PTEN在乳腺癌中的表達(dá)及其與轉(zhuǎn)移的關(guān)系

1、摘要】 目的 通過檢測 PTEN 基因在乳腺癌組織中的表達(dá)探討其臨床病理意義。方法 采用 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT PCR）檢測PTEN在40例乳腺癌中的表達(dá)。結(jié)果乳腺癌組織 與正常乳腺組織和癌旁組織PTEN的表達(dá)有顯著差異（PV0.01, PV0.05）。PTEN在早期浸 潤性癌和晚期浸潤性癌陽性表達(dá)率差異顯著（PV0.05）；在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組 檢出陽性率差異顯著（PV0.01）。結(jié)論PTEN表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征和生物學(xué)行為存 在密切關(guān)系；PTEN基因是乳腺癌細(xì)胞增生活躍的重要影響因素?！娟P(guān)鍵詞】 乳腺癌；癌基因；抑癌基因乳腺癌是我國死亡率較高的惡性腫瘤,其發(fā)生發(fā)展是一個多

2、基因、多階段的變化過程。其中 癌基因突變激活及抑癌基因失活起重要作用oPTEN基因為抑癌基因，其蛋白產(chǎn)物具有磷酸酶 活性，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和增殖活性。國外學(xué)者近年研究發(fā)現(xiàn)PTEN基因及其蛋白表達(dá)與一些惡 性腫瘤發(fā)生發(fā)展、生物學(xué)行為和預(yù)后有密切關(guān)系110本實驗擬采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反 應(yīng)（RT PCR）分析并研究乳腺癌組織及淋巴結(jié)中PTEN表達(dá)及其與乳腺癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系，為 乳腺癌診治提供臨床依據(jù)。1 材料與方法1.1 標(biāo)本及臨床病理資料 我院20062007年間乳腺外科收治手術(shù)切除女性乳腺癌標(biāo) 本60例，年齡4873 （平均57.8）歲。腫瘤直徑W2 cm者21例，25 cm者32例，5 cm 者7例。

3、浸潤性特殊癌2例（乳頭狀癌1例、黏液腺癌1例）；浸潤性非特殊癌51例（浸潤性 導(dǎo)管癌 42 例、浸潤性小葉癌 6 例、髓樣癌 2 例、硬癌 1 例）；早期浸潤性癌 7 例（早期浸潤 性導(dǎo)管癌6例、早期浸潤性小葉癌1例）；1期19例，11期32例，111期9例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 38例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例。另取20例年齡4570（平均55.7）歲女性乳腺癌根治術(shù)后癌 旁腺體組織（距腫瘤邊緣V 2 cm）和10例年齡4468 （平均53.4）歲乳腺良性腫瘤術(shù)后正常 腺體組織（距腫瘤邊緣1 cm）作對照組。標(biāo)本離體后立即置于-80C冰箱凍存。全部標(biāo)本均 經(jīng)病理診斷證實。病人術(shù)前均未接受過化療或放療。1.2

4、主要試劑 總RNA提取試劑盒（Trizol）、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒系Invitrogen產(chǎn)品均購自 大連Takara公司。按GenBank的（PTEN） EST序列設(shè)計引物，PTEN基因（具體由大連寶 生生物工程技術(shù)公司合成）上游引物：5 CAC AGA ATT CCA GAC ATG ACA GCC ATC ATC 3，下游弓I物：5 GTG GAT CCT CAT GGT GTT TTA TCC CTC TTG 3， 擴增片段為 1 209 bp2內(nèi)參Bactin 上游引物:5ACA CTG TGC CCA TCT ACG AGG3，下游引物： 5 AGG GGC CGG ACT CGT CAT

5、ACT 3，擴增片段為627 bpo PTEN 登錄號： NM058076o1.3方法 采用RT PCR方法。按照試劑盒說明書提取RNA后對提取物進(jìn)行含量及 純度分析。RNA濃度的測量OD260在0.40.6之間。OD260/OD280=2.1取24 p g RNA 進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，逆轉(zhuǎn)錄根據(jù)RT試劑盒（大連寶生生物技術(shù)公司）說明進(jìn)行。PTEN基因的PCR 擴增條件為：變性溫度94C，45 s；退火溫度55C，1 min；延伸溫度72C，2 min。 共35個循環(huán)，72C，10 min作終延伸。取PCR產(chǎn)物經(jīng)15 g/L瓊脂糖電泳，溴化乙錠染色， 紫外光下照相。B actin在所有RT PCR擴增

6、產(chǎn)物瓊脂糖電泳檢測結(jié)果中均為一條單獨 閃色區(qū)帶，避免了假陰性的發(fā)生；同時RT PCR擴增產(chǎn)物片段與預(yù)期大小相一致1, 2， 分析轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，反映特定基因的mRNA表達(dá)情況，證明PCR產(chǎn)物無假陽性發(fā)生。1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS11.0軟件包進(jìn)行率的x 2檢驗。2結(jié)果RTPCR擴增產(chǎn)物瓊脂糖電泳檢測結(jié)果1 209 bp處有一明亮的條帶為PTENPCR 產(chǎn)物（見圖 1），與文獻(xiàn)報道一致3，4。M： DNA分子標(biāo)記；N：正常乳腺組織；T1、T2 :乳腺癌組織;P1、P2:乳腺癌癌旁 組織圖1 RT PCR分析PTEN基因在乳腺癌組織中的表達(dá)乳腺癌的 PTEN 表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系 正常乳腺組織

7、組和癌旁組織組 PTEN 表達(dá)陽性率明顯高于乳腺癌組（PV0.05,PV0.01）。在早期浸潤性癌和晚期浸潤性癌中PTEN 陽性率差異顯著（PV0.05）。PTEN陽性表達(dá)率在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組差異顯著（PV0.01）（見表1）。表1乳腺癌病理類型，分級及轉(zhuǎn)移狀況與PTEN表達(dá)的相互關(guān)系3討論腫瘤發(fā)生與多個癌基因及抑癌基因異常表達(dá)有關(guān)。發(fā)現(xiàn)并研究癌基因和抑癌基因、了解 其產(chǎn)物在信號傳導(dǎo)通路中的作用,將有助于闡明癌變機制及尋找腫瘤藥物治療靶點。有研究 表明，PTEN基因不同程度地參與腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移26。PTEN （phosphatase and tension homologue de

8、leted on chromosome ten）為 Steck （1997 年） 發(fā)現(xiàn)并命名的具有磷酸酶活性的抑癌基因,其抑制酪氨酸磷酸化的作用,從而對細(xì)胞增殖和 細(xì)胞周期起調(diào)控作用5。PTEN失活則促進(jìn)腫瘤進(jìn)行性生長和腫瘤細(xì)胞增殖活性增加6。 PTEN負(fù)調(diào)控細(xì)胞周期及多種信號途徑，抑制細(xì)胞黏附、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、細(xì)胞衰老和 細(xì)胞凋亡等多種生理活動。PTEN基因突變在某些腫瘤中突變率高，但在多數(shù)腫瘤中突變率 不高，PTEN蛋白在多數(shù)腫瘤中有失表達(dá)或表達(dá)減少，提示存在翻譯或翻譯后水平的調(diào)控機 制。近年，國外學(xué)者較廣泛地研究了 PTEN基因及其蛋白產(chǎn)物在多種惡性腫瘤和正常組織中 的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)PT

9、EN蛋白表達(dá)與一些惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展，生物學(xué)行為和預(yù)后有密切關(guān)系， 陽性表達(dá)者多分化好、生長速率低、不易發(fā)生轉(zhuǎn)移和預(yù)后良好7， 8。本組資料發(fā)現(xiàn)， PTEN 蛋白在乳腺癌中表達(dá)率明顯低于正常乳腺組織及癌旁組織（PV0.05）,在早期浸潤性癌中 PTEN陽性率明顯高于晚期浸潤性癌（PV0.05）。區(qū)域淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移者陽性率明顯高于淋巴 結(jié)轉(zhuǎn)移者（PV0.05）。其結(jié)果與國外一些文獻(xiàn)報道相似9, 10，說明PTEN表達(dá)與乳腺癌 臨床病理特征，生物學(xué)行為和預(yù)后評估有密切關(guān)系。本實驗證明,PTEN基因表達(dá)是反映乳 腺癌發(fā)生發(fā)展、生物學(xué)行為和預(yù)后的重要生物學(xué)標(biāo)記物之一。癌基因的激活或抑癌基因的失 活或突變

10、是惡性腫瘤發(fā)生和發(fā)展的分子學(xué)基礎(chǔ)，因此檢測PTEN在乳腺癌中表達(dá)，可提高對 乳腺癌惡性表型判斷的準(zhǔn)確性，有助于深入了解腫瘤發(fā)生發(fā)展機制，并可為鑒別診斷、判斷 預(yù)后和基因治療提供依據(jù)。人們對PTEN的研究剛剛開始，尤其是其表達(dá)蛋白的研究，很多 問題需進(jìn)一步研究，如PTEN在腫瘤抑制及信號途徑中的功能，還需探討。同時，收集更多 的資料，定期隨訪，也是下一步應(yīng)用本研究結(jié)果為乳腺癌預(yù)后進(jìn)行評估的重點。 參考文獻(xiàn)：1金倩;氯地酊聯(lián)合激光治療座瘡158例療效觀察J;廣東醫(yī)學(xué);1997年10期2董新亭，李衛(wèi)莉，馬秀華;自擬粉刺消治療座瘡126例J;中國中醫(yī)藥科技;1999年06期3查旭山，陳修飏;尋常座瘡治

11、療體會J;江西中醫(yī)藥; HYPERLINK /xyfm/class/.2002 /xyfm/class/.2002 年 05 期4張懷亮，譚正輝，孫葉梅，李梅，俞玉芳，韓峰;3003例座瘡患者特征分析與控制對策J;中華醫(yī)學(xué)美學(xué)美容雜志; HYPERLINK http:/www.yixue58.Com/xyfm/class/.2002%e5%b9%b4 http:/www.yixue58.Com/xyfm/class/.2002年 06 期5劉勇，王冬梅;座瘡的藥物治療J;臨床醫(yī)藥實踐雜志;2003年09期6高宜云;座瘡從肝論治J;中醫(yī)藥臨床雜志;2004年03期7歐其平，林維山;中西醫(yī)結(jié)合治療

12、座瘡J；中華皮膚科雜志;2004年09期陳五一;座瘡辨治體會J;世界中醫(yī)藥; HYPERLINK /yisheng/main/index.php.2007 /yisheng/main/index.php.2007 年 03 期雷放;中藥熱敷治療座瘡有效J;新中醫(yī); HYPERLINK /book/main/index.php.1992%e5%b9%b4 /book/main/index.php.1992年 09 期10李東華;異維生素A酸治療座瘡J; /新醫(yī)學(xué);1993年10期11黃燦奇;針刺聯(lián)合中藥內(nèi)服外敷治療青少年座瘡臨床觀察D;南方醫(yī)科大學(xué);2011年12陳志彬;中醫(yī)綜合療法對女性座瘡患

13、者皮膚生理指標(biāo)影響研究D;廣州中醫(yī)藥大學(xué);2011 年13陳傳偉;針刺干預(yù)慢性疲勞綜合征的臨床及作用機理研究D;廣州中醫(yī)藥大學(xué);2010年14 Hamid Abdi;針刺對伊朗肥胖者的體重及抗熱休克蛋白27、60、65、70的影響D;北京中醫(yī)藥大學(xué); HYPERLINK /book/main/index.php.2010 /book/main/index.php.2010 年15陳玉騏;背俞穴刺絡(luò)放血治療座瘡的臨床研究D;廣州中醫(yī)藥大學(xué);2009年16張俊海;電針鎮(zhèn)痛的腦功能磁共振初步研究D;復(fù)旦大學(xué);2005年17龐瑩;座瘡的流行病學(xué)及與雄激素受體基因多態(tài)性的相關(guān)研究D;中國醫(yī)科大學(xué);2008年18申鵬飛；“醒腦開竅”針刺方法治療卒中后抑郁癥基礎(chǔ)與臨床療效及治療機制研究D;天津中醫(yī)學(xué)院; HYPERLINK /qikan/class/?150.html.2004 /qikan/class/?150.ht