蛻皮甾酮在大鼠非酒精性脂肪性肝病中的保護(hù)作用

1、蛻皮甾酮在大鼠非酒精性脂肪性肝病中的保護(hù)作用【摘要】目的研究蛻皮甾酮對非酒精性脂肪性肝病大鼠模型的防治作用并探究其可能的作用機(jī)制。方法采用改進(jìn)高脂膳食喂養(yǎng)法建立大鼠非酒精性脂肪性肝病模型。SD大鼠48只,隨機(jī)分為正常對照組、模型組、蛻皮甾酮處理組與吡格列酮處理組,每組12只。模型組應(yīng)用改進(jìn)高脂飼料喂養(yǎng),蛻皮甾酮組與吡格列酮組在高脂飼料喂養(yǎng)同時(shí)應(yīng)用藥物灌胃，正常對照組應(yīng)用根底飼料喂養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)12周末，處死所有大鼠，觀察檢測肝臟指數(shù),血清與肝組織生化指標(biāo)及肝組織病理改變。結(jié)果蛻皮甾酮組和吡格列酮組血清膽固醇(T)、甘油三酯(TG)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)明顯低于模

2、型組;蛻皮甾酮和吡格列酮組與模型組相比肝組織丙二醛(DA)程度降低明顯,超氧化物歧化酶(SD)活力增加顯著;蛻皮甾酮肝臟指數(shù)顯著降低;肝組織脂肪變性程度和炎癥活動度明顯減輕。結(jié)論蛻皮甾酮具有改善高脂飲食誘發(fā)的非酒精性脂肪性肝病大鼠肝臟酶學(xué)，通過增加肝組織SD的含量和減少DA的含量來減輕肝組織氧化應(yīng)激程度，發(fā)揮防治非酒精性脂肪性肝病的作用?！娟P(guān)鍵詞】非酒精性脂肪性肝病;蛻皮甾酮;肝指數(shù);病理檢查;氧化應(yīng)激Keyrds：Nnalhlifattyliverdisease;Edysterne;Liverindex;Pathlgialexainatin;xidativestress1材料SPF級SD大鼠

3、48只,由瀘州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供,體質(zhì)量150180g。膽固醇膽酸鈉購于重慶騰鑫生物技術(shù);丙硫氧嘧啶片購于上海朝暉藥業(yè);鹽酸吡格列酮為江蘇恒瑞醫(yī)藥股份產(chǎn)品;蛻皮甾酮為昆明昌寧德康生物科技提供;丙二醛(DA)、超氧化物歧化酶(SD)測定試劑盒購自南京建成生物工程研究所。2方法2.1分組48只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后按完全隨機(jī)分組原那么分為4組，正常對照組(n=12)，模型組(n=12)，蛻皮甾酮(10gkg-1d-1)治療組(n=12)和吡格列酮處理組(n=12)。正常對照組喂以普通根底飼料;模型組采用改進(jìn)高脂飼料喂養(yǎng)(改進(jìn)高脂飼料配方為:膽固醇2%，膽酸鈉0.5%，丙硫氧嘧啶0.2%，蔗糖

4、5%，豬油10%，根底飼料82.3%)3;蛻皮甾酮治療組在改進(jìn)高脂飼料喂養(yǎng)的同時(shí)予蛻皮甾酮(10gkg-1d-1)灌胃;吡格列酮處理組在高脂飼料喂養(yǎng)的同時(shí)予吡格列酮灌胃。各種藥物均溶于生理鹽水，正常對照組和模型組給予等量生理鹽水灌胃。各組自由飲水進(jìn)食，于12周末處死。大鼠處死前，均隔夜禁食;稱取體質(zhì)量;次日以0.2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，心臟采血;翻開腹腔，首先肉眼觀察肝臟情況，然后迅速取出肝臟稱肝濕重;取肝左葉組織1.0g,4研磨制備成100g/L的肝組織勻漿;取肝左葉同部位組織1塊,40g/L中性甲醛溶液固定。2.2肝指數(shù)計(jì)算處死大鼠時(shí)，稱量體質(zhì)量及肝臟濕重。肝指數(shù)(%)=肝濕質(zhì)量/體質(zhì)

5、量100%。2.3生化指標(biāo)檢測血樣經(jīng)離心,取血清,使用全自動生化分析儀測定丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、膽固醇(T)、甘油三酯(TG)等指標(biāo)。肝組織勻漿超氧化物歧化酶(SD)活性和丙二醛(DA)含量按試劑盒說明操作。2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS14.0軟件進(jìn)展統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,計(jì)量資料以s表示;采用t檢驗(yàn)，組間比擬采用方差分析，P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.3結(jié)果3.1一般情況實(shí)驗(yàn)期間對照組動物精神充分,靈敏好動,進(jìn)食飲水正常,皮毛光澤度好,體質(zhì)量持續(xù)小幅增長;蛻皮甾酮組大鼠一般情況也較好;模型組大鼠身體肥胖,體毛混亂,色澤蠟黃,精神萎靡,反響緩慢。3.2

6、肝指數(shù)及體質(zhì)量模型組和蛻皮甾酮處理組各有1只大鼠因灌胃窒息而死亡。吡格列酮處理組有2只大鼠因灌胃窒息死亡。實(shí)驗(yàn)完畢時(shí)模型組體質(zhì)量、肝濕重和肝指數(shù)明顯增高，與正常對照組比擬有顯著性差異;而蛻皮甾酮組、吡格列酮組體質(zhì)量、肝濕重和肝指數(shù)明顯降低，與模型組比擬有顯著性差異;蛻皮甾酮處理組和吡格列酮處理組之間無顯著性差異(P0.05)。結(jié)果見表1。表1各組大鼠體質(zhì)量、肝濕重、肝指數(shù)測定結(jié)果與正常對照組相比擬，*P0.01;與模型組比擬，P0.05;#P0.013.3生化指標(biāo)3.3.1血清生化指標(biāo)模型組大鼠血清ALT，AST較正常組明顯升高(P0.01);蛻皮甾酮處理組和吡格列酮處理組大鼠血清ALT，AS

7、T與模型組相比顯著下降(P0.05);蛻皮甾酮處理組和吡格列酮處理組之間差異無顯著性(P0.05)。與正常組相比，模型組大鼠血清T程度明顯升高(P0.01)，TG程度與正常組根本相似。與模型組相比，蛻皮甾酮處理組和吡格列酮處理組血清TG無顯著改變，而T程度卻顯著下降(P0.05)，兩組間無明顯差異。結(jié)果見表2。3.3.2肝組織氧應(yīng)激、脂質(zhì)過氧化程度指標(biāo)與正常對照組大鼠相比，模型組大鼠血清DA含量顯著增高(P0.01)，SD活力明顯下降(P0.01)，蛻皮甾酮處理組和吡格列酮處理組DA程度顯著低于模型組(P0.01),而高于正常對照組;蛻皮甾酮處理組和吡格列酮處理組SD活力顯著高于模型組(P0.

8、01),而低于空白對照組，兩組間差異不明顯。見表2。表2各組大鼠血清生化指標(biāo)及肝組織勻漿SD、DA的含量與正常對照組比擬，*P0.01;與模型組比擬，P0.05;#P0.013.4肝組織病理學(xué)結(jié)果肉眼下觀察，正常對照組肝臟顏色紅潤,外表光滑,質(zhì)軟;模型組肝臟體積明顯增大,飽滿圓鈍，色黃油膩,質(zhì)脆;蛻皮甾酮處理組和吡格列酮處理組肝臟體積較正常對照組增大，邊緣稍鈍，但大多顏色紅潤,油膩程度較模型組明顯減輕。HE染色光鏡下觀察,正常對照組肝細(xì)胞排列整齊,肝組織形態(tài)學(xué)正常(圖1);模型組表現(xiàn)為彌漫性中度或重度脂肪變性,以大泡性脂肪變?yōu)橹?，肝?xì)胞腫脹呈氣球樣變,大小不均,胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)大小不一的脂滴，肝細(xì)胞

9、核被擠壓移位,并可見炎性細(xì)胞浸潤(圖2)。蛻皮甾酮處理組和吡格列酮處理組表現(xiàn)為肝組織輕、中度脂肪變性,脂滴較模型組明顯減少(圖34)。模型組肝組織可見不同程度的匯管區(qū)炎癥及小葉內(nèi)炎癥;肝小葉內(nèi)和匯管區(qū)出現(xiàn)以單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞浸潤，臨近的脂變肝細(xì)胞可見氣球樣變肝細(xì)胞，局部大鼠肝組織小葉內(nèi)可見壞死灶交融成小片狀，并有1例出現(xiàn)碎屑樣壞死，1例出現(xiàn)橋接壞死，2例出現(xiàn)脂肪囊腫，2例出現(xiàn)輕度肝纖維化;蛻皮甾酮和吡格列酮治療組肝臟存在匯管區(qū)炎癥及小葉內(nèi)炎癥,未見肝細(xì)胞水樣變性及壞死,炎癥細(xì)胞浸潤較輕。據(jù)公式P+L+2PN+2BN計(jì)算各組的炎癥活動度積分，模型組與正常組比擬肝臟炎癥活動度計(jì)數(shù)差異

10、顯著(P0.01)，蛻皮甾酮和吡格列酮治療組大鼠肝組織呈輕、中度肝細(xì)胞脂肪變性，無大泡性脂肪變形成，小葉內(nèi)、匯管區(qū)炎癥壞死減輕，未見碎屑樣壞死和橋接壞死，肝臟炎癥活動度計(jì)數(shù)較模型組明顯下降(P0.01)，但組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表3。表3各組大鼠肝臟病理學(xué)結(jié)果分析4討論ER有多種藥理學(xué)作用，如促進(jìn)核糖核酸和蛋白質(zhì)合成，影響糖脂代謝，抗氧化應(yīng)激，免疫調(diào)節(jié)、降血脂、抗氧化、抗纖維化和改善肝功能的作用2。aiYJ7等研究說明，蛻皮素有抗氧化和去除自由基的作用，而且口服蛻皮素(0.1gkg-1d-1)30d以上可以降低細(xì)胞膜的脂質(zhì)氧化反響。本研究結(jié)果顯示，與模型組相比蛻皮甾酮組肝組織DA的含量明

11、顯減少，而SD的含量明顯增加，這明蛻皮甾酮在治療大鼠非酒精性脂肪性肝病時(shí)，可能通過增加肝組織SD的含量和減少DA的含量來減輕肝組織氧化應(yīng)激程度，發(fā)揮抗氧化與肝臟保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)采用改進(jìn)高脂膳食成功復(fù)制了大鼠非酒精性脂肪性肝病的模型，大鼠脂肪肝程度隨造模時(shí)間延長而加重。在高脂膳食的同時(shí)，應(yīng)用蛻皮甾酮灌胃干預(yù)脂肪肝，結(jié)果用藥后肝臟指數(shù)及血清中T及TG程度下降，肝功能、抗氧化才能改善;說明蛻皮甾酮具有預(yù)防大鼠血脂增高，減少肝臟對游離脂肪酸的吸收,去除肝內(nèi)甘油三酯作用;有去除機(jī)體自由基,增強(qiáng)抗氧化才能的作用,可以調(diào)節(jié)和改善自由基代謝平衡，保護(hù)肝細(xì)胞;能降低肝細(xì)胞膜的通透性,減少血中ALT，AST的程度，維持肝功能的正常;病理檢查進(jìn)一步證實(shí)肝組織脂肪變性及炎癥活動程度減