醬腌菜檢測作業(yè)指導(dǎo)書

1、醬腌菜檢測作業(yè)指導(dǎo)書目 錄第一章水分的測定1其次章5第三章總酸的測定8第四章9第五章11第六章亞硝酸鹽和硝酸鹽的測定12第七章總砷的測定16第八章鉛的測定18第九章20第十章25第十一章沙門氏菌檢驗(yàn)29執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：GB5009.32022食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中水分的測定第一法直接枯燥法原理利用食品中水分的物理性質(zhì)，在101.3 kPa一個(gè)大氣壓，溫度101105下承受揮發(fā)方法測定樣品中枯燥減失的重量，包括吸濕水、局部結(jié)晶水和該條件下能揮發(fā)的物質(zhì)， 再通過枯燥前后的稱量數(shù)值計(jì)算出水分的含量。試劑和材料除非另有規(guī)定，本方法中所用試劑均為分析純。鹽酸優(yōu)級純、氫氧化鈉NaO優(yōu)級純、鹽酸溶液6mol/量

2、取50mL加水稀釋至100m6mol/稱取24g100m、海砂取用水洗去泥土的海砂或河砂，先用鹽酸煮沸0.5 h，用水洗至中性，再用氫氧化鈉0.5h105枯燥備用儀器和設(shè)備內(nèi)附有效枯燥劑感量為0.1mg分析步驟固體試樣：取干凈鋁制或玻璃制的扁形稱量瓶，置于 101105枯燥箱中，瓶蓋斜支于瓶邊，加熱 1.0h，取出蓋好，置枯燥器內(nèi)冷卻 0.5h，稱量，并重復(fù)枯燥至前后兩次質(zhì)量差不超過 2mg，即為恒重。將混合均勻的試樣快速磨細(xì)至顆粒小于2mm，不易研磨的樣品應(yīng)盡可能切碎，稱取210g試樣準(zhǔn)確至0.0001，放入此稱量瓶中，試樣厚度不超過 5mm，如為疏松試樣，厚度不超過10mm，加蓋，周密稱量

3、后，置101105枯燥箱中，瓶蓋斜支于瓶邊，枯燥 2h4h0.5h 后稱量。然后再放入1011051h0.5h操作至前后兩次質(zhì)量差不超過 2mg注：兩次恒重值在最終計(jì)算中，取最終一10g1011051.0h0.5h取510g試樣準(zhǔn)確至0.0001，置于蒸發(fā)皿中，用小玻棒攪勻放在沸水浴上蒸干，并隨時(shí)攪拌，擦去皿底的水滴，置101105枯燥箱中枯燥 4h 后蓋好取出，放入枯燥器內(nèi)0.5h4.11011051h操作。分析結(jié)果的表述試樣中的水分的含量按式1進(jìn)展計(jì)算。式中：X試樣中水分的含量，單位為克每百克g/100g)； m1g； m2 m3。水分含量1g/100g 時(shí)，計(jì)算結(jié)果保存三位有效數(shù)字；水分

4、含量1g/100g 時(shí)，結(jié)果保存兩位有效數(shù)字。周密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果確實(shí)定差值不得超過算術(shù)平均值的5%。其次法 減壓枯燥法原理40kPa53kPa 壓力后加熱至 605，承受減壓烘干方法去除試樣中的水分，再通過烘干前后的稱量數(shù)值計(jì)算出水分的含量。儀器和設(shè)備內(nèi)附有效枯燥劑、天平0.1 mg分析步驟試樣的制備：粉末和結(jié)晶試樣直接稱??；較大塊硬糖經(jīng)研缽粉碎，混勻備用。2g10g0.0001g試樣，放入真空枯燥箱內(nèi)，將真空枯燥箱連接真空泵，抽出真空枯燥箱內(nèi)空氣所需壓力一般為 40kPa 53kPa)，并同時(shí)加熱至所需溫度 605。關(guān)閉真空泵上的活塞，停頓抽氣，使真空枯燥箱內(nèi)保持肯定

5、的溫4h 后，翻開活塞，使空氣經(jīng)枯燥裝置緩緩?fù)ㄈ胫琳婵湛菰锵鋬?nèi)，待壓力恢復(fù)正常后再翻開。取出稱量瓶，放入枯燥器中0.5h 后稱量，并重復(fù)以上操作至前后兩次質(zhì)量差不2mg，即為恒重。分析結(jié)果的表述5。周密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果確實(shí)定差值不得超過算術(shù)平均值的10%。第三法 蒸餾法原理的食品，如油脂、香辛料等。試劑和材料甲苯或二甲苯化學(xué)純集餾出液備用。儀器和設(shè)備水分測定器：如圖1 所示帶可調(diào)電熱套。水分接收管容量5mL，最小刻度值 0.1mL，0.1mL。1.250 mL2.水分接收管，有刻度； 3.冷凝管。圖1 水分測定器0.1mg。分析步驟準(zhǔn)確稱取適量試樣應(yīng)使最終蒸出的水在 2

6、mL5 mL，但最多取樣量不得超過蒸餾瓶的2/，放入250 mL)75 m，連接冷凝管與水分接收管，從冷凝管頂端注入甲苯，裝滿水分接收管。加熱漸漸蒸餾，使每秒鐘的餾出液為兩滴，待大局部水分蒸出后，加速蒸餾約每秒鐘4 滴，當(dāng)水分全部蒸出后，接收管內(nèi)的水分體 10min 不變?yōu)檎麴s終點(diǎn)，讀取接收管水層的容積。分析結(jié)果的表述試樣中水分的含量按式2進(jìn)展計(jì)算。式中：XmL/100或按水在20的密度 20g/mLV接收管內(nèi)水的體積，單位為毫升 m試樣的質(zhì)量，單位為克g。以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保存三位有效數(shù)字。周密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果確實(shí)定差值不得超過算

7、術(shù)平均值的10%。第四法卡爾費(fèi)休法原理依據(jù)碘能與水和二氧化硫發(fā)生化學(xué)反響，在有吡啶和甲醇共存時(shí)，1mol1mol作用，反響式如下：C5H5N 2I+ C5H5NSO2+C5H5N+H2O+CH3OH2C5H5NHI+C5H6NSO4CH3卡爾費(fèi)休水分測定法又分為庫侖法和容量法 1:1，從而計(jì)量出被測物質(zhì)水的含量。試劑和材料卡爾費(fèi)休試劑、無水甲醇CH 4：優(yōu)級純 卡爾費(fèi)休水分測定儀、天平感量為0.1 m分析步驟卡爾費(fèi)休試劑的標(biāo)定容量法浸沒鉑電極參加10 mg水準(zhǔn)確至0.0001 gV?？栙M(fèi)休試劑的滴定度按式3計(jì)算：式中：T卡爾費(fèi)休試劑的滴定度，單位為毫克每毫升mg/ mL；M水的質(zhì)量，單位為毫

8、克mg； V滴定水消耗的卡爾費(fèi)休試劑的用量，單位為毫升mL。試樣前處理可粉碎的固體試樣要盡量粉碎，使之均勻。不易粉碎的試樣可切碎。試樣中水分的測定于反響瓶中加肯定體積的甲醇或卡爾費(fèi)休測定儀中規(guī)定的溶劑浸沒鉑電極用卡爾 溶解的試樣，應(yīng)承受對滴定杯進(jìn)展加熱或參加已測定水分的其他溶劑關(guān)心溶解后用卡爾費(fèi)休試劑滴定至終點(diǎn)。建議承受庫侖法測定試樣中的含水量應(yīng)大于10g，容量法應(yīng)大于100g。對于某些需要較長時(shí)間滴定的試樣，需要扣除其漂移量。漂移量的測定10min 后再滴定至終點(diǎn)，兩次滴定之間的單位時(shí)間內(nèi)的體積變化即為漂移量D。分析結(jié)果的表述固體試樣中水分的含量按式4，液體試樣中水分的含量按式進(jìn)展計(jì)算。式中

9、：X試樣中水分的含量，單位為克每百克g /100； V1滴定樣品時(shí)卡爾費(fèi)休試劑體積，單位為毫升 T卡爾費(fèi)休試劑的滴定度，單位為克每毫升g/m； M樣品質(zhì)量，單位為克g；V2 液體樣品體積，單位為毫升mL； D漂移量，單位為毫升每分鐘mL/mi； t滴定時(shí)所消耗的時(shí)間，單位為分鐘液體樣品的密度，單位為克每毫升g/mL)。水分含量1g/100g1g/100g保存兩位有效數(shù)字。周密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果確實(shí)定差值不得超過算術(shù)平均值的10%。執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：GB12457-2022食品中氯化鈉的測定補(bǔ)充：SB/T102131994醬腌菜理化檢驗(yàn)方法試劑硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液C(AgNO3)=0.10

10、00mol/lGB601鉻酸鉀指示劑100g/：稱取10g鉻酸鉀用少量水溶解后定容至100m。樣品處理樣品經(jīng)切碎、研磨、混合均勻后，稱取5.000g10.000g250ml50ml80ml100ml200ml，然后用濾紙過濾，此濾液為樣品稀釋液，供測定用。測定準(zhǔn)確吸取稀釋液 2.00ml50ml，加 100g/l 鉻酸鉀指示劑0.5ml0.1000mol/lV。計(jì)算式中：X2樣品中食鹽以NaCl 計(jì)含量，g/100mlC硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液實(shí)際濃度，mol/l； V樣品耗用硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，ml； V0空白耗用硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，ml；0.0585與 1.00ml 硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 C(Ag

11、NO3)=1.000mol/l相當(dāng)?shù)穆然c的重量，g；W樣品質(zhì)量，g； S樣品稀釋液體積，ml。允許誤差：0.20g/100gGB/T5009.512022原理豆制品中含有多種有機(jī)酸，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，以乳酸計(jì)算。試劑氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液C=0.050mol/、酚酞指示液稱取0.50g酚酞用乙醇950ml儀器磁力攪拌器、酸度計(jì)分析步驟試樣處理5.0g10.0g150ml80ml泡 0.5h100ml酸度計(jì)法10.1ml20.0ml150ml80ml氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至pH8.290.0ml100.0ml酚酞指示液滴定法10.1ml20.0ml150ml50ml33氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至初現(xiàn)粉

12、紅色，0.5min 不褪色即為終點(diǎn)。同時(shí)量取 60.0ml70.0ml水做試劑空白試驗(yàn)。結(jié)果計(jì)算 見式1.式中： X試樣中的酸度以乳酸計(jì)，單位為克每百克V1測定用試樣消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，單位為毫升 V2試劑空白消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，單位為毫升ml； V3滴定用試樣溶液的體積，單位為毫升ml； C氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液實(shí)際濃度看，單位為摩爾每升mol/m；0.09與 1.00ml 氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液(C=1.000mol/l克gm試樣質(zhì)量，單位為克g計(jì)算結(jié)果保存兩位有效數(shù)字。周密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果確實(shí)定差值不得超過算術(shù)平均值的5.SB/T102131994一

13、、復(fù)原糖的測定試劑15g0.05g1000ml50g54g4g1000ml1g/10烘箱中烘至恒重的無水葡萄糖1.0000g放入100ml1000ml5ml，用蒸餾水稀釋至刻度。樣品處理樣品經(jīng)切碎、研磨、混合均勻后，稱取5.000g10.000g250ml50ml80ml100ml200ml，然后用濾紙過濾，此濾液為樣品稀釋液，供測定用。操作空白滴定取斐林氏甲、乙液各5.00ml150ml10ml9ml 1g/l15min2min30s3s4s空白滴定，預(yù)備滴定，正式滴定的速度均應(yīng)保持全都的速度勻速滴入 1g/l 葡萄糖液，至藍(lán)紫色消逝即為終點(diǎn)。溶液沸騰后標(biāo)準(zhǔn)糖液的耗用量應(yīng)把握0.5ml1ml

14、A。預(yù)備滴定5.00ml150ml10ml1.00ml，估量數(shù)1g/l熱，沸騰30s 后，以3s4s1g/l沸騰前后共耗用標(biāo)準(zhǔn)糖液的毫升數(shù)。正式滴定5.00ml150ml10ml1.00ml，再用糖滴定管參加比預(yù)備滴定耗用量少0.5ml 左右的 1g/l30s3s4s1g/l終點(diǎn)。樣品稀釋液沸騰后，標(biāo)準(zhǔn)糖液的耗用量必需把握在0.5ml1ml 之內(nèi)，否則應(yīng)重做。記錄沸騰前后共耗用標(biāo)準(zhǔn)糖液的毫升數(shù)B。計(jì)算式中：X5樣品中復(fù)原糖的含量，g/100g； A1g/lml；B1g/lml；C1ml 1g/l 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液的含糖量； W所用稀釋液相當(dāng)樣品重量，g。允許誤差：0.05g/100ml。二、全糖的

15、測定試劑69.3g1000ml。346g100g1000ml。1次甲基藍(lán)指示劑、200g/l 氫氧化鈉溶液、100g/l 磷酸氫二鈉溶液、6mol/l 鹽酸溶液、200g/l2g/l20V/V乙醇溶液配制斐林氏溶液的標(biāo)定：在分析天平上準(zhǔn)確稱取經(jīng)烘干冷卻的分析純葡萄糖0.4000g，用蒸250ml2.5ml150ml20ml，置電爐上加1色消逝鮮紅色為終點(diǎn)。正式滴定時(shí)，先參加比預(yù)滴定時(shí)少0.5ml1ml 的葡萄糖溶液，置電爐上煮沸 2min，加甲基藍(lán)指示劑1 滴，連續(xù)用葡萄糖溶液滴定至終點(diǎn)。按下式計(jì)算其濃度：式中：A5ml 斐林溶液甲、乙液相當(dāng)于葡萄糖的克數(shù)；W葡萄糖的重量，g； V滴定時(shí)消耗葡

16、萄糖溶液的體積，ml。操作3.0004.000g200ml200g/ml15ml20ml止，并參加 15ml20ml100g/l 硫酸鈉或磷酸氫二鈉溶液。至不再產(chǎn)生沉淀為止，加水至刻度，搖勻，過濾。取濾液50m150ml6ml/l鹽酸10ml在7 1水浴中加熱2g/l1200g/l100ml按標(biāo)定斐林溶液甲、乙液的方法，用樣品制備液替代葡萄糖溶液，測定樣品中總糖。計(jì)算X6樣品中全糖的含量以葡萄糖計(jì) W樣品重量，g； V滴定時(shí)消耗樣品溶液的量，ml；允許誤差：0.5g/100ml.留意事項(xiàng)檢驗(yàn)方法中，所用試劑除特別注明者外均為分析純。其平均值作為分析結(jié)果。GB/T5009.342022其次法 蒸

17、餾法原理試樣中的二氧化硫含量。本法適用于色酒及葡萄糖糖漿、果脯。試劑鹽酸1:1：濃鹽酸用水稀釋1倍。乙酸鉛溶液20g/：稱取2g乙酸鉛，溶于少量水中并稀釋至100m。碘標(biāo)準(zhǔn)溶液C(1/2I2)=0.010mol/l:將碘標(biāo)準(zhǔn)溶液0.100mol/l用水稀釋 10 倍淀粉指示液10g/l1g100ml2min，放冷，備用，此溶液應(yīng)臨用時(shí)配。儀器全玻璃蒸餾器、碘量瓶、酸式滴定管分析步驟試樣處理5.00g試樣量可視含量凹凸而定5.0ml 10.0ml500ml測定蒸餾：將稱好的試樣置入圓底蒸餾燒瓶中，參加250ml 水，裝上冷凝管，冷凝管下端應(yīng)插入碘量瓶中的25ml乙酸鉛20g/吸取液中，然后在蒸餾

18、瓶中參加10ml鹽酸1:，馬上蓋塞，加熱蒸餾。當(dāng)蒸餾液約 200ml1min。用少量蒸餾水沖洗插入乙酸鉛溶液的裝置局部。在檢測試樣的同時(shí)要做空白試驗(yàn)。滴定：向取下的碘量瓶中依次參加10ml1ml淀粉指示液10g/用碘標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液0.010mol/l30s計(jì)算試樣中的二氧化硫總含量按下式進(jìn)展計(jì)算。式中：X試樣中的二氧化硫總含量，單位為克每千克g/k； A滴定試樣所用碘標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液0.010mol/的體積，單位為毫升m； B滴定試劑空白所用碘標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液0.010mol/的體積，單位為毫升 m試樣質(zhì)量，單位為克g0.0321mlC(1/2I2)=1.0mol/l相當(dāng)?shù)亩趸虻馁|(zhì)量，單位為克g。G

19、B 5009.332022分光光度法原理亞硝酸鹽承受鹽酸萘乙二胺法測定，硝酸鹽承受鎘柱復(fù)原法測定。酸鹽，測得亞硝酸鹽總量，由此總量減去亞硝酸鹽含量，即得試樣中硝酸鹽含量。試劑和材料除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純。水為 GB/T 6682 規(guī)定的二級水或去離子水。亞鐵氰化鉀K4Fe(CN)3H2。乙酸鋅Zn(CH3COO)2H2。冰醋酸CH3COO。硼酸鈉Na2B4O10H2。2.5 鹽酸1.19g/m。2.6 氨水25%。(C6H7NO3。(C12H14N2HC。亞硝酸鈉NaNO。硝酸鈉NaNO。鋅皮或鋅棒。硫酸鎘。亞鐵氰化鉀溶液(106g/L)：稱取 106.0g 亞鐵氰化鉀2.1

20、1000mL。2.14(220g/L220.0g乙酸鋅2.，先加30mL冰醋酸2.1000mL。(50g/L5.0g硼酸鈉2.，溶于100mL熱水中，冷卻后備用。氨緩沖溶液pH9.9.7：量取30mL鹽酸2.5，加100mL水，混勻后加65mL水2.，再加水稀釋至1000m，混勻。調(diào)整pH至9.9.。氨緩沖液的稀釋液：量取50 mL氨緩沖溶液2.1，加水稀釋至500m，混勻。鹽酸(0.1mol/L5mL600mL。對氨基苯磺酸溶液4g/L：稱取0.對氨基苯磺酸2.，溶于100 鹽酸中，置棕色瓶中混勻，避光保存。鹽酸萘乙二胺溶液2g/L：稱取0.2g鹽酸萘乙二胺2.，溶于100mL 勻后，置棕色

21、瓶中，避光保存。200g/m0.100于1112500mL5.0g/m5.00m容量瓶中，加水稀釋至刻度。硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液20g/m，以亞硝酸鈉計(jì)：準(zhǔn)確稱取0.1232 g于枯燥恒重的硝酸鈉，加水溶解，移于入500mL 容量瓶中，并稀釋至刻度。硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液g/m：臨用時(shí)吸取硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液2.50m，置于100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度。儀器和設(shè)備天平感量為0.1 mg和1 m鎘柱海綿狀鎘的制備：投入足夠的鋅皮或鋅棒于500mL 硫酸鎘溶液(200g/L)中，經(jīng)過 3h4h，當(dāng)其中的鎘全部被鋅置換后，用玻璃棒輕輕刮下，取出剩余鋅棒，使鎘沉底， 傾去上層清液，以水用傾瀉法屢次洗滌，然后移入組織

22、搗碎機(jī)中，加500mL 水，搗碎約 2s，2040鎘柱的裝填：如圖2。用水裝滿鎘柱玻璃管，并裝入2cm 高的玻璃棉做墊，將玻璃棉壓向柱底時(shí)，應(yīng)將其中所包含的空氣全部排出，在輕小扣擊下參加海綿狀鎘至 8cm10cm 高，上面用 1cm 高的玻璃棉掩蓋，上置一貯液漏斗，末端要穿過橡皮塞與鎘柱玻璃管25mL 酸式滴定管代用，但過柱時(shí)要留意始終保持25mL 鹽酸(0.1mol/L)洗滌，再以水洗兩次，每次25mL，鎘柱不用時(shí)用水封蓋，隨時(shí)都要保持水平面在鎘層之上，不得使鎘層夾有氣泡。鎘柱每次使用完畢后，應(yīng)先以25mL 鹽酸0.1 mol/L洗滌，再以水洗兩次，每25mL，最終用水掩蓋鎘柱。鎘柱復(fù)原效率

23、的測定：吸取20mL5mL 氨緩沖液的稀釋 5mL10.0mL10g 50mL4.40.00mL0.20mL0.40mL0.60mL0.80mL1.00mL”98%為符合要求。復(fù)原效率計(jì)算復(fù)原效率按式2進(jìn)展計(jì)算。式中：X復(fù)原效率，%； A測得亞硝酸鈉的含量，單位為微克g； 10測定用溶液相當(dāng)亞硝酸鈉的含量，單位為微克分析步驟試樣的預(yù)處理穎蔬菜、水果：將試樣用去離子水洗凈，晾干后，取可食部切碎混勻。將切碎的樣品用四分法取適量，用食物粉碎機(jī)制成勻漿備用。如需加水應(yīng)記錄加水量。提取稱取準(zhǔn)確至0.01制成勻漿的試樣如制備過程中加水，應(yīng)按加水量折算，置于50mL燒杯中，加12.5mL飽和硼砂溶液2.1，

24、攪拌均勻，以70左右的水約300mL將500mL15min，取出置冷水浴中冷卻，并放置至室溫。提取液凈化5mL 亞鐵氰化鉀溶液2.13,搖勻,再參加 5mL 乙酸鋅溶液2.1430min,除去上層脂肪,上清液用濾紙過濾,30mL,濾液備用。亞硝酸鹽的測定40.0mL50mL0.00mL0.20mL0.40mL0.60mL、0.80mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL0.0、1.0 2.3.4.5.7.10.12.亞硝酸鈉，分別置50mL2mL2.13mi5min后各參加1mL(2.202cm538nm劑空白。硝酸鹽的測定鎘柱復(fù)原25mL2.17沖洗鎘柱，流速把握在3mL

25、/min5mL/min以滴定管代替的可把握在2mL/mi3mL/mi。吸取20mL濾液50mL燒杯中，加5mL氨緩沖溶液2.15mL 水置換柱內(nèi)留存的樣液。100mL20mL，洗液一并收集于同一容量瓶中，加水至刻度，混勻。亞硝酸鈉總量的測定吸取10mL20mL 復(fù)原后的樣液于50mL11.40.00mL0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL”起依法操作。分析結(jié)果的表述亞硝酸鹽含量計(jì)算亞硝酸鹽以亞硝酸鈉計(jì)的含量按式3進(jìn)展計(jì)算。式中： X1試樣中亞硝酸鈉的含量，單位為毫克每千克 A1測定用樣液中亞硝酸鈉的質(zhì)量，單位為微克g；m試樣質(zhì)量，單位為克； V測定用樣液體積，單

26、位為毫升m； V0試樣處理液總體積，單位為毫升m以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示硝酸鹽含量的計(jì)算硝酸鹽以硝酸鈉計(jì)的含量按式4進(jìn)展計(jì)算。式中： X2試樣中硝酸鈉的含量，單位為毫克每千克mg/k； A2經(jīng)鎘粉復(fù)原后測得總亞硝酸鈉的質(zhì)量，單位為微克 m試樣的質(zhì)量，單位為克； 1.232亞硝酸鈉換算成硝酸鈉的系數(shù)； V2測總亞硝酸鈉的測定用樣液體積，單位為毫升m； V0試樣處理液總體積，單位為毫升mL； V3經(jīng)鎘柱復(fù)原后樣液總體積，單位為毫升m； V4經(jīng)鎘柱復(fù)原后樣液的測定用體積，單位為毫升m；X1由式計(jì)算出的試樣中亞硝酸鈉的含量，單位為毫克每千克mg/k。以重復(fù)性條件下獲得的兩次

27、獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示周密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果確實(shí)定差值不得超過算術(shù)平均值的10%。執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：GB/T5009.112022執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：GB 5009.122022其次法氫化物原子熒光光譜法原理試樣經(jīng)酸熱消化后，在酸性介質(zhì)中，試樣中的鉛與硼氫化鈉(NaBH4)或硼氫化鉀(KBH4) 反響生成揮發(fā)性鉛的氫化物(PbH4化，在特制鉛空心陰極燈照耀下，基態(tài)鉛原子被激發(fā)至高能態(tài)；在去活化回到基態(tài)時(shí)出特征波長的熒光，其熒光強(qiáng)度與鉛含量成正比，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)系列進(jìn)展定量。試劑和材料硝酸+高氯酸混合酸(9+1900mL100mL，混勻。鹽酸(1+1250mL250mL 水中，混勻。草酸溶液(

28、10 g/L1.0g100mL，混勻。鐵氰化鉀K3Fe(CN)6溶液(100g/L10.0g100mL，混勻。氫氧化鈉溶液(2g/L2.0g1L 水中，混勻。硼氫化鈉(NaBH4)溶液(10g/L5.0g500 mL 氫氧化鈉溶液(2g/L)中，混勻，臨用前配制。鉛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏液(1.0mg/mL)。鉛標(biāo)準(zhǔn)使用液(1.0g/mL)：準(zhǔn)確吸取鉛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏液(10.7)，逐級稀釋至 1.0g/mL。儀器和設(shè)備原子熒光光度計(jì)、鉛空心陰極燈、電熱板、天平感量為1mg分析步驟試樣消化濕消解：稱取固體試樣0.22g或液體試樣2.00或m10.00或m均準(zhǔn)確到0.00150m100mL錐形瓶2. 5mL10mL2

29、0 mL0.5mL1.0mL25mL2.20.5mL酸溶液2.30.5mL，搖勻，再參加鐵氰化鉀溶液2.41.0 mL，用水準(zhǔn)確稀釋定容至25mL30min標(biāo)準(zhǔn)系列制備在25mL2.0.00m0.125m0.25m0.50m 0.75mL、1.00mL、1.25mL(各相當(dāng)于鉛濃度 0.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、30.0ng/mL、40.0ng/mL、50.0ng/mL0.5mL 鹽酸2.2和 0.5mL草酸溶液2.3搖勻，再參加鐵氰化鉀溶液2.41.0mL，用水稀釋至該度，搖勻。放置30min 后待測。測定儀器參考條件負(fù)高壓：323V；鉛空心陰極

30、燈燈電流：75mA；原子化器：爐溫 750800，爐高 8mm； 延遲時(shí)間：0.0s；測量方式：標(biāo)準(zhǔn)曲線法；讀數(shù)方式：峰面積；進(jìn)樣體積：2.0mL。測量方式設(shè)定好儀器的最正確條件，逐步將爐溫升至所需溫度，穩(wěn)定10min20min 后開頭測量：試樣測量，分別測定試試樣中鉛含量按式2進(jìn)展計(jì)算。試中：X 單位為毫克每千克或毫克每升mg/kg或 c1試樣消化液測定濃度，單位為納克每毫升ng/m； c0試劑空白液測定濃度，單位為納克每毫升ng/m； V試樣消化液定量總體積，單位為毫升m； m試樣質(zhì)量或體積，單位為克或毫升g或mL。以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保存兩位有效數(shù)字

31、。周密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果確實(shí)定差值不得超過算術(shù)平均值的10%。執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：GB4789.32022 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群計(jì)數(shù)設(shè)備和材料除微生物試驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培育設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：恒溫培育箱36 1 、 冰箱2 5、恒溫水浴箱46 1 、天平量 0.1 1 m具 0.01 mL刻度、10 m具 0.1 mL刻度或微量移液器及吸頭、無菌錐形瓶容量 500 mL、無菌培育皿直徑 90 mm、pH計(jì)或 pHpH培育基和試劑月桂基硫酸鹽胰蛋白胨Lauryl Sulfate Tryptose，LST肉湯：見附錄 AA.1?；途G乳糖膽鹽Brilliant

32、Green Lactose Bile，BGLB肉湯：見附錄 AA.2。結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂Violet Red Bile AgaVRB：見附錄A中 A.。磷酸鹽緩沖液：見附錄 AA.4。無菌生理鹽水：見附錄 AA.5。無菌 1 mol/L NaOH：見附錄 AA.6。無菌 1 mol/L HCl：見附錄 AA.7。第一法大腸菌群MPN計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)程序大腸菌群MPN1。1 大腸菌群 MPN操作步驟樣品的稀釋固體和半固體樣品：稱取 25 g 樣品,放入盛有 225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi),8000 r/min10000 r/min 均質(zhì) 1 min2 min,或放入盛有 225

33、mL 磷1min2min，制成 1:10 的樣品勻液。液體樣品：以無菌吸管吸取 25 mL 樣品置盛有 225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠1:10 的樣品勻液。樣品勻液的 pH6.57.51mol/LNaOH1mol/LHCl 調(diào)整。用 1mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1m9mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌試管中留意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面管或換用 11 mL1:100 的樣品勻液。依據(jù)對樣品污染狀況的估量1 次，換用 1 支 1 mL 無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢，全15 min。初發(fā)酵試驗(yàn)每個(gè)樣品，選擇3個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度的樣

34、品勻液液體樣品可以選擇原液，每個(gè)稀3LST1mL1 mL，則用雙料LST肉湯36 1 培育24 2 24 2 h產(chǎn)氣者進(jìn)展復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)，如未產(chǎn)氣則連續(xù)培育至48 h2 h，產(chǎn)氣者進(jìn)展復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)。未產(chǎn)氣者為大腸菌群陰性。復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)用接種環(huán)從產(chǎn)氣的LST1BGLB管中，36 148 h2 h，觀看產(chǎn)氣狀況。產(chǎn)氣者，計(jì)為大腸菌群陽性管。大腸菌群最可能數(shù)MPN的報(bào)告按6.3確證的大腸菌群LST陽性管數(shù)，檢索MPN表見附錄B，報(bào)告每m大腸菌群的MPN其次法 大腸菌群平板計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)程序大腸菌群平板計(jì)數(shù)法的檢驗(yàn)程序見圖2。8操作步驟8.1樣品的稀釋6.18.2平板計(jì)數(shù)2大腸菌群平板計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)程序2321mL。

35、1 mL15 mL20 mL46 的結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂VRBA約傾注于每個(gè)平皿中。留神旋轉(zhuǎn)平皿，將培育基與樣液充分混勻，待瓊脂凝固后，再加3 mL4 mLVRBA36 118 h24 h。平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在 15 CFU150 CFU 之間的平板，分別計(jì)數(shù)平板上消滅的典型和可疑大腸0.5mm證明試驗(yàn)從 VRBA10BGLB 肉湯管內(nèi)，36 1 培育 24h48h，觀看產(chǎn)氣狀況。凡 BGLB 肉湯管產(chǎn)氣，即可報(bào)告為大腸菌群陽性。大腸菌群平板計(jì)數(shù)的報(bào)告經(jīng)最終證明為大腸菌群陽性的試管比例乘以 8.3 中計(jì)數(shù)的平板菌落數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)，即為每gmL樣品中大腸菌群數(shù)。例：10-4 樣品稀釋

36、液 1mL，在VRBA10010 個(gè)接種BGLB6106/1104 /mL=6.105CFU/m。A標(biāo)準(zhǔn)性附錄培育基和試劑月桂基硫酸鹽胰蛋白胨LST肉湯成分胰蛋白胨或胰酪胨20.0 g氯化鈉5.0 g乳糖5.0 g磷酸氫二鉀K2HPO42.75 g磷酸二氫鉀KH2PO42.75 g月桂基硫酸鈉0.1 g蒸餾水1 000 mLpH 6.80.2制法將上述成分溶解于蒸餾水中，調(diào)整 pH。分裝到有玻璃小倒管的試管中，每管 10 mL。12115 min。煌綠乳糖膽鹽BGLB肉湯成分蛋白胨10.0 g乳糖10.0 g牛膽粉oxgall或oxbile溶液200 mL0.1%煌綠水溶液13.3 mL蒸餾水

37、800 mLpH 7.20.1制法500 mL200 mL20.0 g膽粉溶于200 mL蒸餾水中，調(diào)整pH至7.7.，用蒸餾水稀釋到975 m，調(diào)整pH，0.113.3 mL1 000 mL，用棉花過濾后，分裝到有玻璃10 mL。12115 min。結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂VRBA成分蛋白胨7.0g酵母膏3.0g乳糖10.0g氯化鈉5.0g31.5g中性紅0.03g結(jié)晶紫0.002g瓊脂15g18g蒸餾水1 000 mLpH 7.40.1制法將上述成分溶于蒸餾水中，靜置幾分鐘，充分?jǐn)嚢?，調(diào)整pH。煮沸 2 min，將培育基冷45 50 傾注平板。使用前臨時(shí)制備，不得超過3 h。磷酸鹽緩沖液成分磷

38、酸二氫鉀KH2PO434.0 g蒸餾水500 mLpH 7.2制法34.0 g500 mL175 mL1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)整pH1 000 mL1.25mL1000mL，分裝于適宜容器中，121 高15 min。無菌生理鹽水成分氯化鈉8.5 g蒸餾水1000 mL制法8.51 000 mL12115 min。1mol/L NaOH成分NaOH40.0 g蒸餾水1000 mL制法40 g1 000 mL12115 min。1 mol/L HCl成分HCl90 mL蒸餾水1 000 mL制法90 mL1 000 mL，12115 min。B標(biāo)準(zhǔn)性附錄大腸菌群最可能數(shù)MPN檢索表B.1 大腸

39、菌群最可能數(shù)MPN檢索表gmL檢樣中大腸菌群最可能數(shù)MPNB.1。B.1 大腸菌群最可能數(shù)MPN檢索表執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：GB4789.22022 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測定1 設(shè)備和材料除微生物試驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培育設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：361 30125461、感量為0.11m具 0.01mL刻度10m具0.1 mL 刻度容量250m、500mL、無菌培育皿直徑90 m、pH計(jì)或pH比色管或周密pH和菌落計(jì)數(shù)器培育基和試劑平板計(jì)數(shù)瓊脂培育基：見附錄 A 中 A.1。磷酸鹽緩沖液：見附錄 AA.2。無菌生理鹽水：見附錄 AA.3。檢驗(yàn)程序1。圖 1 菌落總數(shù)的檢驗(yàn)程序操作步驟樣

40、品的稀釋固體和半固體樣品：稱取 25 g 樣品置盛有 225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000 r/min10000 r/min 均質(zhì) 1 min2 min，或放入盛有 225 mL 稀釋液1 min2 min，制成 1:10 的樣品勻液。液體樣品：以無菌吸管吸取 25mL 樣品置盛有 225mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠中，充分混勻，制成 1:10 的樣品勻液。用 1 mL1:101 mL，沿管壁緩慢注于盛有 9mL 稀釋液的無菌試管中留意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面，振搖試管或換用11:100 的樣品勻液。按 6.1.3 操作程序

41、，制備 10 倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用 1 次1 mL 無菌吸管或吸頭。2 個(gè)3液體樣品可包括原液，在進(jìn)展10 倍遞增稀釋時(shí)，吸取1 mL兩個(gè)平皿。同時(shí)，分別吸取 1 mL 空白稀釋液參加兩個(gè)無菌平皿內(nèi)作空白比照。準(zhǔn)時(shí)將 15mL20mL 冷卻至 46可放置于 46 1 恒溫水浴箱中保溫傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。培育待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36 148 h2 h。水產(chǎn)品 30 1 培育 72 h3 h。假設(shè)樣品中可能含有在瓊脂培育基外表布滿生長的菌落時(shí)，可在凝固后的瓊脂外表掩蓋一薄層瓊脂培育基約4 m，凝固后翻轉(zhuǎn)平板，按6.2.1條件進(jìn)展培育。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位c

42、olony-forming units，CFU表示。選取菌落數(shù)在 30 CFU300 CFU30 CFU300 CFU應(yīng)承受兩個(gè)平板的平均數(shù)。其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長時(shí)，則不宜承受，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板 2，代表一個(gè)平板菌落數(shù)。當(dāng)平板上消滅菌落間無明顯界限的鏈狀生長時(shí)，則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù)。結(jié)果與報(bào)告菌落總數(shù)的計(jì)算方法假設(shè)只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均gmL樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。假設(shè)有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按公式1計(jì)算：式中：N樣品中菌落數(shù)；C平板含適宜范圍菌落數(shù)的平板菌落數(shù)之和； n1第一稀釋度低稀釋倍數(shù)平板個(gè)

43、數(shù)； n2其次稀釋度高稀釋倍數(shù)平板個(gè)數(shù)；d稀釋因子第一稀釋度。假設(shè)全部稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于 300 CFU，則對稀釋度最高的平板進(jìn)展計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為多不行計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。假設(shè)全部稀釋度的平板菌落數(shù)均小于 30CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。假設(shè)全部稀釋度包括液體樣品原液1 乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。假設(shè)全部稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30 CFU300 CFU30 CFU300 CFU30 CFU300 CFU菌落總數(shù)的報(bào)告菌落數(shù)小于 100 CFU菌落數(shù)大于或等于 100CFU 時(shí)，第 32 位數(shù)字，后面用 0 代替位數(shù)；也可用 10 的指

44、數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，承受兩位有效數(shù)字。假設(shè)全部平板上為集中菌落而無法計(jì)數(shù)，則報(bào)告菌落集中。假設(shè)空白比照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。稱重取樣以 CFU/g 為單位報(bào)告，體積取樣以 CFU/mL 為單位報(bào)告。A標(biāo)準(zhǔn)性附錄培育基和試劑平板計(jì)數(shù)瓊脂plate count agar，PCA培育基成分胰蛋白胨5.0 g酵母浸膏2.5 g葡萄糖1.0 g瓊 脂15.0 g蒸餾水1000 mLpH 7.00.2制法將上述成分加于蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)整pH。分裝試管或錐形瓶，121 高壓滅菌15 min。磷酸鹽緩沖液成分磷酸二氫鉀KH2PO434.0 g蒸餾水500 mLpH 7.2

45、制法34.0 g500 mL175 mL1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)整pH1 000 mL1.25mL1000mL，分裝于適宜容器中，121 高15 min。磷酸鹽緩沖液成分磷酸二氫鉀KH2PO434.0 g蒸餾水500 mLpH 7.2制法34.0 g500 mL175 mL1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)整pH1 000 mL1.25mL1000mL，分裝于適宜容器中，121 高15 min。無菌生理鹽水成分氯化鈉8.5 g蒸餾水1 000 mL制法8.51 000 mL12115 min。執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：GB4789.42022 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)設(shè)備和材料除微生物試驗(yàn)

46、室常規(guī)滅菌及培育設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：冰箱25、恒溫培育箱36 1 ，421 平感量0.1 、無菌錐形瓶容量500 m，250 m1 m具 0.01 mL刻度10m具0.1mL刻度直徑90mm、無菌試管3 m50 m、10 m75 mpH計(jì)或pH比色管或周密pH試紙、全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)培育基和試劑BPWAA.1TTB增菌液見附錄 AA.2、亞硒酸鹽胱氨酸SC增菌液見附錄 AA.3、亞硫酸鉍BS瓊脂見附錄 AA.4、HEA 中 A.5、木糖賴氨酸脫氧膽鹽XLD瓊脂見附錄 A 中 A.6、沙門氏TSI瓊脂見附錄 AA.7A 中 A.8pH7.2AA.9KCN培育基見附錄 AA.10、賴

47、氨酸脫羧酶試驗(yàn)培育基見附錄 AA.11AA.12-DONPG培育基見附錄 A 中 A.13、半固體瓊脂見附錄 AA.14、 丙二酸鈉培育基見附錄 AA.15、沙門氏菌 OH檢驗(yàn)程序操作步驟前增菌稱取 25 gmL樣品放入盛有 225mLBPW8 000 r/min10 000r/min1 min2min，或置于盛有 225 mL BPW的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min2 minpH1 mol/mL 無菌 NaOH 或 HCl 調(diào) pH 至 6.80.2。無菌操作將樣品轉(zhuǎn)至 500 mL 錐形瓶中，如使用均質(zhì)袋，可直接進(jìn)展培育，于 36 18h18h。如為冷凍產(chǎn)品,應(yīng)在 45 以下不

48、超過 15 min,或 2 518 h增菌輕輕搖動(dòng)培育過的樣品混合物，移取 1mL10 mL TTB42 1 培育 18 h24h1 mL10mL SC36 118 h24 h。分別分別用接種環(huán)取增菌液 1BS 瓊脂平板和一個(gè) XLD或HE 瓊脂平板或沙門氏菌屬顯色培育基平板。于 36 1 分別培育 18 h24 hXLDHE瓊脂平板、沙門氏菌屬顯色培育基平板或40 48 BS瓊脂平板1。生化試驗(yàn)自選擇性瓊脂平板上分別挑取 2面劃線，再于底層穿刺；接種針不要滅菌,直接接種賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培育基和養(yǎng)分瓊脂平板，于 36 1 培育 18h24h，必要時(shí)可延長至 48h。在三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧2。

49、供做靛基 質(zhì)試驗(yàn)、尿素瓊脂pH7.、氰化鉀KC培育基，也可在初步推斷結(jié)果后從養(yǎng)分瓊脂平板上挑取可疑菌落接種。于 36 118 h24 h，必要時(shí)可延長至 48 h，按表 3 判定結(jié)果。將已挑菌落的平板儲(chǔ)存于 2 5 或室溫至少保存 24 h，以備必要時(shí)復(fù)查。反響序號 A1：典型反響判定為沙門氏菌屬。如尿素、KCN 和賴氨酸脫羧酶 3 項(xiàng)中有 142 項(xiàng)特別為非沙門氏菌。反響序號 A2均為陽性，但需要結(jié)合血清學(xué)鑒定結(jié)果進(jìn)展判定。反響序號 A3：補(bǔ)做 ONPG。ONPG 陰性為沙門氏菌，同時(shí)賴氨酸脫羧酶陽性,甲型副傷寒沙門氏菌為賴氨酸脫羧酶陰性。必要時(shí)按表 5如選擇生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化

50、鑒定系統(tǒng)5.4.1 的初步推斷結(jié)試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)展鑒定。血清學(xué)鑒定抗原的預(yù)備一般承受 1.21.5瓊脂培育物作為玻片凝集試驗(yàn)用的抗原。 O 血清不凝集時(shí)，將菌株接種在瓊脂量較高的如 23培育基上再檢查；假設(shè)是由于 Vi 抗原的存在而阻擋了 O 凝集反響時(shí)，可挑取菌苔于 1 mL 生理鹽水中做成濃菌液，于酒精燈火焰上煮沸后再檢查。H 抗原發(fā)育不良時(shí)，將菌株接種在 0.550.65半固體瓊脂平板的中心，俟菌落集中生長時(shí)，在其邊緣局部取菌檢查；或?qū)⒕晖ㄟ^裝有 0.30.4半固體瓊脂的小玻管 12多價(jià)菌體抗原O鑒定在玻片上劃出 2 個(gè)約 1 cm2 cm1 環(huán)待測菌，各放 1/2

51、環(huán)于玻片上的每一區(qū)域上部，在其中一個(gè)區(qū)域下部加 1 滴多價(jià)菌體O抗血清，在另一區(qū)域下部參加1玻片傾斜搖動(dòng)混合 1 min，并對著黑暗背景進(jìn)展觀看，任何程度的凝集現(xiàn)象皆為陽性反響。多價(jià)鞭毛抗原H鑒定同 5.5.2。血清學(xué)分型選做工程O用 AF 多價(jià) O為粗糙形菌株，不能分型。 被 AFOO4；O3、O10；O7；O8； O9；O2O11O 群。被 O3、O10 血清凝集的菌株，再用 O10、O15、O34、O19 單因子血清做凝集試驗(yàn)，判定 E1、E2、E3、E4 各亞群，每一個(gè) OOO用兩個(gè) OAFO 血清凝集者，先用 9 種多價(jià) O檢查，如有其中一種血清凝集，則用這種血清所包括的 OO每種多

52、價(jià) OOO1 A，B，C，D，E，F(xiàn)，群 并包括 6,14 群O2 13，16，17，18，21O3 28，30，35，38，39O4 40，41，42，43 群O5 44，45，47，48 群O6 50，51，52，53 群O7 55，56，57，58 群O8 59，60，61，62 群O9 63，65，66，67 群H屬于 AFO6 所述 H12 相的H不常見的菌型，先用 8 種多價(jià) H或兩種血清所包括的各種 H12 項(xiàng)的 H8 種多價(jià) H血清所包括的 HH多價(jià)1a，b，c，d，iH多價(jià)2eh，enx，enz15，fg，gms，gpu，gp，gq，mt，gz51H多價(jià)3k，r，y，z，z1

53、0，lv，lw，lz13，lz28，lz40H多價(jià)41,2；1,5；1,6；1,7；z6H多價(jià)5z4z23，z4z24，z4z32，z29，z35，z36，z38H多價(jià)6z39，z41，z42，z44H多價(jià)7z52，z53，z54，z55H多價(jià)8z56，z57，z60，z61，z62每一個(gè)HHHH檢出第 1 相 H 抗原而未檢出第 2 相 H 抗原的或檢出第 2 相 H 抗原而未檢出第 1相 H 抗原的,可在瓊脂斜面上移種 12H相變異的方法檢查其另一個(gè)相。單相菌不必做位相變異檢查。位相變異試驗(yàn)方法如下：小玻管法：將半固體管每管約 1mL2mL在酒精燈上溶化并冷至 50 ，取相的 H 因子血清

54、 0.05 mL0.1 mL，參加于溶化的半固體內(nèi)，混勻后，用毛細(xì)吸管吸取分 一相細(xì)菌解離后，可以從另一端挑取細(xì)菌進(jìn)展檢查。培育基內(nèi)血清的濃度應(yīng)有適當(dāng)?shù)谋壤?1：2001：800 的量參加。小倒管法：將兩端開口的小玻管 下端開口要留一個(gè)缺口，不要平齊 放在半固體管內(nèi),小玻管的上端應(yīng)高出于培育基的外表，滅菌后備用。臨用時(shí)在酒精燈上加熱溶化， 冷至 50 ，挑取因子血清 1 環(huán)，參加小套管中的半固體內(nèi)，略加攪動(dòng)，使其混勻，俟凝固后，將待檢菌株接種于小套管中的半固體表層內(nèi)，每天檢查結(jié)果，待另一相細(xì)菌解離后， 可從套管外的半固體外表取菌檢查137 培育后再做凝集試驗(yàn)。簡易平板法：將 0.350.4半

55、固體瓊脂平板烘干外表水分，挑取因子血清 1 滴在半固體平板外表，放置片刻，待血清吸取到瓊脂內(nèi)，在血清部位的中心點(diǎn)種待檢菌株， 培育后，在形成集中生長的菌苔邊緣取菌檢查。Vi用 Vi 因子血清檢查。具有 Vi 抗原的菌型有：傷寒沙門氏菌，丙型副傷寒沙門氏菌,都柏林沙門氏菌。5.5.4.4 菌型的判定依據(jù)血清學(xué)分型鑒定的結(jié)果，依據(jù)附錄 B 或有關(guān)沙門氏菌屬抗原表判定菌型。5 結(jié)果與報(bào)告25gmL樣品中檢出或未檢出沙門氏菌。緩沖蛋白胨水BPW成分A標(biāo)準(zhǔn)性附錄培育基和試劑蛋白胨10.0 g氯化鈉5.0 g磷酸氫二鈉含 12 個(gè)結(jié)晶水 9.0 g磷酸二氫鉀1.5 g蒸餾水1 000 mLpH 7.20.

56、2制法將各成分參加蒸餾水中，攪混均勻，靜置約 10 min，煮沸溶解，調(diào)整 pH，高壓滅菌121 ，15 min。四硫磺酸鈉煌綠TTB增菌液根底液蛋白胨10.0g牛肉膏5.0g氯化鈉3.0g碳酸鈣45.0g蒸餾水1 000mLpH 7.00.2除碳酸鈣外，將各成分參加蒸餾水中，煮沸溶解，再參加碳酸鈣，調(diào)整pH，高壓滅菌121 ，20 min。硫代硫酸鈉溶液硫代硫酸鈉含 5 個(gè)結(jié)晶水50.0 g 蒸餾水加至 100 mL高壓滅菌121，20 min。碘溶液碘 片20.0 g碘化鉀25.0 g蒸餾水加至 100 mL后加蒸餾水至規(guī)定的總量，貯存于棕色瓶內(nèi)，塞緊瓶蓋備用。0.5煌綠水溶液煌綠0.5

57、g蒸餾水100 mL溶解后，存放暗處，不少于 1d，使其自然滅菌。牛膽鹽溶液牛膽鹽10.0 g蒸餾水100 mL加熱煮沸至完全溶解，高壓滅菌 121 ，20 min。制法根底液900 mL硫代硫酸鈉溶液100mL碘溶液20.0mL煌綠水溶液2.0mL牛膽鹽溶液50.0mL臨用前，按上列挨次，以無菌操作依次參加根底液中，每參加一種成分，均應(yīng)搖勻后再參加另一種成分。亞硒酸鹽胱氨酸SC增菌液成分蛋白胨5.0 g乳糖4.0 g磷酸氫二鈉10.0 g亞硒酸氫鈉4.0 gL-胱氨酸0.01 g蒸餾水1 000 mLpH 7.00.2制法除亞硒酸氫鈉和 L-胱氨酸外，將各成分參加蒸餾水中，煮沸溶解，冷至 5

58、5 以下，以無菌操作參加亞硒酸氫鈉和1g/LL10m稱取 0.1gL 1mol/L氫氧化鈉溶液 15mL，使溶解，再加無菌蒸餾水至 100mL 即成，如為 DL-胱氨酸，用量應(yīng)加倍pH。亞硫酸鉍BS瓊脂成分蛋白胨10.0 g牛肉膏5.0 g葡萄糖5.0 g硫酸亞鐵0.3 g磷酸氫二鈉4.0 g煌 綠0.025 g或 5.0gL 水溶液5.0mL檸檬酸鉍銨2.0 g亞硫酸鈉6.0 g瓊 脂18.0 g20 g蒸餾水1 000 mLpH 7.50.2制法將前三種成分參加300mL蒸餾水制作根底液，硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉分別參加20 mL 和 30 mL20 mL30 mL 蒸餾水中，瓊脂參加 600

59、mL 蒸餾水中。然后分別攪拌均勻，煮沸溶解。冷至80 左右時(shí)，先將硫酸pH50 55充分混勻后馬上傾注平皿。48 hHE 瓊脂Hektoen Enteric Agar成分蛋白胨12.0g牛肉膏3.0g乳糖12.0g蔗糖12.0g水楊素2 .0g膽鹽20.0g氯化鈉5.0g瓊脂18.0 g20.0 g蒸餾水1 000 mL0.4溴麝香草酚藍(lán)溶液16.0 mLAndrade 指示劑20.0 mL甲液20.0 mL乙液20.0 mLpH 7.50.2制法將前面七種成分溶解于 400mL 蒸餾水內(nèi)作為根底液;將瓊脂參加于 600mL 蒸餾水內(nèi)。然后分別攪拌均勻，煮沸溶解。參加甲液和乙液于根底液內(nèi),調(diào)整

60、 pH。再參加指示劑,并與50 55 傾注平皿。注:本培育基不需要高壓滅菌，在制備過程中不宜過分加熱，避開降低其選擇性。甲液的配制硫代硫酸鈉34.0 g檸檬酸鐵銨4.0 g蒸餾水100 mL乙液的配制去氧膽酸鈉10.0 g蒸餾水100 mL Andrade 指示劑酸性復(fù)紅0.5 g1mol/L 氫氧化鈉溶液16.0 mL蒸餾水100 mL液 1 mL2 mL。木糖賴氨酸脫氧膽鹽XLD瓊脂成分酵母膏3.0gL-賴氨酸5.0g木糖3.75g乳糖7.5g蔗糖7.5g去氧膽酸鈉2.5g檸檬酸鐵銨0.8g硫代硫酸鈉6.8g氯化鈉5.0g瓊脂15.0g酚紅0.08 g蒸餾水1 000 mLpH 7.40.