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文檔簡介
1、ABI7500 熒光定量 PCR 儀標準操作規(guī)程目的為規(guī)范使用人正確和正常的使用ABI 7500析的標準化、規(guī)范化,特制定本規(guī)程。適用范圍適用于本公司 ABI7500 熒光定量 PCR 儀的操作。職責使用人員負責本規(guī)程的實施。設(shè)備使用人負責設(shè)備維護保養(yǎng)工作;設(shè)備責任人負責設(shè)備的定期維護保養(yǎng)工作。質(zhì)量監(jiān)督員負責監(jiān)督本規(guī)程的實施。內(nèi)容程序設(shè)置power綠色狀態(tài)。7500 software V2.3 OK,待軟件連接儀(USB 線接口Design Wizard選項,紅色箭頭指示位置有個下拉菜單,如下圖所示。下拉菜單中有一個 Advanced Setup(高級設(shè)置)選項,如箭頭所示:第 1 頁 共 1
2、0 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標準操作規(guī)程點擊這個選項,可以進入下面這個界面,儀器型號和反應(yīng)程序類型。(帶*號 的必需填)第 2 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標準操作規(guī)程此圖是上面圖的延續(xù)(自己電腦顯示不完全,紅色箭頭從上到下指示的分別是Plate Setup 選項、探針類型和TaqMan 探針,速度類型選擇默認就可以了(7500fast 的話則有快速模式可以選擇Plate Setup 選項,點擊這個選項,就可以進入下一個設(shè)置界面。 紅色箭頭和指的是設(shè)定反應(yīng)探針和反應(yīng)樣品名稱,箭頭處可以填寫反應(yīng)探針名稱(P1,HB,HCFATAMRA BHQ,在這個儀器中無
3、此選擇none。箭頭處可以填寫樣品名稱。點擊箭頭和箭頭處可以添加反應(yīng)探和箭頭(另:探針跟樣品設(shè)定后可保存,方便以后實驗調(diào)用,具體是點擊箭頭下面第 3 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標準操作規(guī)程的 Saved Taeget,下次調(diào)用則點擊 Add Saved 就可調(diào)出。)1 DAAN 1 HBV1成之后,我們點擊紅色箭頭所指的選項,進入下個界面。48 個反應(yīng)孔空余。藍色箭頭和分別是放大這個孔板界面的按鈕,藍色箭頭顯示大小還原默認設(shè)置按鈕。A1 紅色箭頭U指示的框里第 4 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標準操作規(guī)程是個指示的參比熒光,儀器默認是ROX,但
4、是產(chǎn)品一般沒有添加ROX None4567 升序或7654 降序的排列,單擊可彈出以下界面,具體如下。表示起始的濃度,表示 10的話則為升序,按照 4567 的濃度;1:10 的話則為降序,按照 7654 的濃度。4 1 個(即沒有做復孔10000,選擇10,選擇箭頭Apply10 4567 排列。此外也可以選擇鼠標雙擊類似反應(yīng)孔板的那個界面,會出現(xiàn)下面這個界面:第 5 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標準操作規(guī)程如上圖所示,選定反應(yīng)孔雙擊后會出現(xiàn)這樣一個界面,紅色箭頭指示的 樣品反應(yīng)類型,紅色箭頭反應(yīng)探針,紅色箭頭Sample樣品名稱。指示的Run Method 選項進入
5、下個界面。上圖的箭頭和(1 2 第 6 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標準操作規(guī)程會有出現(xiàn)藍色的錯誤提示)設(shè)定好循環(huán)條件就可以進行模板保存以便下次實驗時調(diào)用程序點擊位于軟件中間右方的(注這個鍵是由于本人電腦不是寬屏(14 寸acer。如果是AB配的電腦則可以在軟件上全部顯示,不會出現(xiàn)鍵或是那些滑動條,但是。字體會小點,選擇保存運行的模板,命名。下次實驗使用的時候就不用再在設(shè)條件,直接點擊open method,調(diào)出你所需要做的實驗的擴增條件。reaction setup(反應(yīng)體系設(shè)置)materials list(耗材清單)去設(shè)置。點擊箭頭所指的 run 進入運行界面。S
6、TART START按鈕右方可出現(xiàn)實驗的預(yù)計剩余時間。箭頭件。實驗結(jié)束后按箭頭所指的分析,出現(xiàn)以下界面。第 7 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標準操作規(guī)程做完實驗后,曲線會出現(xiàn)在上圖,以對數(shù)圖譜的形式出現(xiàn),若想換為線性圖譜,可點擊箭頭log linear,其次,再點擊箭頭的分析按鈕(有實驗數(shù)據(jù)的話會出現(xiàn)analysiCT 96 孔面板中出現(xiàn),上面的顯示不完全,曲線的baseline threshold 設(shè)置是在上圖數(shù)字(不是箭頭所指的地方進行設(shè)置。箭頭表示的是實驗標準曲線的參數(shù)。 箭頭箭頭表示的是一些附加的報警信息,例如重復孔偏差了,熒光偏差了,質(zhì)控失控了。箭頭表示的是上
7、面 4 中圖譜的集合,可自己選擇組合查看。實驗結(jié)束后填寫設(shè)備使用記錄結(jié)果分析analysis setup baselinethreshold數(shù)值,點擊綠色analyze軟件及完成自動分析。amplification plot 界面查看所有樣品的擴增曲線。整體曲線的觀察,將所有曲線選中進行整體觀察。觀察是否存在污染情況(包括標本污染和試劑污染,特別應(yīng)注意大量曲線在同一 Ct值出現(xiàn)上漲的情況。觀察是否有光路傳導阻滯或電壓波動等機器原因形成的異常曲線。對照、質(zhì)控品、標準品的分析陰性對照:試劑中加入與待檢標本進行同樣處理的已知陰性標本。第 8 頁 共 10 頁ABI7500 ABI7500 熒光定量
8、PCR 儀標準操作規(guī)程作用:用以監(jiān)測實驗室和前處理過程中是否存在污染。作用:用以監(jiān)測實驗?zāi)芊裾z出陽性標本,避免假陰性的出現(xiàn)。知或未知濃度的陽性室內(nèi)質(zhì)控血清。作用:用以監(jiān)控日常實驗的精密度。性標準品稀釋可能存在問題,提示實驗中存在較大人為誤差。Ct 值是否在平日的正常位置:Ct (試劑過期或保存條件不合格。出現(xiàn)低拷貝標準品做不出,而高拷貝曲線 Ct 值均正常,則提示可能存在低拷貝陽性標準品的降解情況。若高拷貝標準品出現(xiàn) Ct 值后移,且能排除上述情況,則判斷是否為試劑靈敏度下降。得出定量結(jié)果:調(diào)節(jié)基線和閾值以得到一較好的標準曲線。電腦據(jù)此曲線給出實驗結(jié)果值。儀器維護注意開機關(guān)機順序,機器開機后即可使用,無需預(yù)熱。U盤等移動存儲設(shè)備,建議使用光盤刻錄來轉(zhuǎn)移數(shù)據(jù)。(比如光盤)儀器表面與電腦表面應(yīng)每月用軟布擦拭(漆層。燈泡更換:在燈泡使用達到壽命后(2000 小時,或者意外損壞后需要更換。機器關(guān)閉30 意燈泡高溫。然后將新燈泡,用氣吹吹掉表面的灰塵,安裝燈泡。樣品孔清潔:樣品孔污染后會影響PCR 擴增的信號,是的該孔信號高于其他孔,造成假background72000 的孔,使用棉簽與去離子水進行清潔。清潔時關(guān)閉機器電源,打開前面上半面板,將熱蓋板(黑色面板)background72000。6 ROI校正。儀器在搬運后需要進行背景校正、純熒光校正和ROI驗。第 9 頁 共 10
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