


下載本文檔
版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、活細胞骨架染色-實時觀察3D細胞培養(yǎng)微環(huán)境與細胞遷移的互作用2D細胞外基質(zhì)(ECMs)的物理特性會影響到細胞的粘附動態(tài)和形態(tài),但是3D細胞外基質(zhì)的局部微環(huán)境對細胞的影響卻知之甚少。美國的科研人員構(gòu)建了幾種3D膠原基質(zhì),研究其微結(jié)構(gòu)的變化對于調(diào)節(jié)3D狀態(tài)下的細胞粘附動態(tài)和細胞遷移的影響。細胞外基質(zhì)中有各種成束的纖維會加強局部可粘位點的堅固性,并且可以通過ECM/粘附偶聯(lián)點增強細胞的粘附穩(wěn)定性,并且高度柔軟的網(wǎng)狀聯(lián)合促進了粘附的收縮力。3D粘附的動力學(xué)由局部的ECM的強度和整合素/ECM還有II型肌球蛋的收縮白共同調(diào)節(jié)。不同于2D遷移,3D的細胞遷移不僅受ECM孔徑大小影響。科研人員需要觀察活細胞
2、的在成束的纖維中細胞前沿的突出點的形態(tài)變化,和細胞運動的軌跡。使用LifeAct標(biāo)記細胞的F-actin能夠不影響細胞功能和行為的情況下對細胞進行觀測。研究人員發(fā)現(xiàn)細胞會將細胞前進的邊緣沿著成束的纖維長邊移動。具有接觸導(dǎo)向的作用,這一點在纖維和細胞前進邊緣平行時尤為明顯。而纖維母細胞在不同的ECM中也顯示出了類似的特性,是將纖維拉向細胞自身的同時將偽足向前延伸,并遷移的。Local3Dmatrixmicroenvironmentregulatescellmigrationthroughspatiotemporaldynamicsofcontractility-dependentadhesion
3、sAndrewD.Doyle,NicoleCarvajal,AlbertJin,KazueMatsumoto&KennethM.YamadaNatureCommunications6,Articlenumber:8720doi:10.1038/ncomms(giftfromNIDCR/NIH(giftfromNIDCR/NIH)(ibidi,Germany)(Hyclone)(Hyclone)(GIbco)(Millipore,1:200,Cat#ABT-123)(Bio-RadGenePulsarTM)1)細胞:fibroblast2)試劑:LifeAct-TagGFP2質(zhì)粒Phenolre
4、d-freeDMEMFBSL-glutamineAnti-collagenI3)儀器:電轉(zhuǎn)儀(二)實驗步驟1、LifeAct-GFP轉(zhuǎn)染使用0.4cm的電擊杯,設(shè)定電壓為170V,960uFd,持續(xù)時間17-22“s。2、collagenI預(yù)染5ml的3mg/ml的collagen1在室溫固化之后,膠置于50mM的硼酸鹽緩沖液(pH9.0)中孵育10min室溫避光條件下使用灌流管逐漸用含有NHS脂染料的硼酸鹽溶液逐漸替換之前的緩沖液并孵育1小時。保持染料一直處于灌流的狀態(tài),并且在孵育用TRIS溶液沖洗10分鐘,并用PBS沖洗數(shù)小時移除沒有結(jié)合的染料使用200mM的鹽酸溶解已凝固的膠知道所有的膠溶解以1:1000的比例用20nM的冰醋酸透析上述膠溶液4小時實驗前,用標(biāo)記過的collagenI替換2-4%的未標(biāo)記的collagenl,并和細胞混勻,開始試驗。(三)實驗結(jié)果03一0.丄0出60_0003一0.丄0出60_000612182430Time(min)3642如圖所示:表達EGFP-LifeAct的fibroblast(綠色或灰色)在FB4ECM(紅色)中的活細胞成像實驗。從時間序列的拍攝結(jié)果可以看出,細胞一直是沿著纖維的方向,將actin富集到細胞的
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 2025至2030中國電開水器行業(yè)發(fā)展研究與產(chǎn)業(yè)戰(zhàn)略規(guī)劃分析評估報告
- 2025至2030中國生物玻璃行業(yè)產(chǎn)業(yè)運行態(tài)勢及投資規(guī)劃深度研究報告
- 2025至2030中國玄武巖纖維袖行業(yè)市場占有率及投資前景評估規(guī)劃報告
- 2025至2030中國特種物流行業(yè)發(fā)展趨勢分析與未來投資戰(zhàn)略咨詢研究報告
- 智慧城市公共安全監(jiān)控的法律問題研究
- 企業(yè)培訓(xùn)中的在線教育應(yīng)用與實踐案例分析
- 心理引導(dǎo)與學(xué)生學(xué)習(xí)動力的關(guān)系研究
- 教育心理學(xué)在青少年教育中的運用
- 學(xué)生心理健康與學(xué)習(xí)成效的關(guān)聯(lián)性分析
- 探索個性化教育模式下的游戲化和情感支持融合策略
- 港口裝卸作業(yè)培訓(xùn)
- 2025年湖北省武漢市中考數(shù)學(xué)真題(無答案)
- 鉗工考試試題及答案
- 拖欠維修費車輛以車抵債協(xié)議范本
- 2025至2030中國復(fù)印機行業(yè)發(fā)展趨勢分析與未來投資戰(zhàn)略咨詢研究報告
- 暑假安全家長會4
- 2024年安徽省泗縣衛(wèi)生局公開招聘試題帶答案
- 呼倫貝爾農(nóng)墾集團有限公司招聘筆試題庫2025
- 醫(yī)院檢驗科實驗室生物安全程序文件SOP
- 消毒供應(yīng)室??评碚摽荚囶}庫(單選、多選共500題)
- 詢價單(表格模板)
評論
0/150
提交評論