無菌操作技術(shù)在微生物四項基本實驗技術(shù)中的應(yīng)用和意義

1、無菌操作技術(shù)主要是指在微生物試驗工作中，把握或防止各類微生物 的污染及其干擾的一系列操作方法和有關(guān)措施，其中包括無菌環(huán)境設(shè)施、 無菌試驗器材及無菌操作方法等。微生物學(xué)四項根本試驗技術(shù)是指顯微鏡技術(shù)、無菌操作技術(shù)、純種分 離技術(shù)和純種培育技術(shù)。微生物學(xué)試驗技術(shù)所用玻璃器皿。不但要像化學(xué)試驗?zāi)菢右笄鍧崳?而且還要無菌玻璃器皿、接種工具、材料要滅菌 3工具吸管、塑料吸嘴、玻璃刮棒、染色涂片等3來蘇爾 液中，消毒后再清洗。有微生物污染的廢物要集中處理，不能污染環(huán)境。 無菌操作一般是在無菌環(huán)境條件下，使用無菌器材進展檢驗或試驗過程中，防止微生物污染和干擾的一種常規(guī)操作方法。無菌操作的目的，一 是保持待

2、檢物品不被環(huán)境中微生物所污染；二是防止被檢微生物在操作中 污染環(huán)境和感染操作人員，因而無菌操作在肯定意義上講又是安全操作。 無菌操作技術(shù)在微生物四項根本試驗技術(shù)中的應(yīng)用和意義從以下四個方面做簡要的論述：一、在顯微鏡技術(shù)中的應(yīng)用和意義微生物個體微小，必需借助顯微鏡才能觀看到，因此在微生物學(xué)的各項試驗技術(shù)中，顯微鏡就成為爭辯者不行缺少的工具。顯微鏡的種類很多， 依據(jù)其構(gòu)造，一般分為光學(xué)顯微鏡和非光學(xué)顯微鏡兩大類，在試驗室觀看微生物形態(tài)常用的顯微鏡，以光學(xué)顯微鏡最為常見。在顯微鏡技術(shù)中必不行少的是涂片、染色等技術(shù)，無論是在制片還是染色等過程中，防止雜菌的污染即無菌操作都是格外重要的，一旦被觀看的玻片

3、遭到雜菌污染，將使觀看結(jié)果受到嚴峻偏差和影響。因此在操作過程中為保證無菌操作應(yīng)留意：在試驗室觀看平板培育 物時，一般不宜開蓋觀看；檢驗結(jié)果，可以開蓋檢查。如取菌作涂片染色 或移植培育時。培育皿上下蓋可適度開縫，但不準完全揭開；涂片染色 時應(yīng)使用夾子夾持玻片，切勿用手直接拿玻片，以防感染細菌；用過的 玻片應(yīng)放置消毒液中或直接煮沸消毒，沖洗液也應(yīng)煮沸或消毒處理后再倒 掉以免污染環(huán)境。二、無菌操作技術(shù)在微生物試驗中，菌種的移值、接種和分別工作等，都要排解雜菌的 污染，才能獲得純的符合要求的微生物純培育體。為此，除嚴格按無菌操 作進展外，尚需要有一個無雜菌污染的工作環(huán)境。通常，可在酒精燈旁進 (接種箱

4、)或超凈工作臺；工作量 大的使用無菌室(接種室)；要求嚴格的可在無菌室內(nèi)再結(jié)合使用超凈工作臺。無菌操作技術(shù)包括無菌環(huán)境、無菌器材和無菌操作三個方面。無菌環(huán)境只是相對而言的，是指人們利用物理的方法或化學(xué)的方法，在某一可把握空間內(nèi)使微生物數(shù)量降低至最低限度，接近于無菌的一種空 間。而無菌室和無菌柜、超凈工作臺就可做到這樣的空間。無菌室是最常 用的無菌環(huán)境之一。無菌室的建筑設(shè)計應(yīng)考慮布局合理，使用便利，操作 安全以及造價適宜等條件。無菌柜的優(yōu)點是簡潔輕松體積小，易于滅菌消 毒，安全并可移動，但操作不便，適用于一般接種操作，尤其適用于致病 菌檢驗中陽性菌的接種、劃線等操作。超凈工作臺目前較常用，它是通

5、過 通入經(jīng)超細過濾的無菌空氣以維持其無菌狀態(tài)的。無菌器材是無菌技術(shù)的主要組成局部，微生物檢驗和試驗用器材可分為兩類：器材滅菌：但凡檢驗中使用的器材，能滅菌處理的必需滅菌， 如玻璃器皿包括注射器、吸管、滴管、三角瓶、試管等培育基、稀釋劑、無菌衣、口罩、膠管、乳膠頭。金屬器材如外科刀、剪、鑷子、針頭等，凡能包裹的，應(yīng)先用包裝紙包裹后，再進展滅菌。器材消毒：凡檢驗用器材無法滅菌處理的，使用前必需經(jīng)消毒處理，例如無菌室內(nèi)的凳、 試管架、天平、工作服等，這些雖然無法滅菌，但是可以消毒。消毒可用化學(xué)藥品熏蒸、噴灑或擦拭。上述的無菌環(huán)境條件只是相對而言，實際上不行能保持環(huán)境確實定無 菌。因此關(guān)鍵是要嚴格進展

6、正確的無菌操作。三、在純種分別技術(shù)中的應(yīng)用和意義在微生物學(xué)中，為了爭辯某種微生物的特性，必需把它們從混雜的微 生物群體中分別出來，從而獲得某一菌株的純培育物，這種獲得只含有某 一種或某一株微生物純培育的過程，成為微生物的分別與純化。為了獲得某種微生物的純培育物，一般是依據(jù)該微生物的特性，設(shè)計 適宜的培育基和培育條件，以利于該微生物的生長生殖，或參加某些抑制 因素，造成只利于此菌生長，而不利于其他菌生長的環(huán)境條件，從而淘汰 其他雜菌。然后再通過各種稀釋法，使所需的菌在固體培育基上形成單菌 落。固然，從微生物群體中經(jīng)分別后生長在平板上的單個菌落，并不能保 證肯定是純培育，還要經(jīng)過一系列的分別、純化

7、和鑒定，才能獲得所需要 的純菌株。常用的微生物分別純化的方法有：稀釋混合倒平板法、稀釋涂布平板法、平板劃線分別法、稀釋搖管法、液體培育基分別法、單細胞分別法、 選擇培育基法等。其中前三種方法最為常用，不需要特別的儀器設(shè)備，分 離純化效果好。四、在純種培育技術(shù)中的應(yīng)用和意義在微生物學(xué)試驗技術(shù)中，常需要用接種環(huán)把微生物純培育物，由一個器皿移接到另一個培育容器中進展培育。由于四周環(huán)境主要是空氣中， 存在著大量肉眼無法覺察的各種污染物，只要一翻開器皿，就可能會引起器皿內(nèi)的培育基或培育物，被環(huán)境中其他微生物所污染。因此，微生物菌種移接的全部操作，均應(yīng)在無菌環(huán)境下進展嚴格的無菌操作。將微生物的培育物或含有

8、微生物及可疑含有微生物的樣品移植到培育基上的操作技術(shù)稱之為接種。接種是微生物試驗及爭辯中的一項最根本的操作技術(shù)。無論微生物的分別、培育、純化或鑒定以及有關(guān)微生物的形態(tài)、 生理的試驗及觀看爭辯都必需進展接種，接種的關(guān)鍵要嚴格的無菌操作， 如操作不慎引起污染則試驗結(jié)果就不行靠，影響下一步工作的進展。因此無菌區(qū)，即接種時，管口和瓶口始終保持在火焰如酒精燈焰旁邊，進展嫻熟地移接種操作，以便保證微生物的純種培育。棉塞應(yīng)當(dāng)始終夾在手中，如掉落應(yīng)更換無菌棉塞 如不慎使棉塞觸及火焰著火，切勿用口吹， 應(yīng)在剛著火時快速塞入試管，因管內(nèi)氧氣缺乏很快熄滅，假設(shè)棉塞外端著火， 則可用手捏滅，或廢棄踩火后更換無菌棉塞。

9、接種液體培育物時應(yīng)特別留意勿使菌液濺在工作臺上或其他器皿上，以免造成污染，如有濺污，可用酒精棉球灼燒滅菌后，再用消毒液擦凈，凡吸過菌液的吸管或滴管應(yīng)馬上放入有消毒液的容器內(nèi)。此外，挑取和移接微生物純培育物用的接種環(huán)及接種針，應(yīng)承受易于快速加熱和冷卻的鎳鉻合金等金屬制備，使用時用火焰灼燒滅菌；轉(zhuǎn)移液體純培育物時，應(yīng)承受無菌吸管或無菌移液槍。接種和培育過程中必需保證不被其他微生物污染，因此，除工作環(huán)境要求盡 必需隨時留意保持微生物純培育物的純潔性，防止其他微生物雜菌的混入；在進展分別、轉(zhuǎn)接及培育微生物純培育物事，要承受嚴格的無菌操作技術(shù)，防止被其他微生物所污染。實際上，人工制造的無菌環(huán)境條件只是相對而言，不行能保證環(huán)境的 確定無菌。因此，在試驗過程中必需