ABI7500熒光定量PCR儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、ABI7500 熒光定量 PCR 儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程目的為規(guī)范使用人正確和正常的使用ABI 7500析的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化，特制定本規(guī)程。適用范圍適用于本公司 ABI7500 熒光定量 PCR 儀的操作。職責(zé)使用人員負(fù)責(zé)本規(guī)程的實(shí)施。設(shè)備使用人負(fù)責(zé)設(shè)備維護(hù)保養(yǎng)工作；設(shè)備責(zé)任人負(fù)責(zé)設(shè)備的定期維護(hù)保養(yǎng)工作。質(zhì)量監(jiān)督員負(fù)責(zé)監(jiān)督本規(guī)程的實(shí)施。內(nèi)容程序設(shè)置power綠色狀態(tài)。7500 software V2.3 OK，待軟件連接儀（USB 線接口Design Wizard選項(xiàng)，紅色箭頭指示位置有個(gè)下拉菜單，如下圖所示。下拉菜單中有一個(gè) Advanced Setup（高級設(shè)置）選項(xiàng)，如箭頭所示：第 1 頁 共 1

2、0 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程點(diǎn)擊這個(gè)選項(xiàng)，可以進(jìn)入下面這個(gè)界面，儀器型號和反應(yīng)程序類型。（帶*號 的必需填）第 2 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程此圖是上面圖的延續(xù)（自己電腦顯示不完全，紅色箭頭從上到下指示的分別是Plate Setup 選項(xiàng)、探針類型和TaqMan 探針，速度類型選擇默認(rèn)就可以了（7500fast 的話則有快速模式可以選擇Plate Setup 選項(xiàng)，點(diǎn)擊這個(gè)選項(xiàng)，就可以進(jìn)入下一個(gè)設(shè)置界面。 紅色箭頭和指的是設(shè)定反應(yīng)探針和反應(yīng)樣品名稱，箭頭處可以填寫反應(yīng)探針名稱（P1,HB,HCFATAMRA BHQ，在這個(gè)儀器中無

3、此選擇none。箭頭處可以填寫樣品名稱。點(diǎn)擊箭頭和箭頭處可以添加反應(yīng)探和箭頭（另：探針跟樣品設(shè)定后可保存，方便以后實(shí)驗(yàn)調(diào)用，具體是點(diǎn)擊箭頭下面第 3 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的 Saved Taeget，下次調(diào)用則點(diǎn)擊 Add Saved 就可調(diào)出。）1 DAAN 1 HBV1成之后，我們點(diǎn)擊紅色箭頭所指的選項(xiàng)，進(jìn)入下個(gè)界面。48 個(gè)反應(yīng)孔空余。藍(lán)色箭頭和分別是放大這個(gè)孔板界面的按鈕，藍(lán)色箭頭顯示大小還原默認(rèn)設(shè)置按鈕。A1 紅色箭頭U指示的框里第 4 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程是個(gè)指示的參比熒光，儀器默認(rèn)是ROX，但

4、是產(chǎn)品一般沒有添加ROX None4567 升序或7654 降序的排列，單擊可彈出以下界面，具體如下。表示起始的濃度，表示 10的話則為升序，按照 4567 的濃度；1:10 的話則為降序，按照 7654 的濃度。4 1 個(gè)（即沒有做復(fù)孔10000，選擇10，選擇箭頭Apply10 4567 排列。此外也可以選擇鼠標(biāo)雙擊類似反應(yīng)孔板的那個(gè)界面，會出現(xiàn)下面這個(gè)界面：第 5 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程如上圖所示，選定反應(yīng)孔雙擊后會出現(xiàn)這樣一個(gè)界面，紅色箭頭指示的 樣品反應(yīng)類型，紅色箭頭反應(yīng)探針，紅色箭頭Sample樣品名稱。指示的Run Method 選項(xiàng)進(jìn)入

5、下個(gè)界面。上圖的箭頭和（1 2 第 6 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程會有出現(xiàn)藍(lán)色的錯誤提示）設(shè)定好循環(huán)條件就可以進(jìn)行模板保存以便下次實(shí)驗(yàn)時(shí)調(diào)用程序點(diǎn)擊位于軟件中間右方的（注這個(gè)鍵是由于本人電腦不是寬屏（14 寸acer。如果是AB配的電腦則可以在軟件上全部顯示，不會出現(xiàn)鍵或是那些滑動條，但是。字體會小點(diǎn)，選擇保存運(yùn)行的模板，命名。下次實(shí)驗(yàn)使用的時(shí)候就不用再在設(shè)條件，直接點(diǎn)擊open method，調(diào)出你所需要做的實(shí)驗(yàn)的擴(kuò)增條件。reaction setup（反應(yīng)體系設(shè)置）materials list（耗材清單）去設(shè)置。點(diǎn)擊箭頭所指的 run 進(jìn)入運(yùn)行界面。S

6、TART START按鈕右方可出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)的預(yù)計(jì)剩余時(shí)間。箭頭件。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后按箭頭所指的分析，出現(xiàn)以下界面。第 7 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程做完實(shí)驗(yàn)后，曲線會出現(xiàn)在上圖，以對數(shù)圖譜的形式出現(xiàn)，若想換為線性圖譜，可點(diǎn)擊箭頭log linear，其次，再點(diǎn)擊箭頭的分析按鈕（有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的話會出現(xiàn)analysiCT 96 孔面板中出現(xiàn)，上面的顯示不完全，曲線的baseline threshold 設(shè)置是在上圖數(shù)字（不是箭頭所指的地方進(jìn)行設(shè)置。箭頭表示的是實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的參數(shù)。 箭頭箭頭表示的是一些附加的報(bào)警信息，例如重復(fù)孔偏差了，熒光偏差了，質(zhì)控失控了。箭頭表示的是上

7、面 4 中圖譜的集合，可自己選擇組合查看。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后填寫設(shè)備使用記錄結(jié)果分析analysis setup baselinethreshold數(shù)值，點(diǎn)擊綠色analyze軟件及完成自動分析。amplification plot 界面查看所有樣品的擴(kuò)增曲線。整體曲線的觀察,將所有曲線選中進(jìn)行整體觀察。觀察是否存在污染情況（包括標(biāo)本污染和試劑污染，特別應(yīng)注意大量曲線在同一 Ct值出現(xiàn)上漲的情況。觀察是否有光路傳導(dǎo)阻滯或電壓波動等機(jī)器原因形成的異常曲線。對照、質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)品的分析陰性對照：試劑中加入與待檢標(biāo)本進(jìn)行同樣處理的已知陰性標(biāo)本。第 8 頁 共 10 頁ABI7500 ABI7500 熒光定量

8、PCR 儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程作用：用以監(jiān)測實(shí)驗(yàn)室和前處理過程中是否存在污染。作用：用以監(jiān)測實(shí)驗(yàn)?zāi)芊裾z出陽性標(biāo)本，避免假陰性的出現(xiàn)。知或未知濃度的陽性室內(nèi)質(zhì)控血清。作用：用以監(jiān)控日常實(shí)驗(yàn)的精密度。性標(biāo)準(zhǔn)品稀釋可能存在問題，提示實(shí)驗(yàn)中存在較大人為誤差。Ct 值是否在平日的正常位置：Ct （試劑過期或保存條件不合格。出現(xiàn)低拷貝標(biāo)準(zhǔn)品做不出，而高拷貝曲線 Ct 值均正常，則提示可能存在低拷貝陽性標(biāo)準(zhǔn)品的降解情況。若高拷貝標(biāo)準(zhǔn)品出現(xiàn) Ct 值后移，且能排除上述情況，則判斷是否為試劑靈敏度下降。得出定量結(jié)果：調(diào)節(jié)基線和閾值以得到一較好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。電腦據(jù)此曲線給出實(shí)驗(yàn)結(jié)果值。儀器維護(hù)注意開機(jī)關(guān)機(jī)順序，機(jī)器開機(jī)后即可使用，無需預(yù)熱。U盤等移動存儲設(shè)備，建議使用光盤刻錄來轉(zhuǎn)移數(shù)據(jù)。（比如光盤）儀器表面與電腦表面應(yīng)每月用軟布擦拭（漆層。燈泡更換：在燈泡使用達(dá)到壽命后（2000 小時(shí)，或者意外損壞后需要更換。機(jī)器關(guān)閉30 意燈泡高溫。然后將新燈泡，用氣吹吹掉表面的灰塵，安裝燈泡。樣品孔清潔：樣品孔污染后會影響PCR 擴(kuò)增的信號，是的該孔信號高于其他孔，造成假background72000 的孔，使用棉簽與去離子水進(jìn)行清潔。清潔時(shí)關(guān)閉機(jī)器電源，打開前面上半面板，將熱蓋板（黑色面板）background72000。6 ROI校正。儀器在搬運(yùn)后需要進(jìn)行背景校正、純熒光校正和ROI驗(yàn)。第 9 頁 共 10