)論。生物因子生物危害評(píng)估報(bào)告模板*菌危害評(píng)估報(bào)告一、危害程度分類（一）分類等級(jí)（二）不同實(shí)驗(yàn)操作生物安全實(shí)驗(yàn)室級(jí)別要求二、背景資料（一）一般生物學(xué)特性.形態(tài)染色.培養(yǎng)特性（二）在外界環(huán)境的穩(wěn)定性.在自然環(huán)境中的穩(wěn)定性與對(duì)溫度的敏感性.對(duì)日光與紫外線的敏感性.對(duì)化學(xué)因子的敏感性（三）致病性和感染數(shù)量（四）傳播途徑及暴露的后果.傳播途徑.暴露后后果（五）*菌的宿主范圍（六）*菌的預(yù)防、診斷和治療.預(yù)防.診斷.治療三、實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)活動(dòng)及其危險(xiǎn)性與預(yù)防措施（一）實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)活動(dòng)背景資料.實(shí)驗(yàn)活動(dòng)內(nèi)容.實(shí)驗(yàn)涉及的*菌菌毒種背景資料.實(shí)驗(yàn)室*菌感染動(dòng)物與培養(yǎng)物最

7、高存量（二）可能造成不良后果的因素與預(yù)防措施.實(shí)驗(yàn)樣品的接收與開啟擬采取防護(hù)措施：.實(shí)驗(yàn)樣品涂片擬采取防護(hù)措施：. *菌接種培養(yǎng)擬采取防護(hù)措施：. *菌培養(yǎng)物與動(dòng)物器官細(xì)菌再分離樣品制備擬采取防護(hù)措施：.實(shí)驗(yàn)樣品的研磨. *菌的攻擊擬采取防護(hù)措施：.感染動(dòng)物的飼養(yǎng).感染動(dòng)物的解剖.動(dòng)物血清標(biāo)本與未經(jīng)滅活組織標(biāo)本采集.病理觀察用組織標(biāo)本的采集.實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備12實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的病原微生物潛伏感染.培養(yǎng)物與實(shí)驗(yàn)廢棄物銷毀.室內(nèi)空氣、實(shí)驗(yàn)用品以及操作臺(tái)面污染.菌種以及培養(yǎng)物保藏（三）實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)活動(dòng)危害評(píng)估四、工作人員素質(zhì)五、評(píng)估結(jié)論附表*菌實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)活動(dòng)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估*實(shí)驗(yàn)室工作人員個(gè)人素質(zhì)評(píng)價(jià)表金黃色葡萄球菌的

8、生物危害評(píng)估報(bào)告一、金黃色葡萄球菌的傳播與致病金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在，在空氣、水、灰塵及人和動(dòng)物的排泄物中都可 找到。因而，食品受其污染的機(jī)會(huì)很多。金黃色葡萄球菌腸毒素是個(gè)世界性衛(wèi)生問題， 在美國(guó)由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒占整個(gè)細(xì)菌性食物中毒的33%，加拿大則更多，占45%,我國(guó)每年發(fā)生的此類中毒事件也非常多。金黃色葡萄球菌的流行病學(xué)一般有如下特點(diǎn)：季節(jié)分布，多見于春夏季；中毒食品種 類多，如奶、肉、蛋、魚及其制品。此外，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒 事件也有報(bào)道；上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率 83% ,所以人畜化膿性感染部位常成為污 染源。一般說，金黃色葡萄球菌可

9、通過以下途徑污染食品：食品加工人員、炊事員或銷售人 員帶菌，造成食品污染；食品在加工前本身帶菌，或在加工過程中受到了污染，產(chǎn)生了 腸毒素，引起食物中毒；熟食制品包裝不嚴(yán)，運(yùn)輸過程受到污染；奶?；蓟撔匀橄傺?或禽畜局部化膿時(shí)，對(duì)肉體其他部位的污染。而腸毒素形成條件包括：存放溫度，在37c內(nèi)，溫度越高，產(chǎn)毒時(shí)間越短；存放地點(diǎn), 通風(fēng)不良氧分壓低易形成腸毒素；食物種類，含蛋白質(zhì)豐富，水分多，同時(shí)含一定量淀 粉的食物，腸毒素易生成。金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，可引起局部化膿感染，也可引起 肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。葡萄球菌性菌血癥可發(fā)生于任何與血管內(nèi)

10、導(dǎo)管或其他異物有關(guān)的局限性葡萄球菌膿月中 或感染，它是嚴(yán)重?zé)齻∪怂劳龅某Ｒ娫?。持續(xù)性發(fā)熱常見 ，而且可伴有休克。葡萄球菌性心內(nèi)膜炎特別好發(fā)于靜脈注射給藥者和裝有人工心臟瓣膜的病人。突然出 現(xiàn)心臟雜音，膿毒性栓子和其他經(jīng)典體征便可作出可疑診斷，確診需依據(jù)超聲心動(dòng)圖和血 培養(yǎng)。葡萄球菌性骨髓炎主要見于兒童，可引起寒戰(zhàn)，發(fā)熱和受累骨疼痛，繼之出現(xiàn)紅月中。關(guān)節(jié) 周圍感染常引起關(guān)節(jié)積液，提示為化膿性關(guān)節(jié)炎而不是骨髓炎。白細(xì)胞計(jì)數(shù)常15000/屋并且血培養(yǎng)常陽(yáng)性。X線變化在1014日內(nèi)不明顯，骨質(zhì)疏松和骨皮質(zhì)反應(yīng)甚至更長(zhǎng)時(shí)間 仍不能測(cè)出，而放射性核素骨掃描則常能較早出現(xiàn)異?！，F(xiàn)在葡萄球菌性小腸結(jié)腸炎很

11、罕見，但若住院病人出現(xiàn)發(fā)熱，腸梗阻，腹痛和腹脹，低血 壓或腹瀉，特別是新近作過腹部手術(shù)或接受過抗生素者，可提示本病。若糞便鏡檢發(fā)現(xiàn)大片 的嗜中性白細(xì)胞和革蘭氏陽(yáng)性球菌，則可能作出診斷，但必須排除產(chǎn)毒性艱難梭狀芽胞桿 菌感染，這是抗生素相關(guān)性結(jié)腸炎最常見的原因。金黃色葡萄球菌的致病力強(qiáng)弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶：a.溶血毒素：外毒素，分a、0、6四種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；b.殺白細(xì)胞素：可破壞人的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；c.血漿凝固酶：當(dāng)金黃色葡萄球菌侵入人體時(shí)，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細(xì)胞的吞噬作 用。葡萄球菌形成的感染易局部化

12、與此酶有關(guān)；d.脫氧核糖核酸酶：金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的脫氧核糖核酸酶能耐受高溫，可用來作為依據(jù)鑒定金黃色葡萄球菌；e.腸毒素：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生數(shù)種引起急性胃腸炎的蛋白質(zhì)性腸毒素，分為A、B、C、D、E及F五種血清型。腸毒素可耐受100 C煮沸30分鐘而不被破壞。它引起的食物中毒癥狀是 嘔吐和腹瀉。止匕外，金黃色葡萄球菌還產(chǎn)生溶表皮素、明膠酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶、金黃色葡萄球菌的生物學(xué)特性 典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑 0.8 左右，顯微鏡下呈單個(gè)、成雙以及排列成葡 萄用狀。金黃色葡萄球菌屬于葡萄球菌屬，無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜，革蘭氏染色 陽(yáng)性衰老、死亡和被白細(xì)胞吞噬后的菌體革蘭染色

13、呈陰性。金黃色葡萄球菌營(yíng)養(yǎng)要求不 高，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，需氧或兼性厭氧，最適生長(zhǎng)溫度 3537 C、最適生長(zhǎng) pH7.47.6 0金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在 10-15%NaCl肉湯中生長(zhǎng)。可分解葡萄糖、麥 芽糖、乳糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅反應(yīng)陽(yáng)性， VP反應(yīng)弱陽(yáng)性。許多菌株可分解精 氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抵抗力，對(duì)磺胺類藥物敏感性低，但對(duì)青霉素、紅霉素等高 度敏感。三、金黃色葡萄球菌的檢測(cè)與診斷.標(biāo)本采集 采自不同感染部位的各種標(biāo)本，包括血液、腦脊液、穿刺液；痰液、膿液、 創(chuàng)傷分泌物、尿液、糞便和嘔吐物等。.直接涂片鏡檢直接涂片檢查在

14、正常情況下呈無菌狀態(tài)的體液標(biāo)本如血液、腦脊液、穿刺液等，若有檢出革蘭氏陽(yáng)性，顯微鏡下呈葡萄狀排列、無芽胞、莢膜，直徑 0.5-1 rn 的球菌。即具有重要的臨床價(jià)值。.分離培養(yǎng)可以選用普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板、血平板和高鹽甘露醇平板，血平板用葡萄糖肉湯增菌培養(yǎng)基。該菌在普通肉湯中呈均勻迅速混濁生長(zhǎng)；若接種于瓊脂平板上35 c過夜后可形成直徑約23mm的厚菌落、濕潤(rùn)有光澤、呈金黃色不透明圓形凸起。若接種于血平板，菌落周圍可形成明顯的透明的 0-溶血環(huán)。在高甘露醇平板上金黃色葡萄球菌生 成淡橙黃色菌落，以此可與其他凝固酶陰性的葡萄球菌相鑒別。.鑒別實(shí)驗(yàn)(1)血漿凝固酶試驗(yàn)：血漿凝固酶是金黃色葡萄球菌所產(chǎn)生

15、的，與其致病力有關(guān)的一種 侵襲性酶，其作用是使血漿中的纖維蛋白在菌體表面沉積和凝固以阻礙吞噬細(xì)胞的吞噬。 血漿凝固酶分為結(jié)合型和游離型。前者結(jié)合在細(xì)菌的細(xì)胞壁上，能直接作用于血漿中的 纖維蛋白原，使之轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，環(huán)繞菌體而形成凝塊。而游離型血漿凝固酶則在產(chǎn) 生后被分泌到菌體外，不能直接作用于纖維蛋白原，但可以激活血漿凝血酶原，使之轉(zhuǎn) 化成凝血酶，后者再作用于纖維蛋白原使其轉(zhuǎn)化為纖維蛋白。具體的測(cè)量方法也因此分 為玻片法和試管法兩種。玻片法：將待試菌落乳化于玻片上的鹽水中，經(jīng) 1020s證實(shí)無自凝后，用接種環(huán)取人或 兔血漿一環(huán)，與乳化菌液混合，出現(xiàn)凝集者為陽(yáng)性，另設(shè)生理鹽水為陰性對(duì)照。試管法

16、：吸取0.5mL兔血漿與0.5mL金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯24小時(shí)培養(yǎng)物充分混勻, 置37c培養(yǎng)，每隔半小時(shí)觀察一次，連續(xù)觀察 6小時(shí)，出現(xiàn)凝固，即將小試管傾斜或倒 置時(shí)，內(nèi)容物不流動(dòng)，判為陽(yáng)性。（2）耐熱核酸酶試驗(yàn)：將24小時(shí)肉湯培養(yǎng)物沸水浴處理15min,用接種環(huán)劃線刺種于 甲苯胺蘭-DNA平板，35c培養(yǎng)24小時(shí)，在刺種線周圍出現(xiàn)淡粉色者為陽(yáng)性。本試驗(yàn)金 黃色葡萄球菌為陽(yáng)性。（3）甘露醇發(fā)酵實(shí)驗(yàn)金黃色葡萄球菌可發(fā)酵甘露醇。4） Staphaurex膠乳凝集實(shí)驗(yàn)是鑒定金黃色葡萄球菌的一種快速、簡(jiǎn)便的商品化直接 凝集試驗(yàn)。其基本原理是在紙片上滴加包被有纖維蛋白原和IgG抗體的聚苯乙烯膠乳，然

17、后用接種環(huán)挑取待鑒定菌株的新鮮培養(yǎng)物加入混勻，若出現(xiàn)凝集塊現(xiàn)象即為陽(yáng)性。.生化鑒定 如上述，注意與其他凝固酶陽(yáng)性的葡萄球菌的鑒別要點(diǎn)：PYR （叱咯烷酮-伊蔡基酰胺試驗(yàn)陰性；VP試驗(yàn)陽(yáng)性；鳥氨酸脫竣酶試驗(yàn)陰性。.免疫學(xué)方法用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和對(duì)流免疫電泳方法可檢測(cè)金葡菌的磷壁酸抗體。.分子生物學(xué)方法包括PFGE脈沖場(chǎng)凝膠電泳以及酶切圖譜分析等。四、金黃色葡萄球菌的防治及生物安全防護(hù)、細(xì)菌的防治 金黃色葡萄球菌的控制主要包括:1）防止金黃色葡萄球菌污染食品，防止帶菌人群對(duì)各種食物的污染：定期對(duì)生產(chǎn)加工人 員進(jìn)行健康檢查，患局部化膿性感染（如疥瘡、手指化膿等）、上呼吸道感染（如鼻竇 炎、化膿性肺炎

18、、口腔疾病等）的人員要暫時(shí)停止其工作或調(diào)換崗位。防止金黃色葡萄 球菌對(duì)奶及其制品的污染：如牛奶廠要定期檢查奶牛的乳房，不能擠用患化膿性乳腺炎 的牛奶；奶擠出后，要迅速冷至-10C以下，以防毒素生成、細(xì)菌繁殖。奶制品要以消毒 牛奶為原料，注意低溫保存。對(duì)肉制品加工廠，患局部化膿感染的禽、畜尸體應(yīng)除去病 變部位，經(jīng)高溫或其他適當(dāng)方式處理后進(jìn)行加工生產(chǎn)。2）防止金黃色葡萄球菌腸毒素的生成 應(yīng)在低溫和通風(fēng)良好的條件下貯藏食物，以防腸 毒素形成；在氣溫高的春夏季，食物置冷藏或通風(fēng)陰涼地方也不應(yīng)超過6小時(shí)，并且食用前要徹底加熱。3）無菌措施（如檢查病人前后徹底洗手和消毒合用的器械）至關(guān)重要。已被感染的病人

19、應(yīng) 與其他易感病人隔離，患有活動(dòng)性葡萄球菌感染，即使是局部性的感染（如痔）的醫(yī)護(hù)人員， 在其感染治愈前不得接觸病人或器械。無癥狀的鼻腔帶菌者，除非所帶菌株十分危險(xiǎn)或被 懷疑為暴發(fā)流行的傳染源，一般不必隔離。治療包括膿月中引流，抗生素（重癥病人需腸外給藥）和全身支持療法。培養(yǎng)標(biāo)本應(yīng)在開始治 療前或更換抗生素之前獲取。抗生素的選擇和劑量取決于感染的部位，疾病的嚴(yán)重程度和細(xì)菌對(duì)藥物的敏感性。醫(yī)院獲得的葡萄球菌和大多數(shù)社區(qū)獲得的菌株，通常對(duì)青霉素G,氨葦青霉素和抗假單胞 菌青霉素有耐藥性。大多數(shù)菌株對(duì)耐青霉素酶青霉素（甲氧苯青霉素，苯甲異嗯口坐青霉素乙氧蔡青霉素，鄰氯青霉素,雙氯青霉素），頭抱菌素（頭

20、抱菌素I ,頭抱口坐咻，頭抱菌素IV，頭 抱拉定，頭抱羥哇，頭抱西丁和第三代頭抱菌素），卡巴培南類（亞胺培南，美羅匹寧）,慶大霉 素，萬古霉素，替考拉寧，林可霉素和氯林可霉素，是敏感的。雖然頭抱菌素和萬古霉素都有效，但通常首選一種耐青霉素酶的青霉素。很多葡萄球菌菌 株對(duì)紅霉素，四環(huán)素類藥物，氨基糖甘類，桿菌肽和氯霉素也敏感，但因有更好更安全的藥可 用，故很少使用氯霉素和桿菌肽。目前耐甲氧苯青霉素金黃色葡萄球菌（MRSA）菌株日益增多，這種細(xì)菌雖可從社區(qū)獲得感 染的病人中分離得到，但多數(shù)是從感染的靜脈吸毒者和重癥監(jiān)護(hù)室的病人中分離獲得。MRSA菌株通常對(duì)耐 伊內(nèi)酰胺酶青霉素，頭抱菌素和卡巴培南類

21、有耐藥性。這些細(xì)菌對(duì)氨 基糖甘類和大環(huán)內(nèi)酯類（紅霉素，克拉霉素，阿齊霉素，林可霉素和氯林可霉素）的耐藥性也 很普遍。雖然亞胺培南-西拉司丁或唾諾酮類對(duì)某些MRSA感染是有效的，但靜脈注射萬古霉素為 首選。腎功能正常成人的通用劑量是每 6小時(shí)靜脈注射500mg或每12小時(shí)靜滴注 1000mg,至少在1小時(shí)內(nèi)滴完。腎功能受損時(shí)，劑量應(yīng)根據(jù)血清中藥物的濃度加以調(diào)整， 療程視感染部位及病人的反應(yīng)而定，但一般為24周。某些嚴(yán)重的或有并發(fā)癥的感染，可 能需要靜脈給藥治療68周，然后再口服治療1個(gè)月或更長(zhǎng)時(shí)間?？捎糜谔娲f古霉素治療MRSA感染的藥物有：TMP-SMZ,成人劑量為TMP1015mg /（kg

22、.d）力口 SMZ5075mg/（kg.d）,分劑口服或腸外給藥，每次間隔8小時(shí)或12小時(shí)，連續(xù) 24周；禾I福平（600mg/d） 口服或腸外給藥；腸外給亞胺培南-西拉司?。?00mg每6小 時(shí)1次）或美羅匹寧（0.51.0g每8小時(shí)1次。但利福平不要單獨(dú)應(yīng)用，因?yàn)榧?xì)菌很易產(chǎn)生 抗藥性。在治療異物相關(guān)性MRSA感染或漿膜腔MRSA感染時(shí)，利福平和氨基糖昔類是有 用的輔助藥物。鄰氯青霉素，雙氯青霉素，TMP-SMZ,環(huán)丙沙星及局部用莫匹羅星 （mupirocin）可用于治療MRSA帶菌狀態(tài)，但MRSA對(duì)這些藥物可產(chǎn)生抗藥性?？谷f古霉素 的腸球菌（VRE）菌株的流行日益增加，這種菌株在實(shí)驗(yàn)室中可

23、將引起抗萬古霉素的基因 轉(zhuǎn)為凝固酶陽(yáng)性的金黃色葡萄球菌菌株，而在感染的病人中則轉(zhuǎn)變?yōu)槟堂戈幮云咸亚?菌分離株。可是這些葡萄球菌很容易對(duì)治療這類感染的其他藥物產(chǎn)生抗藥性。桿菌肽，若有的話，可試用于治療抗萬古霉素的葡萄球菌感染。 對(duì)這些病人應(yīng)嚴(yán)格隔離，以防他們的細(xì) 菌傳播。二、細(xì)菌的生物安全防護(hù)根據(jù)病原微生物生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例中的有關(guān)規(guī)定，人間傳播的微生物名錄（待頒布）金黃色葡萄球菌屬于三類，BSL-2。相關(guān)的防護(hù)事宜包括：（1）操作要求1、實(shí)驗(yàn)時(shí)，未經(jīng)實(shí)驗(yàn)室主任同意，限制或禁止進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。2、不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外專用 櫥柜或冰箱中。3、

24、所有的操作過程應(yīng)盡量細(xì)心，避免產(chǎn)生和濺出氣溶膠4、對(duì)于污染的銳器，必須時(shí)刻保持高度的警惕，包括針、注射器、玻片、加樣器等。5、注射和吸取感染材料時(shí)，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器（即注射器和針頭 是一體的）。用過的一次性針頭必須彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注 射器上去掉，或在丟棄前進(jìn)行人工處理，要不將之小心放入不會(huì)被刺穿的、用于收集廢 棄銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅(jiān)壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好高壓 殺菌06、打碎的器皿不能直接用手處理，必須用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或銀子。 盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的容器在倒掉前，應(yīng)按照相關(guān)的規(guī)定進(jìn)行消毒。7、所有的

25、培養(yǎng)物、儲(chǔ)存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行的消毒方法進(jìn)行消 毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近實(shí)驗(yàn)室消毒的物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)，密封運(yùn)出實(shí) 驗(yàn)室。離開該系統(tǒng)進(jìn)行消毒的物料，在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝，具包裝應(yīng)符合有關(guān)的法規(guī)。8、濺出或偶然事件中，明顯暴露于傳染源時(shí)，要立即向?qū)嶒?yàn)室主任報(bào)告。進(jìn)行適當(dāng)?shù)尼t(yī) 學(xué)評(píng)估、觀察、治療，保留書面記錄。9、按日常程序、在有關(guān)傳染源的工作結(jié)束后、尤其是傳染源濺出或?yàn)⒊龊?、或受到其?傳染源污染后，實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和工作臺(tái)面應(yīng)當(dāng)使用有效的消毒劑消毒。污染的設(shè)備在送去 修理、維護(hù)前，要按照相關(guān)的規(guī)定消毒；在離開設(shè)施轉(zhuǎn)移前，要按照相關(guān)的規(guī)定打包運(yùn) 輸。（2）安全設(shè)備1、正確使用

26、和保養(yǎng)生物安全柜、最好是二級(jí)生物安全柜、或其他合適的人員防護(hù)設(shè)施、 或物理遏制裝置。2、確定可能形成傳染性氣溶膠或?yàn)R出物的實(shí)驗(yàn)過程，包括離心、研磨、勻漿、劇烈震蕩 或混勻、超聲波破裂、開啟裝有傳染源的容器、采集感染標(biāo)本等。3、涉及高濃度或大體積的傳染源時(shí)，若選用密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩的離心機(jī)，若轉(zhuǎn)頭或安 全罩僅在生物安全柜中打開，則可在開放實(shí)驗(yàn)室內(nèi)離心。4、當(dāng)必須在生物安全柜外處理標(biāo)本時(shí)，需采取面部保護(hù)措施（跟鏡、口罩、面罩、或其 他防濺裝置），以免傳染源或其他有害物濺或?yàn)⒌矫嫔稀?、在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，必須使用專用的防護(hù)性外衣、大褂、罩衫或制服。人員到非實(shí)驗(yàn)室區(qū)域 時(shí)，防護(hù)服必須留在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。防護(hù)服可以

27、在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)處理，也可以在洗衣房中洗滌， 但不能帶回家中。6、可能接觸潛在傳染源、被污染的表面或設(shè)備時(shí)，要戴手套。一次性手套不用清洗、不 能重復(fù)使用，不能用于接觸 潔凈”的表面（鍵盤、電話等），也不應(yīng)當(dāng)戴著到實(shí)驗(yàn)室外 要備有帶滑石粉的乳膠手套。脫掉手套后，要洗手。淋病奈瑟菌的生物危害評(píng)估報(bào)告、淋病奈瑟菌的傳播與致病 淋病奈瑟菌又稱淋球菌，是淋病的病原菌，人類是本菌的唯一天然宿主和傳染源。淋病 是淋菌性尿道炎的簡(jiǎn)稱，是由淋球菌引起的泌尿生殖系統(tǒng)化膿性炎性疾病，它是人類很 古老的，也是當(dāng)前世界范圍內(nèi)流行非常廣泛的一種性傳播疾病。淋病患者是主要傳染源，有癥狀或無癥狀的患者均可通過性接觸傳播，其中輕癥或

28、無癥 狀的淋病患者是重要的傳染源。其傳播途徑主要包括性交傳染，還可通過非性接觸傳播， 如通過接觸患者分泌物污染的用品(衣褲、床上用品、毛巾、浴盆、馬桶等)間接感染； 孕婦淋病患者當(dāng)羊膜破裂，可繼發(fā)羊膜腔內(nèi)及胎兒感染；新生兒經(jīng)過患淋病的母體產(chǎn)道 時(shí)常可引起淋菌性眼炎；另外尚可通過醫(yī)護(hù)人員的手和器具引起醫(yī)源性感染。本病最初多侵犯尿道、宮頸內(nèi)膜，繼而可波及前列腺、精囊、副睪、子宮內(nèi)膜及輸卵管。有時(shí)肛門、直腸、咽粘膜、眼結(jié)膜也可受染。尚可經(jīng)血行播散引起菌血癥、關(guān)節(jié)炎、心 內(nèi)膜炎及腦膜炎，可引起死亡或不育、不孕、失明及尿道狹窄等后果。由于本病潛伏期 短、傳染性強(qiáng)、后果嚴(yán)重，因此它是我國(guó)當(dāng)前重點(diǎn)防治的性病

29、之一。二、淋病奈瑟菌的生物學(xué)特性淋病奈瑟菌屬奈瑟菌屬，鏡下呈腎形，常成雙排列，鄰近面扁平或稍凹，像兩瓣黃豆對(duì) 在一起，大小0.6N”106/克時(shí)常可導(dǎo)致食物中毒。蠟樣芽胞桿菌食物中 毒在臨床上可分為嘔吐型和腹瀉型兩類。嘔吐型的潛伏期為 0.5-6小時(shí)，中毒癥狀以惡 心、嘔吐為主，偶而有腹痙攣或腹瀉等癥狀，病程不超過 24小時(shí)，這種類型的癥狀類似 于由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒。腹瀉型的潛伏期為 6-15小時(shí)，癥狀以水瀉、腹痙 攣、腹痛為主，有時(shí)會(huì)有惡心等癥狀，病程約 24小時(shí)，這種類型的癥狀類似于產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的食物中毒。嚴(yán)重者還可導(dǎo)致敗血癥。蠟樣芽胞桿菌引起食物中毒是由于該菌可產(chǎn)生腸毒素

30、。它產(chǎn)生兩種性質(zhì)不同的代謝物， 引起腹瀉型綜合癥的是一種大分子量蛋白；而引起嘔吐型綜合癥的被認(rèn)為是一種小分子 量、熱穩(wěn)定的多肽。致嘔吐型綜合癥的腸毒素至今尚未提純，致腹瀉型綜合癥的腸毒素 已提純，其純化的腸毒素分子量為 55-6.0 X103。致腹瀉的腸毒素能使小白鼠致死。 二、細(xì)菌的生物學(xué)特性蠟樣芽胞桿菌分類為芽胞桿菌屬的第I群，該群有22個(gè)種。根據(jù)營(yíng)養(yǎng)型菌細(xì)胞的寬度分 為兩類，蠟樣芽胞桿菌、蕈狀芽胞桿菌、蘇云金芽胞桿菌、炭疽芽胞桿菌和巨大芽胞桿 菌屬大細(xì)胞菌種蠟樣芽胞桿菌為革蘭氏陽(yáng)性大桿菌，大小為 1-1.3 C-5m,需氧或兼性需氧，生長(zhǎng) 6h 即可形成原形芽胞，芽胞位于菌體的中心或次末

31、端不突出菌體，菌體兩端較平整，多數(shù) 呈鏈狀排列，與炭疽桿菌相似。引起食物中毒的菌株多為周鞭毛，有動(dòng)力無莢膜。它的 生長(zhǎng)溫度為25-37 C,最佳溫度30-35 C。在肉湯中生長(zhǎng)混濁有菌膜或壁環(huán)，振搖易乳 化。在普通瓊脂上生成的菌落較大，直徑 3-10mm ,灰白色、不透明，表面粗糙似毛玻 璃狀或融蠟狀，邊緣常呈擴(kuò)展?fàn)罟识妹?。偶有產(chǎn)生黃綠色色素，在血瓊脂平板上呈草 綠色溶血。在甘露醇、卵黃多粘菌素（MYP）平板上，呈伊紅粉色菌落。能分解葡萄糖、 麥芽糖、蔗糖、水楊素等，VP實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性，可液化明膠，卵磷脂酶陽(yáng)性，但多次傳代后， 其生化特性?？筛淖?。此外蠟桿芽胞桿菌耐熱，其食物中毒菌株中的游離芽胞能

32、耐受100 c 30分鐘，而干熱滅菌需120 c 60分鐘才能殺死。本菌對(duì)氯霉素、紅霉素和慶大霉素敏感，對(duì)青霉素、磺胺 類和味喃類耐藥。三、細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)室檢查及其它檢查.標(biāo)本收集 采集可疑食物或收集糞便和嘔吐物進(jìn)行直接涂片染色鏡檢和其他操作。.活菌計(jì)數(shù) 無菌操作稱取樣品50g放入滅菌攪拌缸內(nèi)。力口 Butterfield磷酸鹽緩沖稀釋液 450mL,以高速（18.000-21.000rpm ）均質(zhì)2min。用上述1:10稀釋液，連續(xù)稀釋供蠟 樣芽胞桿菌計(jì)數(shù)。移取10mL均質(zhì)樣液（1:10稀釋）加到90mL空白液中，從10-2到 10-6制備一系列稀釋液，充分混勻，并繼續(xù)稀釋直到10-6為止。取樣

33、品的各個(gè)稀釋液（包括1:10） 0.1mL接種2只MYP （甘露醇一卵黃多粘菌素瓊脂）平板，用滅菌玻璃棒 在每只平板表面涂布均勻。將平板置 30c培養(yǎng)24小時(shí)，并檢查菌落周圍有沉淀圈者， 表示產(chǎn)生卵磷脂酶。蠟樣芽胞桿菌菌落通常是粉紅色，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)則更明顯。 如果上述反應(yīng)不清晰，應(yīng)將平板再培養(yǎng) 24小時(shí)后計(jì)數(shù)，從MYP平板上挑取典型菌落5 個(gè)或更多，移種到營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上供蠟樣芽胞桿菌證實(shí)試驗(yàn)用。.MPN技術(shù)被推薦用于食品中低于10個(gè)/g蠟樣芽胞桿菌的檢驗(yàn)。某些不適合用平板計(jì) 數(shù)法的脫水淀粉類食品也可用此法檢驗(yàn)。 在胰酪陳大豆多粘菌素肉湯中接種 3管MPN系 列，10-1、10-2、10-

34、3的稀釋液各接種1mL于3管。將培養(yǎng)管置30c培養(yǎng)482小時(shí)， 檢查生長(zhǎng)密集、典型的蠟樣芽胞桿菌。將陽(yáng)性管培養(yǎng)物劃線接種于MYP平板，于30 c培 養(yǎng)24-48小時(shí)。以下步驟同2。.分離培養(yǎng) 將可疑食物置無菌乳缽中，加適量生理鹽水研磨后，劃線接種于普通瓊脂平 板或血瓊脂平板，若為嘔吐物可直接劃線接種于上述平板，于37 c培養(yǎng)，.若有類似蠟樣芽胞桿菌的菌落出現(xiàn)再進(jìn)一步分離純化以及進(jìn)行生化反應(yīng)。.蠟樣芽胞桿菌的證實(shí)試驗(yàn) 蠟樣芽胞桿菌的分離物應(yīng)符合下述條件：1）革蘭氏陽(yáng)性產(chǎn)芽 胞大桿菌，其芽胞不突出體外；2）在MYP瓊脂上產(chǎn)生卵磷脂酶而不發(fā)酵甘露醇；3）厭 氧培養(yǎng)生長(zhǎng)，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸；4）還原硝酸鹽

35、；5） VP陽(yáng)性；6）分介L(zhǎng)-酪氨酸；7）在 含0.001%溶菌酶的培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)。.蠟樣芽胞桿菌群的鑒別試驗(yàn)要鑒別典型蠟樣芽胞桿菌和蠟樣芽胞桿菌群的其它種還需進(jìn)一步進(jìn)行下述試驗(yàn)：1）動(dòng)力試驗(yàn)；2）根狀生長(zhǎng)試驗(yàn)；3）溶菌活性試驗(yàn)；4）蛋白質(zhì) 毒素結(jié)晶試驗(yàn)：蠟樣芽胞桿菌有動(dòng)力、強(qiáng)溶血、不形成根狀菌落，或不產(chǎn)生蛋白質(zhì)毒素 結(jié)晶。而且蠟樣芽胞桿菌在4C、pH4.3、鹽濃度18%的條件下仍能存活或生長(zhǎng)。通過 高溫殺菌或適當(dāng)?shù)睦洳乜梢钥刂葡灅友堪麠U菌的增殖。.血清學(xué)分型、噬菌體分型。四、細(xì)菌的防治蠟樣芽胞桿菌所引起的食物中毒多因食品在食用前保存溫度較高（20c以上）和放置時(shí)間較長(zhǎng)，故對(duì)中毒的預(yù)防包括：由

36、于蠟樣芽胞桿菌在15c以下不繁殖，剩飯、剩菜應(yīng)放在低溫保存。該菌污染的食品一般無腐敗變質(zhì)的異味，不易被發(fā)覺。因此，剩飯、剩菜 在食用前一定要再加熱。注意食品的貯藏和個(gè)人衛(wèi)生，防止塵土、昆蟲及其他不潔物污 染食品。若一旦發(fā)生了中毒，則立即停止食用可疑污染的食品，多飲水。一般不需要使用抗生素治療。腹瀉較重者可到醫(yī)院就診。五、細(xì)菌的生物安全防護(hù)根據(jù)病原微生物生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例中的有關(guān)規(guī)定，人間傳播的微生物名錄（待頒布）蠟樣芽胞桿菌屬于三類，BSL-2。（1）操作要求1、實(shí)驗(yàn)時(shí)，未經(jīng)實(shí)驗(yàn)室主任同意，限制或禁止進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。2、不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外

37、專用 櫥柜或冰箱中。3、所有的操作過程應(yīng)盡量細(xì)心，避免產(chǎn)生和濺出氣溶膠。4、對(duì)于污染的銳器，必須時(shí)刻保持高度的警惕，包括針、注射器、玻片、加樣器等。5、注射和吸取感染材料時(shí)，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器（即注射器和針頭是一體的）。用過的一次性針頭必須彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注 射器上去掉，或在丟棄前進(jìn)行人工處理，要不將之小心放入不會(huì)被刺穿的、用于收集廢 棄銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅(jiān)壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好高壓 殺菌06、打碎的器皿不能直接用手處理，必須用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或銀子。盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的容器在倒掉前，應(yīng)按照相關(guān)的規(guī)

38、定進(jìn)行消毒。7、所有的培養(yǎng)物、儲(chǔ)存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行的消毒方法進(jìn)行消 毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近實(shí)驗(yàn)室消毒的物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)，密封運(yùn)出實(shí) 驗(yàn)室。離開該系統(tǒng)進(jìn)行消毒的物料，在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝，具包裝應(yīng)符合有關(guān)的法規(guī)。8、濺出或偶然事件中，明顯暴露于傳染源時(shí)，要立即向?qū)嶒?yàn)室主任報(bào)告。進(jìn)行適當(dāng)?shù)尼t(yī)學(xué)評(píng)估、觀察、治療，保留書面記錄。9、按日常程序、在有關(guān)傳染源的工作結(jié)束后、尤其是傳染源濺出或?yàn)⒊龊?、或受到其?傳染源污染后，實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和工作臺(tái)面應(yīng)當(dāng)使用有效的消毒劑消毒。污染的設(shè)備在送去 修理、維護(hù)前，要按照相關(guān)的規(guī)定消毒；在離開設(shè)施轉(zhuǎn)移前，要按照相關(guān)的規(guī)定打包運(yùn) 輸。（2）

39、安全設(shè)備1、正確使用和保養(yǎng)生物安全柜、最好是二級(jí)生物安全柜、或其他合適的人員防護(hù)設(shè)施、 或物理遏制裝置。2、確定可能形成傳染性氣溶膠或?yàn)R出物的實(shí)驗(yàn)過程，包括離心、研磨、勻漿、劇烈震蕩 或混勻、超聲波破裂、開啟裝有傳染源的容器、采集感染標(biāo)本等。3、涉及高濃度或大體積的傳染源時(shí)，若選用密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩的離心機(jī)，若轉(zhuǎn)頭或安 全罩僅在生物安全柜中打開，則可在開放實(shí)驗(yàn)室內(nèi)離心。4、當(dāng)必須在生物安全柜外處理標(biāo)本時(shí)，需采取面部保護(hù)措施（跟鏡、口罩、面罩、或其 他防濺裝置），以免傳染源或其他有害物濺或?yàn)⒌矫嫔稀?、在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，必須使用專用的防護(hù)性外衣、大褂、罩衫或制服。人員到非實(shí)驗(yàn)室區(qū)域 時(shí)，防護(hù)服必須留在

40、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。防護(hù)服可以在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)處理，也可以在洗衣房中洗滌， 但不能帶回家中。6、可能接觸潛在傳染源、被污染的表面或設(shè)備時(shí)，要戴手套。一次性手套不用清洗、不 能重復(fù)使用，不能用于接觸 潔凈”的表面（鍵盤、電話等），也不應(yīng)當(dāng)戴著到實(shí)驗(yàn)室外 要備有帶滑石粉的乳膠手套。脫掉手套后，要洗手。假結(jié)核棒狀桿菌的生物危害評(píng)估報(bào)告一、細(xì)菌的傳播與致病假結(jié)核棒狀桿菌廣泛分布于自然界的水和土壤中， 是一種條件致病菌。主要引起家畜（羊、 馬）的慢性淋巴淋巴管炎，偶爾也會(huì)引起人的淋巴結(jié)炎、肺炎等疾病。二、細(xì)菌的生物學(xué)特性假結(jié)核棒狀桿菌屬于棒狀桿菌屬，是一種兼性厭氧，沒有芽胞、沒有莢膜，抗酸陰性的革蘭陽(yáng)性桿菌。細(xì)菌末端膨

41、大呈棒狀，菌體有時(shí)成單或成雙。有時(shí)菌體染色不均勻呈柵 欄狀排列。它沒有動(dòng)力，但觸酶呈陽(yáng)性、尿素陽(yáng)性。所使用的培養(yǎng)基包括血和亞硫酸鉀，比如 Hoyle亞硫酸鹽培養(yǎng)基是一種很好的選擇性鑒 別培養(yǎng)基。假結(jié)核棒狀桿菌可以在血平板上產(chǎn)生輕微的溶血。三、細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)室檢查及其它檢查.鏡下形態(tài)革蘭染色呈革蘭陽(yáng)性桿菌、多型性、錐形或棒狀的細(xì)菌末端略有彎曲。菌體單個(gè)或成雙，時(shí)常呈“翻。有些菌體染色微弱或不均勻，呈珠狀。.分離培養(yǎng) 血平板皮膚拭子培養(yǎng)：5-10 % CO2 35-37 C 40-48h ;喉拭子培養(yǎng)：厭氧，35-37 C 16-24h ;菌落周圍有微小的B溶血環(huán)；Hoyle亞硫酸鹽培養(yǎng)基：35-37

42、 C 16-48h :灰色/黑色，非常干燥的透明菌落。.生化試驗(yàn)：硝酸鹽 陰性；尿素 陽(yáng)性；. PCR是一種快速的試驗(yàn)，可以在接受到菌株后 3-4小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。.毒素確診試驗(yàn)還要結(jié)合毒素的表型試驗(yàn)。.如果初步試驗(yàn)結(jié)果提示有假結(jié)核棒狀桿菌，需要結(jié)合臨床癥狀考慮結(jié)果。四、細(xì)菌的生物安全防護(hù)根據(jù)病原微生物生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例中的有關(guān)規(guī)定，人間傳播的微生物名錄（待頒布）假結(jié)核棒狀桿菌屬于三類，BSL-2。實(shí)驗(yàn)室在處理過程中可能會(huì)產(chǎn)生氣溶膠，所以懷疑假結(jié)核棒狀桿菌的菌株必須在生物安 全柜內(nèi)處理。對(duì)于尿素試驗(yàn)認(rèn)為使用尿素斜面比使用尿素液體培養(yǎng)基安全。在運(yùn)送時(shí)還應(yīng)當(dāng)遵守郵政局的危險(xiǎn)品運(yùn)送手冊(cè)，如果以

43、上的初步試驗(yàn)提示該菌株是假結(jié)核棒狀桿菌，需立即通知上級(jí)相關(guān)單位，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)室安全手冊(cè)進(jìn)行隔離。志賀氏菌屬的生物危害評(píng)估報(bào)告一、細(xì)菌的傳播與致病志賀菌屬是主要的腸道病原菌之一，也是引起人類細(xì)菌性痢疾的病原體。本屬細(xì)菌分布 于全世界,是炎癥性痢疾的典型病原菌 彳艮多地區(qū)5%10%的腹瀉性疾病是由該菌屬所致。弗氏志賀菌和宋內(nèi)志賀菌比鮑氏志賀菌和毒力特別強(qiáng)的痢疾志賀菌分布更廣。美國(guó)猶他 州所有臨床實(shí)驗(yàn)室工作者志賀菌病的年發(fā)病率為 0.7/1 000,而臨床微生物學(xué)工作者的年 發(fā)病率為5.4/1 000。在英國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室，沙門菌病和志賀菌病的年發(fā)病率分別為0.137/1000和0.322/1 000,大

44、多數(shù)感染者為微生物學(xué)工作者。感染者和恢復(fù)期帶菌者的排泄物是傳染源，經(jīng)糞-口途徑直接傳播，經(jīng)污染的食物或物體可 間接傳播。蒼蠅可作為機(jī)械性媒介，水源性傳播不常見。衛(wèi)生條件差的擁擠人群中最易發(fā) 生流行，流行區(qū)的幼兒志賀菌病特別常見，而成人得病較輕?；謴?fù)期和亞臨床帶菌者是重要傳染源，但真正的長(zhǎng)期帶菌者罕見。感染很少或不誘導(dǎo)產(chǎn)生 免疫性，因此同一菌種的再感染是可能的。志賀菌可穿入低位腸段的粘膜，引起粘液分泌，充血，白細(xì)胞浸潤(rùn)，水月中，并常有表淺粘膜潰 瘍。志賀菌感染相關(guān)的水瀉由內(nèi)毒素介導(dǎo)所致，因這種內(nèi)毒素可引起腸道分泌增多。由志賀菌感染所導(dǎo)致的癥狀包括：（1）急性細(xì)菌性痢疾 經(jīng)潛伏期14日,幼兒的起病

45、突 然，表現(xiàn)為發(fā)熱，煩躁不安，嗜睡，厭食，惡心或嘔吐，腹瀉，腹痛和腹脹以及里急后重。3日內(nèi)大 便中出現(xiàn)血液，膿液和粘液.大便次數(shù)可增加到20次/d,體重下降和失水嚴(yán)重。若不治療， 患兒可在12日內(nèi)死亡；若患兒存活，則在第2周急性癥狀消退.成人可表現(xiàn)為無發(fā)熱的非 血性，非粘液性腹瀉，很少有或完全沒有里急后重.但其最初的癥狀可為發(fā)作性腹絞痛，急于 排便，起初排出成形大便并在排便后可緩解腹痛.以后反復(fù)發(fā)作，并且日趨嚴(yán)重和頻繁.腹瀉變得明顯，系軟便或含有粘液，膿及常 有血液的水瀉。嚴(yán)重的里急后重可造成直腸脫垂和大便失禁。成人患病?？勺杂狠p者48日，重者36周。伴有循環(huán)虛脫的明顯脫水和電解質(zhì)喪失及死亡

46、主要發(fā)生于2歲的嬰兒和衰弱的成人；（2）慢性細(xì)菌性痢疾 主要是因急性菌痢治療不徹底，造成反復(fù)發(fā)作 遷延不愈，病程超過兩個(gè)月以上者；若是有病史、無癥狀，結(jié)腸鏡檢或糞便培養(yǎng)陽(yáng)性者 稱為隱匿型菌痢，在流行病學(xué)上亦具有重要的意義；（3）攜帶者 是指恢復(fù)期帶菌、慢性 帶菌者和健康帶菌者三種類型，尤其是健康帶菌者是主要的傳染源。除此以外，還可發(fā)生繼發(fā)性細(xì)菌感染，特別是衰弱和脫水的病人。嚴(yán)重的粘膜潰瘍可引起 明顯的急性失血.其他并發(fā)癥雖不多見，但可有中毒性神經(jīng)炎，關(guān)節(jié)炎，心肌炎和罕見的腸穿 孔。小兒志賀菌病可并發(fā)溶血性尿毒癥綜合征。本病不會(huì)變成慢性，也不會(huì)成為潰瘍性結(jié)腸炎的病因?qū)W因素。但有HLA-B27基因

47、型的病人在志賀菌病后常常比較容易發(fā)生關(guān)節(jié)炎 或明顯的Re讓er綜合征。二、細(xì)菌的生物學(xué)特性志賀菌（Shigella）隸屬于腸桿菌科，分為A,B,C,D4個(gè)亞群一一A群痢疾志賀菌、B群福 氏志賀菌、C群鮑特志賀菌和D群宋內(nèi)志賀菌，而各亞群又可分各種血清決定型。它們 均為革蘭氏陰性桿菌，菌體短小、無芽胞無鞭毛，有菌毛，在胞質(zhì)中存在著大小兩種質(zhì) 粒，與該菌的侵襲性和耐藥性有關(guān)。志賀菌為兼性厭氧菌，對(duì)理化因素的抵抗力較弱，對(duì)酸敏感，在1%的石炭酸中1530min 可被殺死，因此運(yùn)輸時(shí)必須采用含有緩沖劑的培養(yǎng)基。它們最適的生長(zhǎng)溫度為 37C, pH 為7.27.4,對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求不高，可在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)

48、。在腸道培養(yǎng)基上可形成不發(fā)酵乳糖的無色半透明菌落，而宋內(nèi)志賀菌還常形成粗糙型的菌落，也 因此可發(fā)生S-R變異。志賀菌屬?zèng)]有H抗原，但有O抗原以及部分菌種的K抗原。O抗原可耐熱，100c 60min 不被破壞，它是分類的依據(jù)，具有群特異性以及型特異性兩種抗原。正是依據(jù)O抗原的不同以及生化反應(yīng)的結(jié)果將志賀菌分成了4個(gè)血清群和32個(gè)血清型；而K抗原存在于A群和C群的全部菌型以及B群種的部分菌種中，不耐熱，對(duì)分類無意義，但它的存在將 阻斷O抗原與相應(yīng)抗血清的凝集作用，故可先以100c 60min破壞之。志賀菌的致病因素主要有：.菌毛的侵襲作用；.內(nèi)毒素：各群志賀菌都能形成強(qiáng)烈的內(nèi)毒素，其作用機(jī)制包括：

49、破壞腸粘膜上皮，造成粘膜下層炎癥，并有毛細(xì)血管血栓形成，以致壞死，脫落，形成潰瘍，出現(xiàn)粘液膿血便；使腸壁 通透性增高，促進(jìn)毒素吸收，引起一系列毒血癥的癥狀，如發(fā)熱，神志障礙，甚至中毒性休克； 作用于腸壁植物神經(jīng)，使腸蠕動(dòng)失調(diào)并痙攣，尤以直腸括約肌受累明顯，因而發(fā)生腹痛，腹瀉, 里急后重等癥狀；.外毒素：A群志賀菌I型和II型能產(chǎn)生志賀外毒素（ST）, ST能引起Vero細(xì)胞病變，故也 稱Vero毒素（VT）。ST的組成是由1個(gè)A及5個(gè)B亞單位組成.B亞單位是毒素與靶細(xì)胞 表面糖脂受體結(jié)合的單位；A亞單位鏈為毒性部分能抑制蛋白質(zhì)的合成。ST具有細(xì)胞毒素，腸毒素和神經(jīng)毒素3種生物學(xué)活性：腸毒素性，

50、此毒素有類似 E.coli和霍亂腸毒素的 作用能引起腹瀉與嘔吐；細(xì)胞毒性，它可以阻止小腸上皮細(xì)胞對(duì)糖和氨基酸的吸收；神 經(jīng)毒性，在痢疾志賀菌引起的重癥感染者可作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，造成昏迷或腦膜炎；ST在體外還可加重對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷。ST和內(nèi)毒素的持續(xù)存在的聯(lián)合作用可能與志賀菌感染的溶血性尿毒綜合征等并發(fā)癥有 關(guān)。二、細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)室檢查及其它檢查主要根據(jù)暴露史、臨床特征與實(shí)驗(yàn)室檢查診斷。急性期有發(fā)熱、腹痛、腹瀉、里急后重 及黏液膿血便，左下腹明顯壓痛。糞便鏡檢有多數(shù)白細(xì)胞或膿細(xì)胞及紅細(xì)胞即可診斷。 確診則依賴于糞便培養(yǎng)出痢疾桿菌。.血常規(guī) 急性期白細(xì)胞總數(shù)輕至中度增高，多在（1020） X 1

51、09/L,中性粒細(xì)胞亦增高。.直腸鏡檢查可見粘膜表面彌漫性充血并有大量小潰瘍。可用拭子從潰瘍處取材作涂片檢 查或培養(yǎng)。這些拭子及大便標(biāo)本均應(yīng)立即鏡檢及培養(yǎng)，標(biāo)本接種于腸道桿菌選擇培養(yǎng)基 或鑒別培養(yǎng)基上，常用S-S培養(yǎng)基.37C培養(yǎng)18-24h,取可疑菌落進(jìn)行生化反應(yīng)和血清鑒定， 以確定菌群和菌型；如不能立即培養(yǎng)，可放于30%甘油緩沖鹽水保存液中。.糞便檢查 外觀多為黏液膿血便，無糞質(zhì)。鏡檢有大量膿細(xì)胞或白細(xì)胞及紅細(xì)胞，如有巨噬細(xì)胞有助于診斷。糞便培養(yǎng)病原學(xué)檢查有利于確診，同時(shí)可做藥物敏感試驗(yàn)以指導(dǎo) 臨床合理選用抗菌藥物治療。糞便免疫學(xué)檢查與細(xì)菌培養(yǎng)比較具有早期快速診斷的優(yōu)點(diǎn)， 但由于糞便中抗原

52、成分復(fù)雜，易出現(xiàn)假陽(yáng)性，故目前臨床上尚未廣泛應(yīng)用。.濕片或經(jīng)甲基藍(lán)或賴特染色的涂片可見大片白細(xì)胞，這點(diǎn)可鑒別細(xì)菌性和阿米巴痢疾（因阿米巴可破壞白細(xì)胞）。.毒力t僉Senery毒力試驗(yàn)：將受試菌 37c 18-24h制備菌液（109/ml）接種豚鼠結(jié)膜： 發(fā)生炎癥，則Senery試驗(yàn)陽(yáng)性，說明受試菌有毒力.免疫染色法將糞便與志賀菌抗血清混勻，在顯微鏡觀察有無凝集現(xiàn)象。.免疫熒光菌球檢查法在含有熒光素標(biāo)記的志賀菌屬免疫血清的液體培養(yǎng)基中接種標(biāo)本 ， 培育4-8h后發(fā)現(xiàn)帶有熒光的菌球?yàn)殛?yáng)性。.協(xié)同凝集試驗(yàn)用含有SPA的葡萄球菌標(biāo)記志賀菌屬抗體，測(cè)定病人糞便中或增菌培養(yǎng)液 中細(xì)菌及其可溶性抗原。.PC

53、R法檢測(cè)志賀菌核酸，快速、敏感,可提高 45%志賀菌標(biāo)本的檢出率，目前尚未廣 泛應(yīng)用。.此病還應(yīng)與急性阿米巴痢疾、細(xì)菌性胃腸型食物中毒、其它病原菌引起的腸道感染、 急性壞死性出血性腸炎及腸套疊相鑒別。三、細(xì)菌的防治首先是防治：1早期發(fā)現(xiàn)，早期隔離和早期徹底治療病人外，查出帶菌者2切斷傳染途徑，操作食品前應(yīng)徹底洗手。臟衣和床單應(yīng)放在帶蓋的桶內(nèi)用肥皂水浸泡然 后再煮沸消毒。房屋應(yīng)使用蚊帳紗和屏障。對(duì)病人和帶菌者應(yīng)采取相應(yīng)的隔離措施（特別是對(duì)糞便的隔離）。此外還包括加強(qiáng)水源管理及食品衛(wèi)生監(jiān)督等3 口服菌苗預(yù)防 有鏈霉素依賴（Sd）株及口服重組活菌苗。Sd株口服后，因腸道無鏈霉 素它不生長(zhǎng)也不立即死亡

54、，而產(chǎn)生SIgA,但只對(duì)同型菌的再感染有保護(hù)作用，故使用此菌苗 時(shí)應(yīng)考慮到當(dāng)?shù)爻Ｒ娏餍芯?。重組活菌苗由多個(gè)型別 （或種型）的免疫原組成，具有廣 譜保護(hù)作用，已開始生產(chǎn)在治療方面：.補(bǔ)液療法腹瀉常引起等張性脫水（鹽和水的丟失相等）并伴有代謝性酸中毒和明顯失 鉀.脫水導(dǎo)致的口渴使病人過多的飲水又可引起低張性變化。無腹瀉的痢疾不會(huì)導(dǎo)致過多 失水特別是氣候炎熱地區(qū)的嬰兒，通過出汗和呼吸的失水再加上嚴(yán)重腹瀉，可導(dǎo)致高張性 脫水。過早地應(yīng)用高滲性液體（牛奶，鼻飼、自制電解質(zhì)混合液）可引起高張性損害，包括抽 搐。.抗生素在決定應(yīng)用抗生素時(shí)，應(yīng)考慮到疾病的嚴(yán)重程度，病人的年齡、衛(wèi)生狀況,進(jìn)一步 傳播的可能性

55、和造成細(xì)菌耐抗生素的可能性等因素。此外，早期用適當(dāng)?shù)目晌盏目咕?物治療，可明顯減輕癥狀和減少志賀菌的排出：對(duì)兒童 ，TMP-SMX中的TMP成分4mg/kg 每12小時(shí)1次為首選方案；對(duì)成人,用雙倍加強(qiáng)片（TMP320mg）每12小時(shí)1次。成人還可 用諾氟沙星400mg 口服每日2次或環(huán)丙沙星500mg 口服每日2次。很多志賀菌株可能對(duì) 氨葦青霉素和四環(huán)素耐藥。3.其他治療 熱水袋有助于緩解腹部不適，用可被吸收且起減輕刺激作用的甲基纖維素 制劑對(duì)腹瀉和里急后重起不到任何緩解作用.抗膽堿能藥物和樟腦阿片酊應(yīng)盡可能不用，因?yàn)樗鼈兛梢鹉c道郁滯，延長(zhǎng)發(fā)熱期，并使大使持續(xù)排菌。四、細(xì)菌的生物安全防

56、護(hù)根據(jù)病原微生物生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例中的有關(guān)規(guī)定，人間傳播的微生物名錄（待頒布）志賀菌屬于三類、BSL-2。相關(guān)的防護(hù)事宜包括：（1）操作要求1、實(shí)驗(yàn)時(shí)，未經(jīng)實(shí)驗(yàn)室主任同意，限制或禁止進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。2、不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外專用 櫥柜或冰箱中。3、所有的操作過程應(yīng)盡量細(xì)心，避免產(chǎn)生和濺出氣溶膠。4、對(duì)于污染的銳器，必須時(shí)刻保持高度的警惕，包括針、注射器、玻片、加樣器等。5、注射和吸取感染材料時(shí)，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器（即注射器和針頭 是一體的）。用過的一次性針頭必須彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射 器上去掉，或在丟

57、棄前進(jìn)行人工處理，要不將之小心放入不會(huì)被刺穿的、用于收集廢棄 銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅(jiān)壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好高壓殺 菌。6、打碎的器皿不能直接用手處理，必須用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或銀子。盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的容器在倒掉前，應(yīng)按照相關(guān)的規(guī)定進(jìn)行消毒。7、所有的培養(yǎng)物、儲(chǔ)存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行的消毒方法進(jìn)行消 毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近實(shí)驗(yàn)室消毒的物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)，密封運(yùn)出實(shí) 驗(yàn)室。離開該系統(tǒng)進(jìn)行消毒的物料，在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝，具包裝應(yīng)符合有關(guān)的法規(guī)。8、濺出或偶然事件中，明顯暴露于傳染源時(shí)，要立即向?qū)嶒?yàn)室主任報(bào)告。進(jìn)行適當(dāng)?shù)尼t(yī)

58、學(xué)評(píng)估、觀察、治療，保留書面記錄。9、按日常程序、在有關(guān)傳染源的工作結(jié)束后、尤其是傳染源濺出或?yàn)⒊龊?、或受到其?傳染源污染后，實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和工作臺(tái)面應(yīng)當(dāng)使用有效的消毒劑消毒。污染的設(shè)備在送去 修理、維護(hù)前，要按照相關(guān)的規(guī)定消毒；在離開設(shè)施轉(zhuǎn)移前，要按照相關(guān)的規(guī)定打包運(yùn) 輸。（2）安全設(shè)備1、正確使用和保養(yǎng)生物安全柜、最好是二級(jí)生物安全柜、或其他合適的人員防護(hù)設(shè)施、 或物理遏制裝置。2、確定可能形成傳染性氣溶膠或?yàn)R出物的實(shí)驗(yàn)過程，包括離心、研磨、勻漿、劇烈震蕩 或混勻、超聲波破裂、開啟裝有傳染源的容器、采集感染標(biāo)本等。3、涉及高濃度或大體積的傳染源時(shí)，若選用密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩的離心機(jī)，若轉(zhuǎn)頭或安

59、 全罩僅在生物安全柜中打開，則可在開放實(shí)驗(yàn)室內(nèi)離心。4、當(dāng)必須在生物安全柜外處理標(biāo)本時(shí)，需采取面部保護(hù)措施（跟鏡、口罩、面罩、或其 他防濺裝置），以免傳染源或其他有害物濺或?yàn)⒌矫嫔稀?、在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，必須使用專用的防護(hù)性外衣、大褂、罩衫或制服。人員到非實(shí)驗(yàn)室區(qū)域 時(shí)，防護(hù)服必須留在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。防護(hù)服可以在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)處理，也可以在洗衣房中洗滌， 但不能帶回家中。6、可能接觸潛在傳染源、被污染的表面或設(shè)備時(shí)，要戴手套。一次性手套不用清洗、不 能重復(fù)使用，不能用于接觸“潔凈”的表面（鍵盤、電話等），也不應(yīng)當(dāng)戴著到實(shí)驗(yàn)室外。 要備有帶滑石粉的乳膠手套。脫掉手套后，要洗手。陰溝腸桿菌的生物危害評(píng)估報(bào)告一、細(xì)菌

60、的傳播與致病陰溝腸桿菌廣泛分布于環(huán)境中，土壤、水、污水、腐爛蔬菜和乳制品亦可發(fā)現(xiàn)，在陰 溝污水中含量可高達(dá)107/g。它是存在于人和動(dòng)物腸道內(nèi)的條件致病菌，易致泌尿道和 呼吸道感染，它也可發(fā)生傷口感染、菌血癥和敗血癥，尤其易發(fā)于下列危險(xiǎn)因素的患者： 如長(zhǎng)期住院（特別是在ICU）、患嚴(yán)重疾病、長(zhǎng)期應(yīng)用廣譜抗生素、進(jìn)行侵襲性操作、應(yīng) 用放療或化療及免疫抵制劑等患者。 據(jù)報(bào)道：在重癥監(jiān)護(hù)病房（ICU）的革蘭陰性菌感染 中，腸桿菌屬細(xì)菌的感染僅次于銅綠假單胞菌，居第二位。二、細(xì)菌的生物學(xué)特性陰溝腸桿菌屬于腸桿菌科腸桿菌屬，為革蘭氏陰性粗短桿菌，有周身鞭毛、無芽胞，兼 性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基