免疫電泳實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、免疫電泳實(shí)驗(yàn)報(bào)告摘要：本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用火箭電泳、微量電泳、雙向免疫擴(kuò)散等方法測定抗體的效價(jià)。關(guān)鍵詞：抗體效價(jià)測定； 火箭電泳；微量電泳；雙向免疫擴(kuò)散前言免疫電泳 (immunoelectrophoresis) 的方法很多， 主要有單向免疫擴(kuò)散、 雙向擴(kuò)散電泳、 對流免疫電泳、微量免疫電泳、免疫火箭電泳、免疫固定電泳等幾種方法。其中比較常用方法有以下三種?；鸺庖撸?rocket immunoelectrophoresis ），該方法是在瓊脂板內(nèi)摻入適量的抗體，在電場的作用下定量的在含適量抗體的離子瓊脂中泳動(dòng)，當(dāng)走在前面的抗原遭到瓊脂板內(nèi)的抗體時(shí)，形成抗原體復(fù)合物而沉淀出來，走在后面的抗原繼續(xù)在電場的

2、作用下向正極泳動(dòng)，在向前泳動(dòng)過程中，遇到了前面抗原所沉淀的抗原抗體復(fù)合物，由于抗原的增加造成抗原過量時(shí)復(fù)合物沉淀溶解，并一同向正極移動(dòng)而進(jìn)入新的瓊脂板內(nèi)與未結(jié)合的抗體結(jié)合，有形成新的抗原抗體復(fù)合物沉淀出來，這樣不斷地沉淀溶解再沉淀，直到全部抗原與抗體結(jié)合，當(dāng)比例合適時(shí)，可在短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)錐形沉淀線，此沉淀線形似火箭，故稱火箭電泳，抗原含量越高所形成的火箭峰愈長，因此依據(jù)火箭峰的長度，與標(biāo)準(zhǔn)抗原比較精確地計(jì)算抗原的濃。微量電泳， 該方法的原理是不同蛋白質(zhì)顆粒所帶電荷不同，在同一電場中， 因泳動(dòng)速度不同而發(fā)生分離，用于抗原、抗體純度測定，以及臨床診斷。雙向免疫擴(kuò)散（ double immunodif

3、fuison ） , 根據(jù)出現(xiàn)沉淀線時(shí)抗體的最高稀釋度來計(jì)算抗體的效價(jià)，或者依據(jù)沉淀線的出現(xiàn)定性抗原，檢測疾病。2材料與方法2 1材料抗體，抗原，巴比妥鈉-HCl 緩沖液（ pH8.6， 0.4M ）， 1.5%瓊脂糖凝膠，7%醋酸，電泳儀，溫箱，玻璃板，打孔器等。22方法2 2 1火箭電泳法配制巴比妥鈉-HCl 緩沖液（ pH8.6 ，0.4M ）；制備 1.5%瓊脂糖凝膠，煮沸至完全溶解；取瓊脂糖凝膠約15ml ，置 55 oC 水浴中降溫，并加入抗體200 L ，共同孵育；將二者混勻，鋪火箭電泳板，放置冷凝倍比稀釋抗原抗體；電泳板打孔(6 孔 )，加入已稀釋的抗原 (約 10 L/ 孔

4、)；電泳 34h，電流： 30mA/ 塊， 電壓： 100120V ；待火箭電泳結(jié)束，用0.1%氨基黑染色 10min ， 7%醋酸脫色至條帶清晰。2 2 2 微量電泳法用移液管取煮沸的瓊脂糖凝膠鋪板（7.5 2.5cm)，共 2 塊，每塊約鋪3ml 凝膠 (雙擴(kuò)同樣方法，鋪3 塊 )；給微量電泳板打抗圓孔、抗體槽，并在抗原孔內(nèi)分別加入陽性抗原和陰性抗原( 約10 L) ；電泳 約4060min，(電壓： 46V/cm ；電流： 15mA/cm) ；電泳結(jié)束后，取出抗體槽的凝膠，加入15 L 抗體，置37 oC 溫箱過夜。2 2 3 雙向免疫擴(kuò)散法鋪 2塊板，同微量電泳；給雙擴(kuò)板打孔(梅花形

5、)，每板打 2組，一塊板中央孔加入未稀釋的抗原，每組周圍 6 孔加入倍比稀釋的抗體；置于 37 oC 溫箱孵育 2448hr ，測定抗體效價(jià)；另一塊板中央孔加入未稀釋的抗原，每組周圍6孔加入倍比稀釋的抗體。置于37 oC 溫箱孵育2448hr ，測定抗原效價(jià)。3結(jié)果3 1 火箭電泳法表：抗原濃度對應(yīng)的電泳峰值（cm）Ag(x)10.50.250.1250.061250.030625峰值（cm)1.751.551.41.3510.873 2 微量電泳法 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明， 1/16 抗原孔出現(xiàn)沉淀弧，說明了抗原在此濃度下與抗體反應(yīng)最為敏感。3 2雙向免疫擴(kuò)散法實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明靠陰性抗原處出現(xiàn)沉淀弧，表明

6、了陰性抗原與抗體反應(yīng)最為敏感。遇到失意傷心事，多想有一個(gè)懂你的人來指點(diǎn)迷津，因他懂你，會(huì)以我心，換你心，站在你的位置上思慮，為你排優(yōu)解難。一個(gè)人，來這世間，必須懂得一些人情事理，才能不斷成長。就像躬耕于隴畝的農(nóng)人，必須懂得土地與種子的情懷，才能有所收獲。一個(gè)女子，一生所求，莫過于找到一個(gè)懂她的人，執(zhí)手白頭，相伴終老。即使蘆花暖鞋，菊花枕頭，也覺溫暖；即使粗食布衣，陋室簡靜，也覺舒適，一句“懂你 ”,叫人無怨無悔，愿以自己的一生來交付。懂得是彼此的欣賞，是靈魂的輕喚，是惺惺相惜，是愛，是暖，是彼此的融化；是走一段很遠(yuǎn)的路，驀然回首卻發(fā)現(xiàn)，我依然在你的視線里；是回眸相視一笑的無言；是一條偏僻幽靜的小路，不顯山，不露水，路邊長滿你喜愛的花草，靜默無語卻馨香盈懷，而路的盡頭，便是通達(dá)你心靈的小屋瑟瑟嚴(yán)冬，窗外雪飄，絮絮自語說了這多，你可懂我了嗎？若你知曉，無需說話，只報(bào)一聲心靈的輕