狗肝菜多糖對D半乳糖胺所致大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用

1、狗肝菜多糖對D-半乳糖胺所致大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用【摘要】目的觀察狗肝菜多糖對D-半乳糖胺所致大鼠急性肝損傷的影響。方法建立D-半乳糖胺D-GalN誘發(fā)的大鼠急性肝損傷模型，不同濃度狗肝菜多糖干預(yù)后，測定動物血清ALT、AST。肝組織常規(guī)制片及HE染色觀察組織病理學(xué)改變。結(jié)果狗肝菜多糖能使肝損傷動物血清ALT、AST程度顯著降低。組織病理學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)狗肝菜多糖處理后肝組織損害程度降低。結(jié)論狗肝菜多糖對D-半乳糖胺所致大鼠急性肝損傷具有保護(hù)作用。【關(guān)鍵詞】狗肝菜多糖急性肝損傷保肝Abstrat：bjetiveTbservetheeffetftheDilipterahinensisplysahar

2、identheratauteliverinjuryinduedbyD-GalNethdsD-GalN-induedauteliverinjurydelasesablishedinrats.AfteradinistrateddifferentdsefDilipterahinensisplysaharide,ratseruasneatedfrdetetinfthententsfALT,AST.HEstainingasusedtevaluatehistpathlgialhangefliver.ResultsDilipterahinensisplysaharideuldreduetheserunent

3、sfALT,AST,alleviatehistpathlgialinjury.nlusinDilipterahinensisplysaharidehasprtetiveeffetnD-GalN-induedauteliverinjury.Keyrds：Dilipterahinensisplysaharide；Auteliverinjury；Liverprtetin狗肝菜Dilipterahinensis(L.)Nees.是爵床科(Aanthaeae)華九頭獅子草屬(Diliptera)，全草味甘、微苦、性寒，歸心、肝、肺經(jīng)，具有清熱、涼血、利濕、解毒、生津、利尿等成效，臨床常用于治療感冒發(fā)熱、

4、熱病發(fā)斑、暑熱煩渴、吐衄血、便血、尿血、崩漏、肺熱咳嗽、咽喉腫痛、肝熱目赤、眼結(jié)膜炎、小兒驚風(fēng)、小便淋瀝、帶下、帶狀皰疹、癰腫疔癤、蛇犬咬傷等證1，2。?中國藥典?(2022版)部曾收錄，擬定其來源為爵床科植物狗肝菜的枯燥全草1。狗肝菜為廣西民間藥食兩用的中草藥，也是壯族地區(qū)常用壯藥，主要含有多糖、有機(jī)酸、氨基酸等物質(zhì)2。多糖類中藥作為具有抗氧化及免疫調(diào)節(jié)作用，有抗肝炎及肝損傷作用3。本文利用D-半乳糖胺所致大鼠急性肝損傷模型來評價狗肝菜多糖抗肝損傷的作用。1材料1.2藥物與試劑狗肝菜多糖提取方法見參考文獻(xiàn)4，AST谷草轉(zhuǎn)氨酶試劑盒批號：20220818、ALT丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑盒批號：20

5、220808均購自南京建成生物工程研究所。D-半乳糖胺D-GalN:江蘇啟冬化學(xué)，批號：20221108。聯(lián)苯雙酯滴丸：廣州星群藥業(yè)股份，批號：EF40049。1.3儀器及設(shè)備電子天平TP-4101，Denver，超聲波清洗儀B2200S-T，必能信超聲產(chǎn)品，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀BHIB-490，移液器Eppendrf、真空泵SHB-，鄭州長城科工貿(mào)，電熱恒溫水浴鍋DK-S26，上海精細(xì)實驗設(shè)備)，旋渦混合器H-861，上海環(huán)球物化儀器廠)，離心機(jī)(TDL-4，上海安亭科學(xué)儀器廠)，分光光度計(722型，上海第三分析儀器廠)。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2方法2.1D-半乳糖胺致大鼠急性肝損傷模型的建立及藥物

6、處理取安康大鼠36只，雌雄各半，180220g，適應(yīng)性飼養(yǎng)2d，每組6只，隨機(jī)分為空白組，模型組，聯(lián)苯雙酯組陽性藥物對照組，狗肝菜多糖高、中、低劑量組。聯(lián)苯雙酯組劑量為50gkg-1；狗肝菜多糖高、中、低劑量組狗肝菜多糖劑量分別為300，200，100gkg-1。除空白對照組和模型組給予等體積生理鹽水外，各組均灌胃給藥，1次/d，連續(xù)7d。第6天給藥1h后，除空白對照組腹腔注射等體積生理鹽水外，其余各組分別腹腔注射D-半乳糖胺400gkg-1，禁食不禁水，末次給藥1h后，摘除眼球取血，放置1h，3000r/in離心，取上清液，20冰箱中保存，檢測生化指標(biāo)ALT、AST；快速取出肝臟，取肝左葉一

7、樣部位組織于4%中性緩沖福爾馬林溶液中固定16h，常規(guī)石蠟包埋及切片，HE染色。2.2統(tǒng)計學(xué)方法各項指標(biāo)均s，統(tǒng)計軟件SPSS11.5對組間比擬進(jìn)展獨立樣本t檢驗。3結(jié)果3.1血清學(xué)指標(biāo)結(jié)果見表1。其中模型組血清ALT和AST兩種轉(zhuǎn)氨酶活性均明顯高于空白組說明模型建立成功。狗肝菜多糖高、中、低劑量組血清ALT、AST程度均較模型組明顯降低，其中高、中劑量組有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。表1D-半乳糖胺肝損傷模型的血清學(xué)改變略3.2組織病理學(xué)改變D-半乳糖胺模型組肝損傷嚴(yán)重，肝小葉中央大局部區(qū)域肝細(xì)胞水腫，出現(xiàn)肝細(xì)胞的碎片狀壞死，小葉周邊肝細(xì)胞中至重度脂肪變性；陽性對照組和高劑量組病理改變一樣，中

8、央靜脈周圍肝細(xì)胞輕度水腫，出現(xiàn)少量點狀壞死；多糖中劑量組肝小葉中央肝細(xì)胞水腫及周邊少量肝細(xì)胞輕度脂肪變性，出現(xiàn)散在點狀壞死；多糖低劑量組中央靜脈嚴(yán)重水腫，有散在點狀壞死及碎片狀壞死，小葉周邊肝細(xì)胞輕至中度脂肪變性。見圖1。4討論D-半乳糖胺是肝細(xì)胞磷酸尿嘧啶核苷的干擾劑，當(dāng)D-GalN進(jìn)入體內(nèi)后與磷酸尿苷UDP結(jié)合形成UDP-半乳糖胺致使UDP耗竭，從而使依賴其生物合成的核酸、糖蛋白、脂肪、糖等物質(zhì)合成受到抑制，限制了細(xì)胞器及酶的生成和補(bǔ)充，導(dǎo)致肝細(xì)胞受損。因此，D-GalN肝損傷模型可用于抗病毒性肝炎藥物的研究5。肝細(xì)胞損傷時，ALT、AST從胞漿內(nèi)釋放并進(jìn)入血液，血清中ALT、AST升高。血清學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)狗肝菜多糖可使D-GalN所致大鼠肝損傷模型ALT、AST程度下降；大鼠肝臟病變明顯減輕,用高、中、低劑量的狗肝菜多糖處理后，大鼠肝組織細(xì)胞水腫及脂肪變性均較模型組明顯減少，其中以狗肝菜多糖高劑量組的作用最明顯,效果與聯(lián)苯雙酯治療組相當(dāng),說明狗肝菜多糖對D-GalN所致肝損害有一定的保護(hù)作用,且其作用效應(yīng)與應(yīng)用劑量有關(guān)。但有關(guān)狗肝菜多糖保護(hù)肝細(xì)胞確實切機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1中國藥典委員會.中國藥典S.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2022:369.2鄭宏鈞，詹亞華.現(xiàn)代中藥材鑒別手冊.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2001:837.3黃皓,干信