衛(wèi)生微生物學(xué)課件：第十三章 藥品微生物

1、第十三章 藥品微生物從“欣弗”事件說起齊二藥亮菌甲素注射液事件、安徽華源生物制藥有限公司的“欣弗”事件是2006年我國藥監(jiān)系統(tǒng)發(fā)生的兩件大事“欣弗”事件部分患者在使用華源藥業(yè)生產(chǎn)的克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液(欣弗)后，出現(xiàn)胸悶、腹瀉、過敏性休克等嚴(yán)重不良癥狀欣弗問題藥品318萬余瓶流向全國26個(gè)省份，受害人數(shù)118例左右，并導(dǎo)致11人死亡無菌檢查和熱原質(zhì)檢查均不符合國家藥典對(duì)無菌藥品的相關(guān)要求違反滅菌藥品生產(chǎn)規(guī)程，降低滅菌溫度，縮短滅菌時(shí)間，增加滅菌柜裝載量，嚴(yán)重地影響了藥品的滅菌效果對(duì)更改生產(chǎn)規(guī)程后所生產(chǎn)藥品未進(jìn)行嚴(yán)格的微生物檢驗(yàn)藥品是一種與人類健康和生命密切相關(guān)的特殊商品是用于預(yù)防、治療和

2、診斷疾病，有目的地調(diào)節(jié)機(jī)體生理功能并規(guī)定有適應(yīng)證或功能主治、用法和用量的物品藥品質(zhì)量的好壞直接關(guān)系到使用者的健康和生命對(duì)藥品生產(chǎn)過程的管理和控制是預(yù)防藥品微生物污染、確保藥品質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)如何保障藥品質(zhì)量在一定程度上體現(xiàn)著一個(gè)國家藥品生產(chǎn)、醫(yī)療和科學(xué)技術(shù)的發(fā)展水平 學(xué)習(xí)目標(biāo)熟悉藥品生境特征熟悉藥品微生物污染的來源、種類及其衛(wèi)生學(xué)意義掌握藥品微生物檢測(cè)的相關(guān)概念、術(shù)語及其特殊性熟悉藥品微生物檢驗(yàn)的具體內(nèi)容熟悉藥品微生物檢驗(yàn)的相關(guān)要求及微生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)了解藥品微生物污染的預(yù)防及研究前景第一節(jié) 藥品生境特征藥物生產(chǎn)工序藥品藥物/原料藥：來源于動(dòng)植物；通過基因重組或化學(xué)合成來獲取藥品：由藥物經(jīng)生產(chǎn)加工后形

3、成的具有一定劑型和功能主治的物質(zhì)劑型 dosage form在藥品生產(chǎn)過程中，為適應(yīng)診斷、治療和預(yù)防疾病的需要而將藥物制成的不同形式，是藥品應(yīng)用于臨床的最終給藥形式口服給藥劑型、口腔內(nèi)給藥劑型、注射給藥劑型、呼吸道給藥劑型、皮膚給藥劑型、其他腔道或黏膜給藥劑型(眼部、鼻黏膜、陰道)從微生物角度看，不同劑型和功能主治的藥品生境特征可分為兩大類型具備微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)和生長(zhǎng)條件雖然含有一定的營養(yǎng)物質(zhì)，但同時(shí)含有各種抑菌劑或防腐劑，對(duì)微生物具有一定的殺滅或抑制作用有利于微生物繁殖具有抑制或殺菌作用與微生物生長(zhǎng)繁殖相關(guān)的生境特征可歸納為以下5大類型營養(yǎng)：以淀粉、糖類和蛋白質(zhì)等營養(yǎng)成分為原輔料的各種液

4、體制劑；以微生物代謝產(chǎn)物作為原料參與制作的各種制劑離子物質(zhì)：促進(jìn)微生物生長(zhǎng)繁殖的1價(jià)或2價(jià)陽離子物質(zhì)；對(duì)微生物具有毒性作用、可抑制其生長(zhǎng)繁殖的陽離子物質(zhì)酸堿度：必須適應(yīng)人體對(duì)酸堿度的要求水分：溶液劑型；固體劑型；中藥材滲透壓：液體劑型藥品必須適合人體對(duì)滲透壓的要求；高滲防腐劑和抑制劑第二節(jié) 藥品微生物的來源、種類及其衛(wèi)生學(xué)意義一、藥品微生物污染的來源和種類來源于原料藥或輔料所攜帶的微生物種類和數(shù)量因原料藥或輔料來源的不同而異人或動(dòng)物來源的原料易受人源性或動(dòng)物源性微生物的污染植物性藥材常常帶有土壤中的微生物果實(shí)類藥材因含糖豐富而帶有酵母菌和霉菌以微生物代謝產(chǎn)物為原料或以其有效成分參與制作的藥品可

5、能存在殘存相關(guān)微生物的污染所攜帶的微生物種類和數(shù)量因與處理方法的不同有關(guān) 來源于水微生物水源水、制水系統(tǒng)、儲(chǔ)水裝置、管道系統(tǒng)等去離子水生產(chǎn)過程中的離子交換樹脂微生物污染純凈水生產(chǎn)過程中的反滲膜微生物污染儲(chǔ)水裝置橡皮塞、塑料連接管等來源于空氣微生物生產(chǎn)環(huán)境空氣潔凈度：通風(fēng)不良、塵埃較多來源于生產(chǎn)工序操作人員未按要求適當(dāng)防護(hù)或規(guī)范操作：皮膚、呼吸道或腸道內(nèi)的微生物來源于廠房設(shè)備和包裝容器藥品生產(chǎn)產(chǎn)房或車間衛(wèi)生不良、墻面陳舊腐蝕等制藥機(jī)械設(shè)備未定期維修、保養(yǎng)和清洗消毒包裝容器不潔：使用前消毒不徹底、消毒后存放條件不符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)或放置時(shí)間過長(zhǎng)等藥品微生物污染的來源與主要種類微生物污染的來源主要種類 原

6、料藥或輔料厭氧芽胞梭菌的芽胞；沙門菌屬、腸桿菌屬等 生產(chǎn)用水對(duì)營養(yǎng)要求不高的革蘭陰性桿菌，如假單胞菌屬、黃桿菌屬、無色桿菌屬和產(chǎn)堿桿菌屬等 空氣真菌孢子，如青霉菌、毛霉菌、曲霉等的孢子；酵母菌、微球菌以及芽胞桿菌屬的芽胞等 操作人員腸桿菌屬、葡萄球菌屬、鏈球菌屬，以及棒狀桿菌屬等二、不同種類藥品的微生物污染藥品制劑 preparation / 制劑依據(jù)國家藥典或藥政管理部門批準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)治療或預(yù)防需要而制備的不同給藥形式的具體品種根據(jù)藥品制劑、使用部位和要求的不同規(guī)定滅菌 或無菌制劑非無菌制劑規(guī)定滅菌制劑的微生物污染規(guī)定滅菌 sterilized preparation采用滅菌法殺滅或去除包括

7、芽胞在內(nèi)的所有活微生物的一類制劑，如注射劑、輸液劑以及用于正常無菌體腔、燒傷、眼科外傷用藥等制劑無菌制劑 sterile preparation在無菌環(huán)境下采用無菌技術(shù)制備不含活微生物的一類藥物制劑，如蛋白質(zhì)、核酸和多肽類等生物大分子藥物制劑要求達(dá)到無菌注射劑和輸液劑眼用制劑：滴眼劑和眼藥膏其他滅菌和無菌制劑規(guī)定滅菌制劑的微生物污染 注射劑和輸液劑根據(jù)國家藥典，此類藥品必須達(dá)到無菌要求生境：大量水分、營養(yǎng)物質(zhì)；離子濃度、滲透壓、酸堿度；沒有抑制劑或防腐劑污染原因：生產(chǎn)環(huán)節(jié)不健全、生產(chǎn)流程不規(guī)范、生產(chǎn)環(huán)境嚴(yán)重污染、滅菌不徹底、瓶塞不嚴(yán)或漏氣、保存或使用不當(dāng)?shù)任廴颈憩F(xiàn)：混濁、沉淀、云霧狀改變或產(chǎn)氣

8、等污染的微生物以革蘭陰性菌多見，如大腸埃希菌、產(chǎn)氣桿菌、變形桿菌和銅綠假單胞菌等；也可見到革蘭陽性菌、真菌和放線菌等的污染處理：應(yīng)禁止使用規(guī)定滅菌制劑的微生物污染滴眼劑和眼藥膏根據(jù)國家藥典，滴眼劑和眼藥膏必須保持無菌狀態(tài)生境：pH與滲透壓接近于淚液，非常適合細(xì)菌生長(zhǎng)；眼膏劑可加入適量防腐劑常見的污染菌：銅綠假單胞菌、葡萄球菌、類白喉?xiàng)U菌、枯草桿菌等嚴(yán)重后果：角膜結(jié)膜炎、角膜潰瘍或失明等其他滅菌和無菌制劑體內(nèi)埋植制劑特殊局部外用制劑：用于外傷、燒傷或潰瘍等創(chuàng)面用制劑，溶液劑、凝膠和軟膏劑等手術(shù)用制劑：止血海綿劑、骨蠟等所使用的原料藥或輔料含有淀粉、明膠、纖維蛋白原和血漿等成分，在生產(chǎn)和使用過程中

9、易被各種微生物污染非無菌制劑的微生物污染各種口服制劑和一般外用制劑允許存在一定數(shù)量的細(xì)菌，但對(duì)染菌的數(shù)量和種類有相應(yīng)的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)口服制劑局部外用制劑中藥制劑和中藥材消毒劑與洗滌劑非無菌制劑的微生物污染口服制劑主要有固體制劑和溶液制劑兩種溶液制劑：水溶性，較易污染并滋生細(xì)菌；糖漿劑，易受真菌污染，低蔗糖濃度適合細(xì)菌尤其耐糖菌生長(zhǎng)繁殖，一般添加防腐劑；溶劑為乙醇或油固體制劑：散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑等；含水量較低；環(huán)境相對(duì)濕度較高時(shí)，水溶性藥物粉末制成的固體制劑-吸濕性以動(dòng)植物為原料的制劑：含生藥的片劑、散劑、丸劑等；最易受到來自動(dòng)物或土壤中微生物污染非無菌制劑的微生物污染局部外用制劑專供無

10、破損皮膚表面使用的液體制劑：搽劑、洗劑等，含有消毒成分供非無菌部位應(yīng)用的半固體劑型：軟膏劑、乳膏劑、糊劑等，含水量較高，糊劑含淀粉量較多，在貯存和反復(fù)使用過程中易受細(xì)菌或霉菌的污染粉劑：原料藥來源，破傷風(fēng)常見的污染菌有葡萄球菌、變形桿菌、大腸埃希菌、厭氧芽胞梭菌，以及酵母菌和霉菌等非無菌制劑的微生物污染中藥制劑和中藥材以中藥為原料，中醫(yī)理論指導(dǎo)，依照規(guī)定處方加工制備成的制劑中藥單味藥制劑、中藥復(fù)方制劑、天然藥物制劑易受外源性有毒有害物質(zhì)的污染，尤其是真菌及其毒素的污染中藥材最常見真菌和螨蟲污染消毒劑與洗滌劑常檢出革蘭陰性桿菌，如銅綠假單胞菌、克雷伯菌、大腸埃希菌三、藥品微生物污染的衛(wèi)生學(xué)意義藥

11、品變質(zhì)微生物在藥品中生長(zhǎng)繁殖，致使受污染的藥品發(fā)生一系列物理性狀和化學(xué)成分的改變藥品變質(zhì)的現(xiàn)象異味變色黏稠現(xiàn)象顆?，F(xiàn)象其他改變：沉淀、混濁、云霧狀改變；菌團(tuán)或膜狀物藥品變質(zhì)的判斷依據(jù)藥品出現(xiàn)肉眼可見的感觀性狀改變和(或)理化性狀改變從無菌制劑中檢出微生物從口服及外用藥品中檢出的微生物總數(shù)超過限度標(biāo)準(zhǔn)從藥品中分離到病原微生物藥品雖未檢出微生物，但存在微生物毒性代謝產(chǎn)物，如熱原質(zhì)、真菌毒素等藥品變質(zhì)的后果失去藥用價(jià)值藥品中活性物質(zhì)被降解出現(xiàn)有害的微生物代謝產(chǎn)物內(nèi)毒素或熱原質(zhì)真菌毒素危害用藥者健康藥源性感染(drug-borne infection)：全身性感染、局部感染中毒或超敏等不良反應(yīng)第三節(jié)

12、藥品微生物檢測(cè)與衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)一、藥品微生物污染的特殊性藥品生境的多樣性和復(fù)雜性存活或生長(zhǎng)繁殖/抑制或死亡劑型影響檢驗(yàn)結(jié)果的正確性藥品微生物數(shù)量和分布的不一致性藥品中可能污染的微生物數(shù)量少在藥品中的分布是局部的、不均勻的要求達(dá)到一定的樣本量，以保證樣品的代表性藥品微生物的活力的不確定性多處于亞致死性的損傷狀態(tài)，需要先對(duì)損傷菌進(jìn)行復(fù)蘇或修復(fù)藥品微生物消長(zhǎng)的多變性“合格產(chǎn)品”二、藥品微生物檢測(cè)藥品微生物檢查內(nèi)容無菌檢查(sterility tests)微生物限度檢查(microbial limit test)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查(bacterial endotoxin test)熱原質(zhì)檢查(pyrogen t

13、est) 1、無菌檢查用于檢查中華人民共和國藥典(2015)要求無菌的藥品、生物制品、醫(yī)療器具、原料、輔料及其他品種是否無菌的一種方法凡是直接進(jìn)入人體血循環(huán)系統(tǒng)、肌肉、皮下組織或接觸創(chuàng)傷、潰瘍和燒傷等部位而發(fā)揮作用的制品，或要求無菌的材料、滅菌器具等都要進(jìn)行無菌檢查，以最大限度地保證這些制劑或用品不帶有活菌目的：消除要求無菌的藥品制劑因污染細(xì)菌而對(duì)用藥者帶來的危害，保證用藥安全是我國判斷產(chǎn)品是否無菌的唯一辦法，若供試品符合無菌檢查法的規(guī)定，則表明供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染1.1無菌檢查的環(huán)境要求確保無菌檢查結(jié)果正確：無菌檢查試驗(yàn)的所有操作均必須在嚴(yán)格控制的無菌條件下進(jìn)行無菌檢查的全過

14、程均應(yīng)遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出無菌檢查的工作環(huán)境(單向流空氣區(qū)、工作臺(tái)面及環(huán)境)應(yīng)定期按照醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度確認(rèn)9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則：環(huán)境潔凈度B級(jí)背景下的局部A級(jí)潔凈度的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行藥品生產(chǎn)潔凈區(qū)的空氣潔凈度標(biāo)準(zhǔn)潔凈度級(jí)別靜態(tài)：懸浮粒子最大允許數(shù)/m3微生物監(jiān)測(cè)0.5m5m浮游菌（cfu/m3）沉降菌90mm(cfu/4h）A級(jí)3 500111B級(jí)35001105C級(jí)350 0002 00010050D級(jí)3500 00020 0002001001.

15、2無菌檢查方法無菌檢查的抽樣無菌檢查培養(yǎng)基的要求無菌檢查方法的適用性試驗(yàn)無菌檢查法陽性和陰性對(duì)照試驗(yàn)無菌試驗(yàn)的培養(yǎng)和觀察無菌檢查的抽樣破壞性：檢樣，每批產(chǎn)品中隨機(jī)抽取一定數(shù)量的單位產(chǎn)品隨機(jī)抽樣方法百分?jǐn)?shù)抽樣法：按一定的百分比固定抽樣法：固定數(shù)量綜合抽樣法抽樣量：以較少的樣本量準(zhǔn)確反映總體的質(zhì)量檢查目的、要求、代表性、實(shí)際工作量、經(jīng)濟(jì)損失等“批”“檢驗(yàn)數(shù)量”、“檢驗(yàn)量”“批”-均一性、代表性滅菌制劑：同一滅菌器的產(chǎn)品無菌制劑：無菌罐裝相同的最終容器連續(xù)不間斷生產(chǎn)：不超過24h生產(chǎn)周期內(nèi)的產(chǎn)品連續(xù)生產(chǎn)過程中產(chǎn)品分別連續(xù)滅菌：不超過24h的總產(chǎn)量不同機(jī)器生產(chǎn)、不同班組生產(chǎn)“檢驗(yàn)數(shù)量”一次試驗(yàn)所用供試

16、品最小包裝容器的數(shù)量“檢驗(yàn)量”一次試驗(yàn)所用供試品總量(g或ml)最終滅菌產(chǎn)品抽取每一滅菌柜中經(jīng)驗(yàn)證的可能存在滅菌不徹底的產(chǎn)品非最終滅菌藥品(無菌分裝藥品)盡量抽取批準(zhǔn)生產(chǎn)開始和結(jié)束或者生產(chǎn)過程出現(xiàn)異常情況下的產(chǎn)品一般規(guī)定滅菌藥品本身不含抗菌成分的藥品特殊規(guī)定滅菌藥品本身含有抑菌成分或防腐劑，對(duì)微生物具有抑制或殺傷作用必須先去除其中的抑菌或防腐成分無菌檢查培養(yǎng)基的要求培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基：主要用于厭氧菌培養(yǎng)，也可用于需氧菌培養(yǎng)胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基：主要用于真菌和需氧菌培養(yǎng)培養(yǎng)基的適用性檢查無菌性檢查：隨機(jī)抽取不少于5個(gè)，置規(guī)定溫度培養(yǎng)14d靈敏度檢查：實(shí)驗(yàn)菌株傳代次數(shù)不得超過5代

17、，菌液濃度100cfu/ml；2管+菌液，1管空白無菌檢查方法的適用性試驗(yàn)驗(yàn)證所用檢查方法，確認(rèn)方法適合于該產(chǎn)品的的無菌檢查常用的無菌檢查方法薄膜過濾法：只要供試品性質(zhì)允許直接接種法：適用于無法用薄膜過濾法進(jìn)行無菌檢查的供試品包括需氧菌、厭氧菌和真菌三類微生物的檢查根據(jù)藥品種類不同，用無菌操作方法將一定量藥品加入相應(yīng)培養(yǎng)基按規(guī)定進(jìn)行培養(yǎng)若需使用表面活性劑、滅活劑、中和劑：證明有效性、對(duì)微生物無毒性陽性對(duì)照試驗(yàn)檢查陽性對(duì)照菌在加入檢樣/供試品的培養(yǎng)基中能否生長(zhǎng)驗(yàn)證檢樣中有無抑菌活性物質(zhì)和試驗(yàn)條件是否符合要求陽性對(duì)照菌必須依據(jù)檢樣的特性進(jìn)行選擇陽性對(duì)照菌培養(yǎng)72h內(nèi)應(yīng)生長(zhǎng)良好，否則無菌檢查試驗(yàn)無效

18、陰性對(duì)照試驗(yàn)檢查所用物品、培養(yǎng)基、溶劑或稀釋劑是否處于無菌狀態(tài)的試驗(yàn)取相應(yīng)溶劑和(或)稀釋液等與檢樣同法操作陰性對(duì)照管內(nèi)不得有細(xì)菌生長(zhǎng)無菌試驗(yàn)的培養(yǎng)及觀察培養(yǎng)條件與要求硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基，3035硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基，2025胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基，2025各培養(yǎng)物按規(guī)定溫度連續(xù)培養(yǎng)14d，培養(yǎng)期間逐日觀察并記錄是否有菌生長(zhǎng)結(jié)果判斷陽性對(duì)照管應(yīng)混濁并確定有菌生長(zhǎng)陰性對(duì)照管應(yīng)澄清所有培養(yǎng)管均澄清，或雖混濁但證明并非微生物生長(zhǎng)所致，判為無菌檢查合格任何一管培養(yǎng)基混濁并證實(shí)有細(xì)菌生長(zhǎng)，判為無菌檢查不合格無菌檢查結(jié)果不得復(fù)試無菌檢查試驗(yàn)確認(rèn)無效時(shí)應(yīng)重試所用設(shè)備和環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無菌檢查法要求

19、發(fā)現(xiàn)存在可能引起微生物污染的因素檢樣培養(yǎng)管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)鑒定，確證是因無菌試驗(yàn)中所使用的物品和(或)無菌操作技術(shù)不當(dāng)所致1.3無菌檢查的局限性與規(guī)定滅菌藥品的無菌保證批滅菌產(chǎn)品的無菌性無菌保證水平 sterility assurance level, SAL隨機(jī)抽樣-產(chǎn)品的污染率越低，誤判合格的概率就越高規(guī)定滅菌藥品在SAL概率意義上的無菌保證不能依賴于最終產(chǎn)品的無菌檢查，而應(yīng)取決于生產(chǎn)過程中采用驗(yàn)證合格的滅菌工藝、嚴(yán)格的GMP管理和良好的質(zhì)量保證體系與批無菌檢查結(jié)果相比較，藥品批生產(chǎn)過程中的微生物監(jiān)控更能反映產(chǎn)品的無菌水平 2、非無菌藥品的微生物限度檢查檢查非無菌制劑及其原料藥、輔料等受到

20、微生物污染程度的方法保證藥品質(zhì)量的重要檢查內(nèi)容之一允許存在一定限量的微生物，但不得含有可疑致病菌微生物計(jì)數(shù)法：細(xì)菌、霉菌及酵母菌菌落總數(shù)控制菌檢查法 2.1微生物計(jì)數(shù)法用于能在有氧條件下生長(zhǎng)的嗜溫細(xì)菌和真菌的計(jì)數(shù)需氧菌總數(shù)霉菌及酵母菌總數(shù)不適用于活菌制劑的檢查環(huán)境要求：在不低于D級(jí)潔凈環(huán)境、局部潔凈度不低于B級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行；嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查和供試品計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)計(jì)數(shù)方法平板計(jì)數(shù)法：傾注培養(yǎng)法、表面涂布法薄膜過濾法MPN：微生物污染量很小的藥品、缺少選擇性培養(yǎng)基的微生物陰性對(duì)照：稀釋液或玻璃器皿的沖洗液；判斷試驗(yàn)全過程均處于無污染狀況陽性對(duì)照培養(yǎng)需氧菌總數(shù)：胰酪

21、大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基；3035，3d霉菌及酵母菌總數(shù)：沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基；2025，5d結(jié)果判斷需氧菌總數(shù)：在胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的總菌落數(shù)(包括真菌菌落數(shù))；菌數(shù)報(bào)告選取平均菌落數(shù)300cfu的稀釋級(jí)霉菌和酵母菌總數(shù)：沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的總菌落數(shù)(包括細(xì)菌菌落數(shù))；菌數(shù)報(bào)告選取平均菌落數(shù) 100cfu的稀釋級(jí)無或平均菌落數(shù)小于1：以1乘以最低稀釋倍數(shù)的值報(bào)告菌落如沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的細(xì)菌使霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)不符合微生物限度要求，可使用含抗生素(氯霉素、慶大霉素)的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基重新進(jìn)行霉菌和酵母菌總數(shù)測(cè)定如采用MPN法，測(cè)定結(jié)果為需氧菌總數(shù)2.2

22、控制菌檢查控制菌：藥品中不得檢出的細(xì)菌2015版中國藥典規(guī)定的控制菌檢查項(xiàng)目耐膽鹽革蘭陰性菌、大腸埃希菌、沙門菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、梭菌屬和白色念珠菌耐膽鹽革蘭陰性菌：指能在膽汁酸中存活并繁殖的革蘭陰性菌，取代了2010版的大腸菌群梭菌屬包括能產(chǎn)生強(qiáng)烈外毒素的產(chǎn)氣莢膜梭菌、破傷風(fēng)梭菌、肉毒梭菌和艱難梭菌培養(yǎng)基適用性檢查和控制菌檢查方法適用性試驗(yàn)供試品檢查增菌培養(yǎng)(無選擇性增菌培養(yǎng)基)選擇性增菌選擇性瓊脂陽性對(duì)照試驗(yàn)陰性對(duì)照試驗(yàn)：稀釋液2.3微生物限度檢查的總體判斷細(xì)菌、霉菌和酵母菌菌落總數(shù)、控制菌三項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果均符合該品種的規(guī)定，則判定為該檢樣的微生物限度檢查符合規(guī)定；如果其中任何一

23、項(xiàng)不符合該品種的規(guī)定，則判定為該檢樣不符合規(guī)定檢樣檢出控制菌或其他致病菌時(shí)，按一次檢出結(jié)果為準(zhǔn)，不再復(fù)試，判定該檢樣不符合微生物限度檢查規(guī)定檢樣未檢出控制菌或其他致病菌，但該檢樣的細(xì)菌、霉菌和酵母菌菌落總數(shù)中任何一項(xiàng)不符合該品種的規(guī)定時(shí)，應(yīng)從同一批樣品中隨機(jī)抽樣，獨(dú)立復(fù)試2次，以3次結(jié)果的平均值報(bào)告菌落總數(shù)，如果符合該品種的規(guī)定，判定該檢樣符合微生物限度檢查規(guī)定，否則判定不符合規(guī)定眼用制劑檢出霉菌和酵母菌菌落總數(shù)時(shí)，須以2次復(fù)試結(jié)果均不得長(zhǎng)菌，方可判定檢樣的霉菌和酵母菌菌落總數(shù)符合該品種的規(guī)定3、熱原檢查法熱原 pyrogen泛指那些能引起機(jī)體發(fā)熱的物質(zhì)，普遍存在于自然水、自來水、塵埃中來源：

24、機(jī)體自身；來自細(xì)菌合成代謝過程中所產(chǎn)生的能導(dǎo)致機(jī)體發(fā)熱反應(yīng)的物質(zhì)，主要包括革蘭陰性菌內(nèi)毒素?zé)嵩瓩z查法：家兔熱原試驗(yàn)將一定劑量的檢樣靜脈注入家兔體內(nèi)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)觀察家兔體溫升高的情況，以判定供試品中所含熱原質(zhì)的限度是否符合規(guī)定用于熱原檢查試驗(yàn)的器皿應(yīng)無菌、無熱原；干熱滅菌25030min以上應(yīng)注意受檢藥物的理化性質(zhì)及藥理作用對(duì)家兔的影響 4、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法細(xì)菌內(nèi)毒素 endotoxin是革蘭陰性菌細(xì)胞壁的組分，是在細(xì)菌死亡破裂后釋放出的脂多糖(LPS)；內(nèi)毒素可誘發(fā)致熱反應(yīng)、白細(xì)胞反應(yīng)、DIC以及內(nèi)毒素血癥與休克，嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法：鱟試驗(yàn) limulus test利用鱟試劑與

25、內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的機(jī)制，來檢測(cè)或量化革蘭陰性菌所產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素，以判斷檢樣中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法反應(yīng)原理：鱟試劑(鱟血細(xì)胞的溶解物)包含了與內(nèi)毒素反應(yīng)所需的全部凝集因子(C因子、B因子、G因子、凝固酶原和凝固蛋白原)，凝固酶原經(jīng)內(nèi)毒素激活轉(zhuǎn)化為具有活性的凝固酶，通過凝固酶的酶解作用將凝固蛋白原轉(zhuǎn)化為凝固蛋白，凝固蛋白又通過交聯(lián)酶的作用相互聚合，形成牢固的凝膠凝膠法：半定量方法光度測(cè)定法：定量分析 三、藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定滅菌藥品的微生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)制性的，要求無菌在制劑通則、品種項(xiàng)下要求無菌的制劑及標(biāo)示無菌的制劑和原輔料，應(yīng)符合無菌檢查法規(guī)定用于手術(shù)、嚴(yán)重?zé)齻驀?yán)重創(chuàng)傷的局

26、部給藥制劑，應(yīng)符合無菌檢查法規(guī)定非無菌藥品的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)非強(qiáng)制性的，允許有一定數(shù)量的菌微生物限度標(biāo)準(zhǔn)是基于藥品的給藥途徑、對(duì)使用者健康潛在的危害和藥品的特殊性而制定的非無菌化學(xué)藥品制劑、生物制品制劑、不含藥材原粉的中藥制劑的微生物標(biāo)準(zhǔn)(中國藥典2015版)給藥途徑需氧菌總數(shù)(cfu/g,cfu/ml,cfu/10cm2)霉菌和酵母菌總數(shù)(cfu/g,cfu/ml,cfu/10cm2)控制菌口服給藥 固體制劑 液體制劑103103102101不得檢出大腸埃希菌(1g或1ml)；含臟器提取物的制劑不得檢出沙門菌(10g或10ml)口腔黏膜給藥制劑 齒齦給藥制劑 鼻用制劑102101不得檢出大腸埃

27、希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌(1g、1ml或10cm2)耳用制劑皮膚給藥制劑102101不得檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌(1g、1ml或10cm2)呼吸道吸入給藥制劑102101不得檢出大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、耐膽鹽革蘭陰性菌(1g或1ml)陰道、尿道給藥制劑102101不得檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌(1g、1ml或10cm2)；中藥制劑還不得檢出梭菌(1g、1ml或10cm2)直腸給藥 固體制劑 液體制劑103102102102不得檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌(1g、1ml或10cm2)其他局部給藥制劑102102不得檢出金黃色葡萄球菌、銅綠

28、假單胞菌(1g、1ml或10cm2)如藥品中檢出藥典限度標(biāo)準(zhǔn)所列控制菌之外的其他可能具有潛在危害性的微生物，要對(duì)檢樣進(jìn)行安全性評(píng)估藥品的使用方法用藥人群：新生兒、嬰幼兒、體弱者病人使用免疫抑制劑和甾體類固醇激素等藥品的情況存在的疾病、傷殘或器官損傷等WHO對(duì)藥品的染菌限度標(biāo)準(zhǔn)分類類別制劑活菌數(shù)及控制菌標(biāo)準(zhǔn)1注射用制劑按藥典規(guī)定條件下滅菌，1g（ml）制劑中不得含有活菌2眼科用制劑，用于正常無菌體腔，嚴(yán)重?zé)齻蜐兠娴闹苿?g（ml）制劑中不得含有活菌3用于局部和受傷皮膚的制劑，供耳、鼻、喉等科用的制劑1g（ml）制劑中的活菌數(shù)不超過102，不得含有腸桿菌科細(xì)菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌4其

29、他制劑1g（ml）的活菌數(shù)不超過103，同時(shí)不得含有腸桿菌科細(xì)菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌， 1g（ml）中活的真菌（霉菌、酵母）數(shù)不得超過102第四節(jié) 藥品微生物污染的預(yù)防和控制一、預(yù)防與控制藥品微生物污染的措施加強(qiáng)藥品的生產(chǎn)管理藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(Good Manufacturing Practices for Drugs, GMP)，從藥品微生物污染的源頭開始全面監(jiān)控藥品制劑的優(yōu)化設(shè)計(jì)改變藥品的滲透壓、pH或添加防腐劑等，從藥品生境的合理改造入手，有效控制污染微生物在藥物成品中的生長(zhǎng)繁殖從產(chǎn)品檢驗(yàn)方面預(yù)防和控制最終成品的微生物污染實(shí)施微生物學(xué)檢驗(yàn)：藥品出廠、貯存運(yùn)輸和使用中合理貯存

30、藥品干燥、冷藏、防潮和避光等優(yōu)質(zhì)防腐劑在抑菌濃度范圍內(nèi)，對(duì)人體無毒、無刺激性，內(nèi)服時(shí)無特殊臭味在水中有較大的溶解度，能達(dá)到防腐所要求的濃度不影響制劑的理化性質(zhì)和藥理作用對(duì)大多數(shù)微生物具有較強(qiáng)的抑制作用防腐劑本身的理化性質(zhì)和抗微生物性質(zhì)穩(wěn)定，不易受熱、pH及制劑中藥物和附加劑的影響在貯存、使用期間穩(wěn)定，不與包裝材料發(fā)生反應(yīng)一、預(yù)防與控制藥品微生物污染的措施加強(qiáng)藥品的生產(chǎn)管理藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(Good Manufacturing Practices for Drugs, GMP)，從藥品微生物污染的源頭開始全面監(jiān)控藥品制劑的優(yōu)化設(shè)計(jì)改變藥品的滲透壓、pH或添加防腐劑等，從藥品生境的合理改造入手

31、，有效控制污染微生物在藥物成品中的生長(zhǎng)繁殖從產(chǎn)品檢驗(yàn)方面預(yù)防和控制最終成品的微生物污染實(shí)施微生物學(xué)檢驗(yàn)：藥品出廠、貯存運(yùn)輸和使用中合理貯存藥品干燥、冷藏、防潮和避光等二、藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范GMP對(duì)藥品生產(chǎn)過程實(shí)施全面管理，最大限度地將產(chǎn)品質(zhì)量置于可控狀態(tài)，確保持續(xù)生產(chǎn)出合格產(chǎn)品的一種管理方法GMP對(duì)藥品質(zhì)量的管理理念藥品質(zhì)量是生產(chǎn)出來的，不是檢驗(yàn)出來的強(qiáng)調(diào)全面的規(guī)范化的質(zhì)量管理，不但注重管理結(jié)果，更注重管理過程 GMP已成為國內(nèi)外公認(rèn)的確保藥品安全性、有效性的根本制度藥品GMP全新內(nèi)涵確保藥品質(zhì)量萬無一失生產(chǎn)過程全程控制：起點(diǎn)控制；過程控制；標(biāo)準(zhǔn)控制；系統(tǒng)控制生產(chǎn)環(huán)境全面凈化

32、：生產(chǎn)場(chǎng)所凈化；生產(chǎn)物料凈化；生產(chǎn)設(shè)施凈化；生產(chǎn)人員凈化生產(chǎn)設(shè)施強(qiáng)調(diào)實(shí)效：滿足生產(chǎn)工藝和質(zhì)量控制要求；不應(yīng)污染藥品和生產(chǎn)環(huán)境；有利于清洗、消毒和滅菌；適應(yīng)驗(yàn)證需要從原輔料到成品全過程，藥品微生物污染的關(guān)鍵環(huán)節(jié)與預(yù)防措施示意圖藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理的要求GMP通過對(duì)藥品生產(chǎn)過程的各個(gè)環(huán)節(jié)提出規(guī)范化管理標(biāo)準(zhǔn)，以確保藥品生產(chǎn)質(zhì)量生產(chǎn)環(huán)境儀器設(shè)備原輔料生產(chǎn)人員生產(chǎn)方法文件管理和監(jiān)督制度工程驗(yàn)證與藥品生產(chǎn)環(huán)境的管理人員管理質(zhì)量控制1、工程驗(yàn)證 engineering validation我國GMP實(shí)施指南定義：用以證明在藥品生產(chǎn)檢驗(yàn)中所用的廠房、設(shè)施和設(shè)備、原輔材料、生產(chǎn)工藝和質(zhì)量控制方法等是否確實(shí)達(dá)到預(yù)期目

33、的的一系列活動(dòng)驗(yàn)證內(nèi)容空氣凈化系統(tǒng)工藝用水系統(tǒng)生產(chǎn)工藝設(shè)備清洗和滅菌等1.1工程設(shè)計(jì)審查工程設(shè)計(jì)是GMP對(duì)藥品生產(chǎn)規(guī)范化管理的起點(diǎn)，包括項(xiàng)目規(guī)模廠址選擇廠區(qū)與車間布局設(shè)施設(shè)備工藝流程等1.2空氣凈化系統(tǒng)驗(yàn)證藥品生產(chǎn)潔凈室(區(qū))空氣潔凈度4個(gè)級(jí)別A級(jí)：高風(fēng)險(xiǎn)操作區(qū)B級(jí)：無菌配置和罐裝等高風(fēng)險(xiǎn)操作A級(jí)潔凈區(qū)所處的環(huán)境區(qū)域C級(jí)、D級(jí)：無菌藥品生產(chǎn)過程中執(zhí)行重要程度較低的操作步驟的區(qū)域藥品生產(chǎn)潔凈區(qū)的空氣潔凈度標(biāo)準(zhǔn)潔凈度級(jí)別懸浮粒子最大允許數(shù)/m3靜態(tài)動(dòng)態(tài)0.5m5m0.5m5mA級(jí)3 50013 5001B級(jí)35001350 0002 000C級(jí)350 0002 0003 500 00020 000

34、D級(jí)3500 00020 000不作規(guī)定不作規(guī)定藥品生產(chǎn)潔凈區(qū)微生物檢測(cè)的動(dòng)態(tài)標(biāo)準(zhǔn)潔凈度級(jí)別浮游菌cfu/m3沉降菌(90mm)cfu/4h表面微生物接觸(55mm)cfu/碟5指手套cfu/手套A級(jí)1111B級(jí)10555C級(jí)1005025-D級(jí)20010050-不同用藥途徑及不同劑型的藥品，對(duì)生產(chǎn)環(huán)境空氣潔凈度要求不同非最終滅菌藥品，要求B級(jí)環(huán)境下的局部A級(jí)空氣潔凈度最終滅菌藥品，要求C級(jí)環(huán)境下的局部A級(jí)空氣潔凈度1.3工藝用水系統(tǒng)驗(yàn)證工藝用水的質(zhì)量水處理各階段的化學(xué)、微生物和熱原指標(biāo)等都必須首先符合國家藥典規(guī)定的要求根據(jù)企業(yè)具體情況制定高于藥典要求的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)和報(bào)警限度1.4滅菌驗(yàn)證滅菌方法

35、的驗(yàn)證1.5生產(chǎn)工藝驗(yàn)證包括審閱處方和操作規(guī)程，確認(rèn)設(shè)備、物料和工藝條件以及工藝條件的復(fù)驗(yàn)證、變更驗(yàn)證等2、人員管理人員資質(zhì)要求 對(duì)企業(yè)主管藥品生產(chǎn)管理和質(zhì)量管理的負(fù)責(zé)人應(yīng)具有醫(yī)藥或相關(guān)專業(yè)大專以上學(xué)歷，有藥品生產(chǎn)和質(zhì)量管理經(jīng)驗(yàn)，對(duì)GMP的實(shí)施和產(chǎn)品質(zhì)量負(fù)責(zé)從事生產(chǎn)操作的技術(shù)工種人員、質(zhì)量檢驗(yàn)人員、計(jì)量檢修和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)人員等均要具備相關(guān)的專業(yè)知識(shí)并持證上崗人員的培訓(xùn)要求 對(duì)藥品生產(chǎn)企業(yè)所有員工進(jìn)行培訓(xùn)是全面質(zhì)量管理的要素之一培訓(xùn)要建立培訓(xùn)制度和計(jì)劃，并有培訓(xùn)記錄培訓(xùn)結(jié)束時(shí)應(yīng)對(duì)參與人員進(jìn)行考核，建立員工培訓(xùn)檔案3、質(zhì)量控制定期自檢：模擬生產(chǎn)操作，3次運(yùn)轉(zhuǎn)合格偏差處理：調(diào)查分析，評(píng)估對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的

36、影響，制定有效的糾正和預(yù)防措施變更控制：根據(jù)變更的實(shí)際情況，評(píng)估對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的影響，確認(rèn)是否進(jìn)行相應(yīng)的研究或驗(yàn)證超標(biāo)調(diào)查：對(duì)可能受影響的產(chǎn)品或批次進(jìn)行評(píng)估，并針對(duì)超標(biāo)發(fā)生的根本原因制定有效的糾正和預(yù)防措施驗(yàn)證及再驗(yàn)證第十四章 化妝品微生物化妝品 cosmetic以涂抹、噴灑或其他類似方法，施于人體表面(皮膚、毛發(fā)、指甲、口唇等)，以達(dá)到清潔、消除不良?xì)馕?、護(hù)膚、美容和修飾目的的化學(xué)工業(yè)品清潔、保養(yǎng)、美化作用以及介于藥品和普通化妝品之間的特殊作用，如祛斑、除臭、脫毛等 教學(xué)目的熟悉化妝品的生境特征了解化妝品微生物來源、種類和衛(wèi)生學(xué)意義掌握化妝品微生物檢測(cè)及標(biāo)準(zhǔn)，化妝品菌落總數(shù)、霉菌、酵母菌數(shù)測(cè)定，

37、化妝品特定菌檢驗(yàn)熟悉化妝品微生物污染及預(yù)防了解化妝品微生物研究前景一、化妝品生境特征化妝品由基質(zhì)和輔料組成基質(zhì)：起主要功能作用，常用的有油脂、蠟、粉類物質(zhì)、水和有機(jī)溶劑等輔料：賦予化妝品成型、穩(wěn)定或色、香及其他特定作用，包括乳化劑、香精、色素、顏料、防腐劑、抗氧化劑和其他添加劑特殊生境化妝品中存在著微生物生長(zhǎng)繁殖的良好條件化妝品中的防腐劑能夠有限度地抑制微生物生長(zhǎng)營養(yǎng)原材料營養(yǎng)豐富：天然的動(dòng)物臟器、各種酶類、花粉、蜂王漿、天然或合成的膠質(zhì)、蛋白質(zhì)、氨基酸、淀粉和維生素等酸堿度pH47之間溫度生產(chǎn)、運(yùn)輸、貯藏和使用中的溫度大多在2030之間水分水作為溶劑是許多化妝品的主要原料防腐劑抑制微生物在化

38、妝品中的生長(zhǎng)繁殖、避免消費(fèi)者在使用過程中的二次污染防腐劑品種和用量限制：過敏癥等皮膚刺激癥狀；經(jīng)皮膚吸收引起全身中毒二、化妝品微生物污染的來源化妝品的一次污染化妝品在生產(chǎn)過程中導(dǎo)致的污染原料污染：一次污染的主要原因最易被微生物污染的原料：天然動(dòng)植物成分及其提取物較易被微生物污染的原料：增稠劑、成膜劑、粉體、色素、離子交換水、表面活性劑等微生物污染較少的原料：油脂、高級(jí)脂肪酸、醇、香料、酸和堿等生產(chǎn)過程中污染：生產(chǎn)設(shè)備；廠房環(huán)境；生產(chǎn)人員；包裝材料化妝品的二次污染化妝品在運(yùn)輸、貯藏、銷售以及消費(fèi)者使用過程中造成的污染使用時(shí)不注意衛(wèi)生；包裝設(shè)計(jì)不科學(xué)、防腐劑使用不當(dāng)某些原料的微生物計(jì)數(shù)原料微生物數(shù)

39、（cfu/g）原料微生物數(shù)（cfu/g）蛋白酶1000 000硅酸鎂鋁1001 000烷基醚硫酸鹽(30%溶液)100 0001000 000淀粉1001 000滑石粉1 00010 000硬脂酸鋅10100二氧化鈦10010 000羧甲基纖維素10100氧化鐵10010 000乳糖10100高嶺土1001 000三、化妝品污染微生物種類以革蘭陰性桿菌為主：埃希菌屬、假單胞菌屬、變形桿菌屬、克雷伯菌屬和腸桿菌屬、枸櫞酸桿菌屬等葡萄球菌屬、鏈球菌屬、沙雷菌和芽胞桿菌屬霉菌：青霉屬、曲霉屬、芽枝霉書、交鏈胞霉屬、蠕孢霉屬、毛霉屬、絲核霉屬、茁霉屬和根霉屬酵母菌：紅酵母屬、圓酵母屬、隱球酵母屬和假綠酵母屬 霜膏類(護(hù)膚類)污染率最高 洗護(hù)類污染率次高 粉類易受土壤中微生物的污染 美容類污染率低 化妝品中的常見微生物污染產(chǎn)品污染菌微生物數(shù)目(cfu/g或ml)護(hù)手霜銅綠假單胞菌1.2103保濕霜奧斯陸莫拉菌1.3103啫哩膏惡臭假單胞菌2.5104洗面奶類產(chǎn)堿假單胞菌3.1104睫毛油嗜麥芽假單胞菌7.0105發(fā)乳類產(chǎn)堿假單胞菌1.9104發(fā)油熒光假單胞菌4.0104牙膏陰溝腸桿菌2.3105牙粉產(chǎn)氣腸桿菌3.4106四、化妝品微生物